Без имени (стр. 4 )

Для изучения объектов, которые меньше 0,2 мкм и обладают малой контрастностью, используют микроскопию в отраженном свете, подбирая для этого специальные темнопольные конденсоры (микроскопия в темно - польном микроскопе).

Живые и неокрашенные объекты позволяет изучать фазово - контрастная микроскопия путем повышения их контрастности (при прохождении света через окрашенные объекты изменяется амплитуда свето - вой волны, а при прохождении через неокрашенные – фаза световой волны, что используется для получения высококонтрастного изображения).

Люминесцентная микроскопия применяется для наблюдения за люминесцирующими (флюоресцирующими) микроорганизмами, обработанными специальными флюорохромами (флюоресцеин, родамин). Преимущество люминесцентной микроскопии перед световой состоит в ее более высокой разрешающей способности и быстроте выявления микроорганизмов, что привело к широкому использованию микроскопии этого вида для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний. Объекты или их части, не видимые в световой микроскоп, наблюдают в электронный микроскоп, используя вместо видимого света пучки электронов, а вместо стеклянных оптических линз – электромагнитные.

Реактивы и некоторые биологические препараты, используемые для приготовления питательных сред, изучения жизнедеятельности микроор - ганизмов, дезинфекции помещения лаборатории хранят в подвале или в темном стенном шкафу, где сухо, температура невысокая и без резких ко - лебаний в течение года.

Оборудование рабочего места включает стол, покрытый стеклом (пластиком), на котором должны находиться бактериологическая петля, пинцет, банка с дезинфицирующей жидкостью и газовая (спиртовая) горелка. По окончании работы стол приводят в порядок и дезинфицируют. В микробиологической лаборатории должен храниться как минимум недельный запас дезинфицирующих средств. Дезинфицирующие растворы готовит лаборант или дезинфектор. На емкости с дезинфицирующим раство - ром должно быть указано его название, концентрация и дата приготовл ния.

Ежедневно помещение микробиологической лаборатории убирают влажным способом. Текущая уборка помещений в «чистой» зоне лаборатории проводится с применением моющих средств, а в заразной – с применением дезинфектантов.

Комнаты лаборатории, в которых проводится работа с патогенными биологическими агентами (ПБА): бактериями, вирусами, хламидиями, риккетсиями, простейшими, грибами, микоплазмами, генно-инженерно - модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхо - ждения, гельминтами, а также с материалами, включая кровь и другие биологические жидкости и экскреты организма, подозрительными на со - держание выше перечисленных агентов, оборудуются бактерицидными лампами. Лампы включают после проведения влажной уборки. Вход в помещение разрешается только после проветривания не ранее чем через 30 мин. При применении безозоновых бактерицидных ламп проветривание не требуется.

Лаборатория должна быть обеспечена водопроводом, канализацией, электричеством, отоплением и вентиляцией. При ориентации окон лабора - тории на юг необходимо предусмотреть защиту рабочих столов от попада - ния прямого солнечного света путем использования светозащитных пленок или жалюзи из материала, устойчивого к дезинфектантам. На окна цокольного и первого этажей следует устанавливать металлические решетки, не нарушающие правил пожарной безопасности.

Лаборатория должна быть обеспечена средствами пожаротушения. Помещения микробиологической лаборатории должны быть непроницаемы для грызунов и насекомых.

Литература

1.  Основы микробиологии, санитарии и гигиены в пищевой промышленности. /Мармурзова, Л. В. – 2008

2. Микробиология продовольственных товаров. Санитария и гигиена /Жарикова, Г. Г. - 2008

3.  Методическое пособие по микробиологии и вирусологии: для студентов специальности "Биотехнология" / , Б. Музапбаров / - 2011

4.  Микробиология /Гусев, М. В. – 2008

Лекция №4

Тема: Характеристика основных групп санитарно-показательных микроорганизмов –индикаторов загрязнения.

