Без имени (стр. 3 )

- автоклавная комната служит для обеззараживания и стерилизации, в ней размещают стерилизующее оборудование: автоклавы и сушильные шкафы. Стерилизации подвергают питательные среды и инструменты, а обеззараживанию – отработанный инфицированный материал;

- бокс-комната используется для пересева культур микроорганизмов и требует стерильных условий. Качественная стерилизация бокса достигается применением бактерицидной лампы. Бокс оборудуется предбоксником, служащим шлюзом для перехода из стерильной зоны в общую;

- термостатная комната предназначена для культивирования микроорганизмов.

В микробиологических лабораториях размещают специализированное оборудование, которое позволяет осуществлять весь цикл работ по обеспечению запланированного микробиологического анализа, направлен - ного на тестирование самых разнообразных материалов.

Важнейшей частью работы в микробиологической лаборатории является стерилизация (от лат. sterilitas – бесплодный) – полное уничтожение микроорганизмов в объектах с целью исключения микробного загрязнения  питательных сред, культур клеток и др. при микробиологических исследованиях и в биотехнологических производствах, а также для предупреждения их заноса в организм и предотвращения микробной биодеградации различных материалов.

Процесс стерилизации включает этапы дезинфекции, очистки с по - мощью моющих средств, сборки, группировки и размещения материалов в контейнере и камере стерилизатора, собственно стерилизации, сушки, кон - троля и хранения. Этапы дезинфекции, очистки, размещения преследуют цель снижения числа микроорганизмов на объекте и облегчения доступа к ним стерилизанта; этап стерилизации –полного освобождения объекта от микроорганизмов; этап контроля – проверки эффективности стерилизации с помощью механических, химических и биологических методов; этапы сушки и хранения – предупреждения повторной микробной контаминации в период от стерилизации до использования.

В качестве стерилизантов используют насыщенный высокотемпертурный водяной пар (стерилизация паром), сухой горячий воздух (стерилизация жаром), химические вещества (стерилизация химическая), газ (стерилизация газовая), реже используют ионизирующие излучения (лучевая стерилизация), фильтрование через мелкопористые фильтры (механиская стерилизация), многократное прогревание жидкостей на водяной бане при 1000С (дробная стерилизация) или 560С (тиндализация).

Кипячение, однократное прогревание при 1000С, облучение УФЛ не относятся к методам стерилизации, так как не обеспечивают полного уничтожения микроорганизмов, особенно спор.

Стерилизация паром. Насыщенный водяной пар под давлением обладает бактерицидными свойствами, не повреждает большинство стерилизуемых материалов и не нуждается в освобождении от стерилизанта. Для данного вида стерилизации характерны надежность, доступность, безопасность для персонала, экономичность, высокая степень автоматизации. Стерилизующий эффект пара связан с прогреванием объекта в процессе конденсации пара в воду на поверхности и внутри предмета. Выпускают два типа паровых стерилизаторов:

- стерилизаторы перемещения тяжестью; в них поток пара проникает в верхнюю часть камеры и вытесняет из нее воздух через дренажную трубку. Давление и температура пара возрастают и достигают установленной величины. Постоянную температуру до окончания экспозиции поддерживает таймер. По окончании экспозиции пар выводится через дренаж из камеры, рубашка камеры остается горячей и ее сухой жар высушивает стерилизуемые объекты. Крышка открывается при снижении температуры камеры до 900С;

- предвакуумный паровой стерилизатор; в нем вакуумная система в 2 цикла вытягивает большую часть воздуха из камеры и стерилизуемых объектов через дренаж, после чего камеру и ее рубашку наполняют паром под 46 давлением. Давление и постоянная температура поддерживаются автома - тически. После окончания срока стерилизации камера освобождается от пара, и объекты высушиваются с помощью вакуумной системы.

В зависимости от стерилизуемых объектов температура пара в паровых стерилизаторах – 110–138 0 С, давление пара – 0,4–2,5 атм., экспозиция – 15–60 мин. Паром стерилизуют почти все изделия из металла, стекла, термостойкой пластмассы, резины, питательные среды, в том числе жид - кие, лекарственные препараты. Стерилизация паром – предпочтительный способ стерилизации.

Стерилизация жаром. Стерилизуют ограниченный круг объектов: изделия из стекла и других термостойких материалов, безводные гидрофобные порошки, вазелин, предметы, не пропускающие необходимый уровень влаги. Осуществляют в сухожаровых шкафах. Обязательным ус - ловием эффективности стерилизации жаром является правильное соотношение между температурой и экспозицией, которое выражается так: при 180 0 С – 1/2 ч, при 170 0 С – 1 ч, при 160 0 С – 2 ч, при 150 0 С – 2,5 ч, при 140 0 С – 3 ч, при 120 0 С – 6 ч.

Стерилизация химическая проводится с помощью химических веществ, обладающих биоцидным действием: 2 %-ного щелочного водного раствора глютаральдегида и 20 %-ного раствора формальдегида в 70 %-ном этаноле. Химическая стерилизация осуществляется путем полного погружения объекта в раствор на относительно долгое время (около 10 ч) при комнатной температуре. При повышении температуры раствора до 40–50 0 С эффективность стерилизации резко возрастает, при температу - ре ниже 20 0 С, а также в кислой среде стерилизующий эффект может утрачиваться.

