Практикум по биохимии (стр. 8 )

С фильтратами выполняют качественные реакции на гликоген.

3.1.В одну пробирку наливают 1 мл дистиллированной воды, во вторую и третью — по I мл исследуемых фильтратов. После этого в каждую пробирку добавляют по 1—2 капли раствора Люголя и сравнивают окраску.

В три пробирки наливают по 10 капель фильтрата, полученного из печени сытого животного, и проделывают реакцию осаждения. Для этого в первую пробирку приливают 10 капель этанола, во вторую — 10 капель 10% раствора ацетата свинца, в третью насыпают порошок сульфата аммония до полного насыщения и наблюдают, в какой из них выпадет осадок. Те же реакции выполняют с фильтратом, полученным из печени голодавшего животного.

Результат: ___________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

VII.ГОРМОНЫ.

Лабораторная работа № 17

Качественные реакции на гормоны

Реакция на адреналин с хлорным железом

Принцип метода: Адреналин обладает слабощелочной реакцией, легко окисляется на воздухе с образованием адренохрома, вследствие чего раствор с хлорным железом окрашивается в зеленый цвет.

Реакция с хлорным железом характерна для пирокатехинового кольца, входящего в молекулу адреналина.

Реактивы, исследуемый материал:

1)  раствор адреналина — 1 г/л;

2)  раствор хлорного железа -10 г/л;

3)  раствор едкого натра — 100 г/л.

Ход работы В пробирку наливают 10 капель раствора адреналина и добавляют 1 каплю хлорного железа. Наблюдается зеленое окрашивание вследствие присутствия пирокатехина в молекуле адреналина. При добавлении 1 капли раствора едкого натра наблюдается вишнево-красное окрашивание.

Результат: ___________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Биуретовая реакция и реакция Фоля на инсулин

Принцип метода: С помощью цветных реакций на белки можно доказать, что инсулин - это белок, имеющий в своем составе SH-группы цистеина.

Ход работы:

1. В пробирку внести 10 капель раствора инсулина, 5 капель NaOH и 1 каплю CuSO4. Отмечают изменение окраски.

2. В пробирку внести 5 капель раствора инсулина, 5 капель реактива Фоля. Кипятят 2 минуты. Отмечают результат.

Результат: ___________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная работа № 18

Флюоресценция продуктов окисления адреналина

Принцип метода Адреналин, окисляясь кислородом воздуха, при добавлении щелочи дает флюоресцирующие продукты.

Реактивы, исследуемый материал:

1) раствор адреналина — 1 г/л; 2) раствор едкого натра — 100 г/л.

Ход работы К 10 каплям воды приливают 6 капель раствора едкого натра и 24 капли раствора адреналина. Поместив пробирку перед включенным флюороскопом, наблюдают зеленую флюоресценцию продуктов окисления адреналина.

Результат: ___________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Диазореакция на адреналин

Принцип метода При взаимодействии диазореактива с адреналином жидкость окрашивается в красный цвет вследствие образования сложного соединения типа азокрасителя.

Реактивы, исследуемый материал:

1)  сульфаниловая кислота, 0,5% раствор;

2)  нитрит натрия, 10% раствор;

3)  едкий натр, 10% раствор;

4)  адреналин — 1 г/л.

Ход работы К 6 каплям раствора сульфаниловой кислоты прибавляют 6 капель раствора нитрита натрия (диазореактив), 10 капель раствора адреналина и 3 капли раствора едкого натра. Жидкость окрашивается в красный цвет.

Результат: ___________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

VIII.ВИТАМИНЫ

Лабораторная работа № 20

Качественные реакции на витамины.

Реакция восстановления витамина В2.

Водород, образующийся при добавлении металлического цинка к концентрированной соляной кислоте, восстанавливает рибофлавин через промежуточное соединение красного цвета (родофлавин) в бесцветный лейкофлавин. При этом желтая окраска раствора переходит в розовую, затем раствор обесцвечивается:

Материал исследования и реактивы:

1.  Рибофлавин, 0,025 % взвесь в воде.

2.  Соляная кислота, концентрированная.

3.  Цинк металлический.

Ход работы:

10 капель взвеси рибофлавина в воде (0,025 %) наливают в пробирку, туда же добавляют 5 капель концентрированной соляной кислоты и небольшой кусочек металлического цинка.

Выделяющийся водород реагирует с рибофлавином и раствор изменяет окраску из желтой в красную и розовую, а затем обесцвечивается.

Результат: __________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Феррихлоридная проба на витамин В6.

Принцип метода. Бесцветный раствор витамина В6 приобретает красную окраску в присутствии хлорного железа; реакция обусловлена образованием комплексной соли типа фенолята железа красного цвета.

Реактивы:

1.  Пиридоксин, 5 % раствор.

2.  Железо хлорное, 5 % раствор.

Ход работы: В пробирке смешивают 5 капель 5% водного раствора витамина В 6 и 1 каплю 5 % раствора хлорного железа и встряхивают ее. Смесь окрашивается в красный цвет.

Результат: __________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

На витамин С.

Принцип метода. Обнаружение аскорбиновой кислоты основано на ее способности вступать в окислительно-восстановительные реакции.

Реактивы:

1.  Метиленовый синий, 0,01 % раствор

2.  Натр углекислый, 10 % раствор

3.  Витамин С, 1 % раствор

4.  Вода

5.  Раствор Люголя (0,1 % раствор йода в 0,2 % растворе йодида калия)

Ход работы:

Реакция с метиленовым синим.

В две пробирки вносят по 1 капле 0,01 % раствора метиленового синего, по 1 капле 10% раствора соды. В одну из них добавляют несколько капель раствора аскорбиновой кислоты, в другую – 1 мл воды. Обе пробирки нагревают и регистрируют результат. (Происходит обесцвечивание в пробирке с аскорбиновой кислотой).

Реакция с раствором Люголя.

В две пробирки вносят по 10 капель дистиллированной воды и по 2 капли раствора Люголя. В одну пробирку добавляют 10 капель дистиллированной воды, в другую 10 капель раствора аскорбиновой кислоты.

В пробирке с аскорбиновой кислотой раствор Люголя обесцвечивается в результате восстановления йода до йодисто-водородной кислоты.

Результат: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

На витамин А

Принцип метода. Витамин А при взаимодействии с серной кислотой окрашивается в красно-фиолетовый или красно-бурый цвет, при взаимодействии с хлорным железом – в желто-зеленый.

Реактивы:

1) масляный раствор ретинола ацетата — 34,4 г/л; 2) концентрированная серная кислота; 3) хлороформ; 4) треххлористая сурьма, 23% хлороформный раствор.

Ход работы

Реакция на витамин А сконцентрированной серной кислотой. В сухую пробирку вносят 1 каплю раствора ретинола ацетата и 5 капель хлороформа, перемешивают и добавляют 1 каплю концентрированной серной кислоты. Отмечают результат реакции.

Реакция на витамин А с хлорным железом. В сухую пробирку вносят 1 каплю ретинола ацетата и 5 капель хлороформа. Перемешивают, добавляют 3 капли хлорида железа. Отмечают результат реакции.

Реакция на витамин А с треххдористой сурьмой. В сухую пробирку вносят I каплю раствора ретинола ацетата и добавляют 2—3 капли 23% хлороформного раствора треххлористой сурьмы. При смешивании содержимое пробирки окрашивается в синий цвет.