Практикум по биохимии (стр. 9 )

Результат: ___________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

На витамин D

Принцип метода. Витамин D при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет, при взаимодействии с раствором брома в хлороформе — в зеленовато-голубой.

Реактивы:

1)  анилиновый реактив (15 частей анилина и 1 часть концентрированной соляной кислоты);

2)  хлороформ;

3)  раствор брома в обезвоженном хлороформе в соотношении 1:60;

4)  масляный раствор эргокальциферола — 1,25 г/л.

Ход работы

Реакция на витамин D с анилином. В сухую пробирку вносят 2 капли масляного раствора эргокальциферола, 10 капель хлороформа и 1—2 капли анилинового реактива, осторожно нагревают при постоянном помешивании. Отмечают результат реакции.

Реакция на витамин D с бромхлороформом. В сухую пробирку вносят 2—3 капли раствора эргокальциферола и 2-4 капли раствора брома в хлороформе. Отмечают полученный результат.

Результат: __________________________________________________________________

____________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

На викасол

Принцип метода Викасол в присутствии цистеина в щелочной среде окрашивается в лимонно-желтый цвет.

Реактивы:

1)  раствор цистеина — 0,25 г/л;

2)  раствор едкого натра -100 г/л;

3)  раствор викасола — 0,5 г/л.

Ход работы: К 5 каплям раствора викасола добавляют равное количество раствора цистеина и 1 каплю раствора едкого натра. Отмечают результат реакции.

Результат: __________________________________________________________________

____________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

На витамин Е

Принцип метода. Спиртовой раствор витамина Е в присутствии концентрированной азотной кислоты окисляется в хиноидное соединение, окрашенное в красный цвет.

Реактивы:

1)  витамин Е, 0,1 % спиртовой раствор;

2)  концентрированная азотная кислота;

3)  сахароза в порошке.

Ход работы: В сухую пробирку вносят 6 капель 0,1 % спиртового раствора витамина Е, добавляют несколько крупинок сахарозы. Осторожно по стенке пробирки прибавляют 10 капель концентрированной азотной кислоты. Пробирку слегка встряхивают. Через 1—2 мин наблюдают красное или желтовато-красное окрашивание.

Результат: ___________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

IX. ЛИПИДЫ

Влияние желчи на активность липазы

Принцип метода. Если к молоку добавить немного липазы и подщелочить полученную смесь до розовой окраски по фенолфталеину, то при стоянии в водяной бане при 37°С жидкость постепенно обесцвечивается. Это объясняется тем, что под действием липазы освобождаются высшие жирные кислоты и рН смещается в сторону более низких значений. Обесцвечивание в этом опыте ускоряется при добавлении желчи. Это объясняется тем, что липаза активируется солями желчных кислот.

Реактивы:

4)  панкреатин (вытяжка из поджелудочной железы, содержащая липазу), 5% раствор;

5)  фенолфталеин, 0,5% спиртовой раствор;

3)0,05 и. раствор №ОН;

6)  молоко, прокипяченное и предварительно разведенное дистиллированной водой в соотношении 1:1.

Ход работы: В 2 пробирки вносят по 1 мл молока и по 1 капле раствора фенолфталеина. В каждую пробирку добавляют по каплям раствор гидроксида натрия до слабо-розовой окраски по фенолфталеину. В каждую пробирку вносят по 2 капли вытяжки липазы, а в пробирку 1, кроме того, и каплю желчи. Пробирки помещают в водяную баню при 37 С и отмечают время обесцвечивания фенолфталеина в опыте с желчью и без нее.

Результат: ______________________________________________________

_____________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эмульгирование жира

Принцип метода Жиры, чтобы подвергнуться расщеплению липазами в желудочно-кишечном тракте, должны быть предварительно эмульгированы. Основными эмульгаторами жира в пищеварительном тракте являются желчные кислоты. Белки, мыла, соли угольной кислоты, содержащиеся в некотором количестве в двенадцатиперстной кишке, также эмульгируют жиры.

