Практикум по биохимии (стр. 6 )

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

V.ТЕМА: БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОКИСЛЕНИЕ

Лабораторная работа № 9

Обнаружение НАД в дрожжах

Принцип метода НАД встречается во многих органах и тканях человека и животных, богаты им и дрожжи. НАД легко извлекается из дрожжей горячей водой (он термостабилен) и может быть обнаружен по образованию флуоресцирующего комплекса с ацетоном. Эта реакция характерна для N-производных амида никотиновой кислоты. Она применяется для определения метилникотинамида в моче.

Реактивы:

дрожжи, ацетон, 30% раствор NaOH, спиртовой раствор фенолфталеина.

Ход работы. В пробирку помещают кусочек дрожжей величиной 4—5 мм, добавляют 1/3 пробирки воды и кипятят 20—30с, не допуская выбрасывания жидкости. Отфильтровывают в пустую пробирку 5—10 капель полученного экстракта, добавляют 3—5 капель ацетона и 1—2 капли 30% раствора едкого натра. Оставляют пробирку на 2 мин; затем добавляют 1 каплю 5 г/л спиртового раствора фенолфталеина и по каплям концентрированную соляную кислоту до обесцвечивания фенолфталеина. Пробирку в процессе добавления кислоты встряхивают. Поместить пробирку на 2 мин в кипящую водяную баню, затем охладить и поднести к включенному флюориметру. Ацетоновый комплекс НАД флюоресцирует, синим светом.

Результат: __________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лабораторная работа № 10

Обнаружение каталазы в крови

Принцип метода: При окислительных процессах может образовываться перекись водорода, которая разлагается ферментом каталазой (содержится в различных клетках включая кровь) на воду и молекулярный кислород.

Реактивы:

1.  30 г/л перекиси водорода;

2.  кровь.

Ход работы: в пробирку внести 10-15 капель 30 г/л перекиси водорода и 3 капли крови. Отметить выделение пузырьков кислорода. При внесении в пробирку тлеющей лучинки она вспыхивает. Так как выделяющийся кислород усиливает горение.

Результат: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лабораторная работа № 11

Сопоставление ОВП рибофлавина.

Принцип метода: Для исследования ОВП применяют индикаторы, изменяющие свой цвет при определенном значении ОВП. Например, метиленовый синий (синий в окисленном состоянии) превращается в лейкометиленовый синий (бесцветный в восстановленной форме).

Реактивы:

1)  цинк гранулированный;

2)  концентрированная соляная кислота;

3)  взвесь рибофлавина — 0,25 г/л;

4)  раствор метиленового синего — 0,1 г/л.

Ход работы: В пробирку вносят 4—6 капель воды, 1 каплю взвеси рибофлавина и по каплям метиленовый синий — до синего или зеленовато-синего окрашивания раствора. Внести в пробирку кусочек цинка и 2—3 капли концентрированной соляной кислоты (начинается выделение пузырьков водорода). По мере насыщения раствора водородом окислительно-восстановительный потенциал смеси постепенно снижается и происходит восстановление рибофлавина и метиленового синего. Восстановление всего объема метиленового синего происходит раньше, чем восстановление значительной части внесенного в пробирку рибофлавина, поэтому цвет жидкости переходит последовательно в зеленый, желто-зеленый, желтый, бледно-желтый или розовый и, наконец, жидкость обесцвечивается за счет восстановления рибофлавина в лейко-соединение.

Бесцветную или розовую жидкость сливают в другую пробирку и наблюдают за изменением окраски. Водород в жидкость больше не поступает, а уже растворенный в ней уходит в воздух и переносится через рибофлавин и метиленовый синий на кислород воздуха. В результате происходит постепенное повышение окислительно-восстановительного потенциала, после расходования в растворе водорода начинается окисление восстановленного рибофлавина. Он передает водород через индикатор метиленовый синий на кислород и желтеет (часть водорода поступает к кислороду, минуя индикатор). После этого начинается окисление лейкометиленового синего — раствор становится сначала зеленым (желтый и синий цвет дают зеленый) и затем синим.

Результат: _________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

VI.ТЕМА: УГЛЕВОДЫ

Лабораторная работа № 13

Качественные реакции на углеводы

Реакция Фелинга на моносахариды

Принцип метода. Моносахариды - имеют в своем составе полуацетальный гидроксил, за счет которого способны восстанавливать Cu+2 сернокислой меди (CuSO4) до Cu+1 закиси меди (Cu2O). Эта реакция протекает в щелочной среде (в присутствии NаОН) при нагревании. В результате происходит исчезновение голубой окраски сернокислой меди и появление осадка кирпично-красного цвета (закись меди).

Реактивы:

Ход работы. В пробирку наливают 2 капли раствора глюкозы, приливают к нему 1 каплю реактива Фелинга I (раствор сернокислой меди) и 2 капли реактива Фелинга II (содержит NаОН). Нагревают на кипящей бане 5 минут.

Результат: __________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Реакция Селиванова на фруктозу

Принцип метода. Фруктоза (кетоза) ири взаимодействии с концентрированной кислотой теряет 3 молекулы воды и образует оксиметилфурфурол, который при нагревании с резорцином дает вишнево-красное окрашивание, Альдозы практически не вступают в реакцию Селиванова.

Реактивы:

Ход работы. В пробирку наливают 2 капли раствора фруктозы, приливают к нему 1 каплю концентрированной соляной кислоты НСI (агрессивная жидкость!) и 2 кали реактива Селиванова (содержит резорцин). Нагревают на копящей бане в течениа.5 минут.

Результат: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Реакция Фелинга на дисахариды

Принцип метода: Только те дисахариды, которые имеют свободный полуацетальный гидроксил, способны восстанавливать медь сернокислой меди до закиси меди, т. е. давать положительную реакцию Фелинга.

Реактивы:

Ход работы:

2 капли мальтозы	2 капли лактозы	2 капли сахарозы
+ 1 капля реактива Фелинга I	+ 1 капля реактива Фелинга I	+ 1 капля реактива Фелинга I
+ 2 капли реактива Фелинга II	+ 2 капли реактива Фелинга II	+ 2 капли реактива Фелинга II
Нагреть на кипящей бане в течение 5 минут

Результат: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Гидролиз сахарозы и определение продуктов гидролиза

Ход работы: В пробирку наливают 10 капель раствора сахарозы и 10 капель 10% раствора серной кислоты. Нагревают в течение 10 минут в кипящей водяной бане. Образуется гидролизат сахарозы.

Реактивы:

гидролизат	гидролизат
+ 1 капля реактива Фелинга I	+ 1 каплю HCI конц.
+ 2 капли реактива Фелинга II	+2 капли реактива Селиванова
Кипятить 5 минут	Кипятить 5 минут

Результат: __________________________________________________________________