По окончании срока стерилизации предметы извлекают из раствора и в асептических условиях несколько раз споласкивают стерильной водой во избежание химических ожогов при контакте такого предмета с кожей и слизистыми оболочками.

Стерилизация газовая. В настоящее время используют этиленоксид – бесцветный газ, легко проникающий сквозь упаковочные материалы, хорошо контактирующий со всей поверхностью плотных предметов и легко проникающий в жидкие вещества, а также устраняющийся обычным проветриванием. Уничтожает все формы микроорганизмов, включая споры. Из-за сильной токсичности и длительности процесса газовая стерилизация используется только для обработки предметов, которые повреждаются при паровой стерилизации.

Контроль стерилизации:

1. Механический контроль, состоящий в визуальном и инструмен - тальном контроле за всеми параметрами стерилизации. Измерительная ап - паратура должна периодически контролироваться в государственном мет - рологическом учреждении.

2. Химический контроль, проводимый с помощью индикаторов, из - меняющих цвет или плавящихся при достижении определенного уровня температуры, влажности, концентрации стерилизанта. Наружные индика - торы в виде стерилизационной ленты (окрашенной или нет) наносят на упаковку простерилизованного предмета, они указывают на то, что пред - мет прошел стерилизацию; внутренние химические индикаторы свиде - тельствуют о том, были ли стерилизуемые объекты подвергнуты действию одного или нескольких видов стерилизации, но не о стерильности объекта. Показатели внутренних химических индикаторов снимаются после окон - чания стерилизации.

3. Биологический контроль непосредственно указывает, произошло уничтожение микроорганизмов в процессе стерилизации или нет, то есть стерилен или нестерилен объект. Для паровой стерилизации в качестве биологического индикатора используют споры В. stearothermophilus, для стерилизации этиленоксидом – В. subtilis.

Бокс микробиологической лаборатории – специальное изолирован - ное помещение, предназначенные для выполнения работ, требующих особой стерильности или безопасного пребывания людей. Микробиологический бокс используется для работ с инфекционными (посевы, пересевы, разведения и др.) и стерильными (приготовление питательных сред, куль - тур тканей, разлив иммунных сывороток и др.) материалами.

В боксе должны быть созданы такие условия, которые, с одной стороны, исключали бы возможность лабораторного заражения сотрудников, а с другой, – предупреждали бы контаминацию стерильных материалов микроорганизмами. Пол, стены и двери бокса должны быть гладкими, сделаны из материала, хорошо поддающегося мойке и дезинфекции. Оборудование бокса: стол, табуреты, стеклянный шкаф для стерильных материалов, штативы, осветительные и бактерицидные лампы. В современных боксах имеются система подачи стерильного воздуха или устройство для ламинарного потока воздуха, создающего высокую степень стерильности и безопасности.

Термостат – аппарат, постоянно поддерживающий заданную тем - пературу и используемый для культивирования микроорганизмов, культур клеток, протекания иммунологических или биохимических реакций. Состоит из нагревателя, термостатирующей камеры, вертикально разделенной на секции перфорированными полками, двойных стенок, между которыми размещается воздух или дистиллированная вода. Наружная стенка сделана из теплоизоляционного материала или содержит его. Дверцы также двойные, плотно закрывающиеся. Температура регулируется терморегуляторами различного типа.

Микроскопия в микробиологической лаборатории используется для выявления микроорганизмов в различных субстратах; ориентировочной идентификации микроорганизмов в исследуемом образце; определения не - 48 которых морфологических признаков; изучения окрашенных мазков из ко - лоний чистых культур. Существуют несколько различных видов микро - скопии: световая, темнопольная, фазовоконтрастная, люминесцентная, электронная.

Световой микроскоп – сложный оптический прибор, предназначенный для наблюдения за живыми и неживыми объектами. Состоит из механической (предметного столика с держателем предметного стекла и двумя винтами, перемещающими столик в двух перпендикулярных направлени - ях; тубуса; тубусодержателя; макро - и микровинтов), осветительной (осве - тителя, зеркала с плоской и вогнутой поверхностями и конденсора, расположенного под предметным столиком и состоящего из 2 линз, ирисовой диафрагмы и оправы светофильтров) и оптической (набора объективов и окуляров) частей.

В световом микроскопе луч от источника света попадает на зеркало, отражаясь от него и проходя через конденсор, концентрируется на объекте, находящемся на предметном столике. Часть прошедших через объект лучей попадает в объектив, преломляется в нем и дает увеличенное обратное действительное изображение объекта на уровне диафрагмы окуляра. Изо - бражение объекта в плосковыпуклой линзе окулярамнимое прямое уве - личенное. В целом объектив и окуляр дают обратное мнимое и увеличен - ное изображение объекта. Увеличение микроскопа равно произведению увеличения объектива на увеличение окуляра. В бактериологии обычно используют полезное увеличение в 900 раз (объектив – 90х, окуляр – 10х).