Взбалтывая жир с водой, можно наблюдать образование расслаивающейся, нестойкой эмульсии. Добавляя поверхностно-активные вещества, можно получить стойкую эмульсию. Эмульгаторы легко адсорбируются на поверхности раздела двух фаз, образуя тончайшую пленку, которая препятствует слиянию капелек эмульсии.

Ход работы: в 5 пробирок наливают по 3 капли растительного масла. В первую пробирку добавляют 20 капель дистиллированной воды, во вторую — 20 капель желчи, в третью — 20 капель 1 % раствора яичного белка, в четвертую — 20 капель I % раствора мыла, а в пятую — 20 капель 1 % раствора карбоната натрия. Все пробирки тщательно взбалтывают. Через 5 мин оценивают сохранение эмульсии.

Оценка	Мыло	Вода	Желчь	Белок	Сода
Стабильность эмульсии
Степень дисперсности эмульсии

Вывод______________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Качественные реакции на холестерин

По химической природе холестерин является циклическим ненасыщенным вторичным спиртом. В основе реакций лежит его способность образовывать окрашенные соединения в присутствии серной кислоты и уксусного ангидрида. Этой способностью пользуются для количественного определения холестерина в крови.

Реактивы:

1.  холестерин, 1% раствор в хлороформе;

2.  серная кислота, концентрированная;

3.  уксусный ангидрид.

4.  1% хлороформный раствор;

5.  бромная вода.

6.  ледяная уксусная кислота.

Ход работы

Реакция Сальковского. Под действием концентрированной серной кислоты происходит дегидратация холестерина, конденсация образовавшихся продуктов в виде непредельных углеводородов, соединяющихся с образованием окрашенных продуктов. В сухую пробирку вносят 10 капель раствора холестерина и осторожно по стенке пробирки наслаивают 0,5 мл серной кислоты. На границе жидкостей появляется красное кольцо.

Реакция Либермана—Бурхарда. Раствор холестерина в хлороформе дает с уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой красное окрашивание, переходящее затем в синее и зеленое. В пробирку вносят 1 каплю хлороформного раствора холестерина, добавляют I каплю уксусного ангидрида и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Развивается синяя, а затем зеленая окраска.

Обнаружение ненасыщенной связи в молекуле холестерина. Ненасыщенную связь в молекуле холестерина можно обнаружить по обесцвечиванию бромной воды.

В пробирку вносят 10—15 капель хлороформного раствора холестерола, добавляют 2 капли бромной воды. Происходит обесцвечивание бромной воды при встряхивании содержимого пробирки.

Получение кристаллов холестерида. Холестерин при взаимодействии с кислотами образует сложные эфиры — стероиды.

В пробирку вносят 10 капель уксусной кислоты и на кончике лопатки немного холестерина. Нагревают до кипения. Охладив пробирку на воздухе, наблюдают появление осадка. Несколько капель полученной взвеси переносят на предметное стекло, покрывают покровным и исследуют под микроскопом кристаллы ацетилхолестерида.

Результат: ______________________________________________________

_____________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Качественная реакция на кетоновые тела

К кетоновым телам относятся ацетон, ацетоуксусная и (3-гидро-ксимасляная кислоты. Содержание в крови; ацетон — 2%, ацетоуксусная кислота — 20% и b - гид роксимасляная кислота — 78%. Кетоновые тела появляются в моче (кетонурия) при увеличении их содержания в крови (кетонемия). В норме с мочой выделяется минимальное количество кетоновых —50 мг/сут), которое не обнаруживается обыкновенными качественными пробами.

Кетонурия появляется при сахарном диабете, голодании, исключении из пищи углеводов. Ацетон и ацетоуксусная кислота в щелочной среде образуют с нитропруссидом оранжево-красное окрашивание (проба Люголя). После подкисления концентрированной уксусной кислотой образуется соединение вишневого цвета.