__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод_______________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Реакция Фелинга с крахмалом
Принцип метода: В молекулах полисахаридов практически нет свободных полуацетальных гидроксилов, поэтому они не могут восстанавливать Cu+2 до Cu+1
Реактивы:
Ход работы: В пробирку внести 2 капли раствора крахмала, добавить 1 каплю реактива Фелинга I и 2 капли реактива Фелинга II. Нагреть на кипящей бане 5 минут
Результат: __________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод_______________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Реакция крахмала с йодом.
Принцип метода: Амилоза крахмала образует комплекс с йодом, окрашенный в синий цвет. При нагревании комплекс разрушается, после охлаждения снова образуется.
Реактивы:
Ход работы: В пробирку вносят 1 мл дистиллированной воды и 1 каплю крахмала. После перемешивания добавляют 1 каплю Люголя (содержит йод). Отмечают результат. Нагревают на кипящей водяной бане, а затем охлаждают. Наблюдают за изменением окраски.
Результат: __________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод_______________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Лабораторная работа № 14
Обнаружение фосфотриоз в мышечной ткани
Принцип метода: Фосфотриозы в отличие от других фосфорилированных метаболитов превращения глюкозы легко подвергаются гидролизу с отщеплением неорганического фосфата в щелочной среде при комнатной температуре.
Реактивы:
1) ТХУ 2,5% раствор;
2) NaОН, 2 моль/л;
3) НСI, 2 моль/л;
4) аскорбиновая кислота, 1% раствор (свежеприготовленный);
5) молибденово-кислый аммоний, 1% раствор в 0,025 моль/л растворе H2SO4.
Ход работы:
1. 0,5 г измельченной мышцы экстрагируют 5 мл холодной ТХУ на льду в течение 10 мин, интенсивно перемешивая. Добавляют 5 мл воды и фильтруют через бумажный фильтр.
2. В опытную пробирку помещают 1 мл без белкового фильтрата и добавляют 1 мл раствора NaОН, перемешивают и спустя 20 мин щелочь нейтрализуют добавлением 1 мл раствора НСI.
3. В контрольную пробирку помещают 1 мл раствора NaОН 1 мл раствора НСI и после перемешивания вносят 1 мл исследуемого без белкового фильтрата мышцы.
4. В опытную и контрольную пробирки приливают по 0,5 мл раствора молибденово-кислого аммония и по 0,5 мл раствора аскорбиновой кислоты. Общий объем смеси в обеих пробирках доводят до 10 мл дистиллированной водой. Пробы оставляют при комнатной температуре на 10 мин, после чего их фотометрируют при А=670 нм в кюветах толщиной 10 мм. Опытную пробу колориметрируют против контрольной. По калибровочной кривой оценивают содержание фосфора в пробе.
Результат: __________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Лабораторная работа № 15
Обнаружение дегидрогеназы 3-фосфоглицеринового альдегида
Принцип метода
3-фосфоглицериновый альдегид в ходе анаэробного превращения глюкозы дегидрогеназой 3-фосфоглицеринового альдегида окисляется в 1,3-дифосфоглицериновую кислоту. При этом происходит восстановление НАД, который можно обнаружить по восстановлению метиленового синего в лейкосоединение.
Реактивы:
1) глюкоза, 2% раствор;
2) дрожжи;
3) метиленовый синий, 0,002% раствор.
Ход работы
В пробирку вносят кусочек дрожжей (величиной с горошину), несколько капель раствора глюкозы, растирают содержимое стеклянной палочкой до получения равномерной взвеси. Добавляют каплю раствора метиленового синего, перемешивают содержимое пробирки стеклянной палочкой. Ставят пробирку в штатив и наблюдают обесцвечивание метиленового синего, начинающееся со дна пробирки.
Результат: __________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Обнаружение молочной кислоты
Принцип метода
Молочная кислота в присутствии фенолята железа (реактив Уффельманна), окрашенного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленого цвета.
Ход работы
1 г мышц растирают до гомогенного состояния в ступке с небольшим количеством кварцевого песка в течение 3 мин, добавив 5 капель воды. Затем приливают 3 мл дистиллированной воды и фильтруют через смоченную водой вату.
К 15 каплям фильтрата добавляют по каплям реактив Уффельманна (20 капель 1% раствора фенола + 2 капли 1% раствора хлорного железа) до появления фиолетовой окраски. В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска жидкости переходит в желто-зеленую, так как образуется лактат железа. Для сравнения проводят реакцию Уффельманна с раствором молочной кислоты и наблюдают развитие желто-зеленого окрашивания.
Результат: __________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Лабораторная работа № 16
Проба Бенедикта на глюкозу
Реактив Бенедикта:
В колбу на 1 л наливают 700 мл дистиллированной воды, добавляют 173 глимоннокислого натрия (Na3С6Н507*11Н2О), 100 г безводного (или 200 г кристаллического) углекислого натрия. Нагревают до растворения. Отдельно растворяют 17,3 г сернокислой меди в 100 мл воды. Смешивают оба раствора, непрерывно взбалтывая, и после охлаждения доливают до 1 л дистиллированной водой в мерной колбе.
Ход работы
В пробирку наливают 5 мл реактива Бенедикта и прибавляют 0,4—0,5 мл мочи. После перемешивания пробу нагревают 2 мин на пламени или 5 мин кипятят на водяной бане. Раствор охлаждают 5—7 мин.
Оценка результатов
При наличии глюкозы моча окрашивается в зеленый, желтый или красный цвет, на дне пробирки образуется осадок. Пробу оценивают по условной шкале от 0 до 4 баллов. При зеленой окраске без наличия осадка — проба отрицательная. Проба положительная, если количество глюкозы в моче превышает 0,5 г/л. При содержании в моче 0,5—5,0 г/л глюкозы цвет пробы зеленый (1+); 5—7,5 г/л - желто-зеленый (2+); 10 г/л — желтый (3+); 20 г/л и выше — красный (4+). Проба Бенедикта самая чувствительная из редукционных проб на глюкозу в моче. Ввиду значительного разведения (в 10—12 раз) восстанавливающее действие целого ряда редуцирующих веществ в моче выражено слабее, чем в других пробах.
Вывод_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Выделение гликогена из печени
Принцип метода Гликоген хорошо растворим в воде и достаточно устойчив в слабокислой среде, поэтому метод выделения сводится к механическому разрушению ткани и экстракции гликогена 5% раствором ТХУ.
Реактивы, исследуемый материал:
1) ТХУ, 5% раствор;
2) этиловый спирт, 96%;
3) сульфат аммония в порошке;
4) ацетат свинца, 10% раствор;
5) раствор Люголя;
6) NaС1, 0,85% раствор;
7) печень сытого и голодного животного.
8)
Ход работы
Печень животного быстро извлекают, разрезают на тонкие пласты, которые немедленно опускают в стакан с кипящим физиологическим раствором для инактивации фосфорилазы (10—15 мин). Такая печень может храниться в морозильной камере до 1,5 мес.
Отвешивают по 0,5 г печени от сытого и голодного животного, помещают в ступки и заливают по 3,0 мл 5% раствора ТХУ и растирают пестиком 10 мин. К экстрактам добавляют по 3 мл дистиллированной воды и полученные суспензии фильтруют в другие пробирки.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 |