Санитарно-микробиологическая оценка Основные группы микроорганизмов-индикаторов загрязнения.

Санитарно-микробиологическая оценка состояния исследуемых объектов призвана выявить степень их доброкачественности. Но не все микроорганизмы способны дать истинный ответ. С этой целью в санитарной  микробиологии используются так называемые санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ) – индикаторы, являющиеся если не абсолютным, то удовлетворительным тестом, способным охарактеризовать санитарно - микробиологическое состояние того или иного объекта.

Микроорганизмы-индикаторы делятся на три группы:

- индикаторы фекального загрязнения, являющиеся обитателями кишечника животных и человека – E. coli, энтерококки, протеи, сальмонеллы, термофилы, Clostridium perfringens, бактериофаги, дрожжи рода Candida;

- индикаторы орального загрязнения, являющиеся обитателями верхних дыхательных путей и носоглотки – гемолитические стрептококки (Streptococcus pyogenes) и золотистые стафилококки (Staphylococcus aureus);

- индикаторы процесса самоочищения – обитатели природных сред – аммонифицирующие и нитрифицирующие микроорганизмы, грибы, актиномицеты, синезеленые водоросли.

Escherichia coli является одним из фоновых видов кишечника чело - века и животных, способствует защите организма хозяина от патогенных бактерий, выполняет метаболическую и иммунизаторную функции. E. coli считается родоначальником всех СПМ, в качестве таковой эта бактерия была предложена еще в 1888 г. Обнаружение бактерий этого вида в иссле - дуемом объекте характеризует степень его бактериальной загрязненности, свидетельствуя об уровне санитарного благополучия

Е. coli относится к роду палочковидных перитрихиальных аспорогенных Грам-факультативно-анаэробных бактерий из семейства Enterobacteriaсеае. В роду выделяют виды: Е. coli, E. blattae, E. fergusonii, Е. hermannii, E. vulneris.

Морфология кишечной палочки типична для энтеробактерий. У некоторых штаммов есть капсула, микрокапсула, реснички. Они хорошо и быстро растут на основных питательных средах в аэробных условиях при слабощелочной реакции среды и при температуре 35–370С, формируя гладкие мутные колонии диаметром 1–3 мм.

Штаммы, обитающие у теплокровных животных, могут размножаться при 42–43 0 С. Глюкозу ферментируют с выделением смеси кислот, Н2 и СО2. Ферментируют лактозу (иногда замедленно), маннит, мальтозу и другие углеводы. Способны к образованию индола. Чувствительны к аминог - ликозидам, тетрациклинам. Для внутривидовой систематики применяют серотипирование, фаготипирование и колицинотипирование.

Свойства, обнаруженные у E. coli, позднее были выявлены и у других бактерий, являющихся обитателями кишечного тракта человека и животных. Всех их объединяют в отдельную группу, обладающую аналогич - ными санитарно-показательными свойствами. Эта группа носит название 53 «бактерии группы кишечных палочек» (или БГКП) и условно подразделяется на 3 подгруппы:

1. БГКП, способные сбраживать сахара (лактозу и глюкозу или только глюкозу) при 37 0 С и не проявляющие оксидазной активности. В эту подгруппу помимо E. coli входят другие представители семейства Enterobacteriaceae, в том числе бактерии родов Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella. Представители этой подгруппы БГКП вообще не должны обнаруживаться в изначально чистых или прошедших термообработку объектах. В связи с этим выявление БГКП, относящихся к 1-й подгруппе, в питьевой или дистиллированной воде, в термически обработанных пище - вых продуктах (мясных, рыбных и прочих), в отобранном из пастеризатора молоке, в различных блюдах, приготовленных на предприятиях общественного питания, а также в смывах, взятых спустя час после проведения дезинфекции, свидетельствует об их санитарном неблагополучии.

2. БГКП, сбраживающие лактозу и глюкозу до газа при температуре 43–44,5 0 С. Эта подгруппа, как и первая, представлена большим количеством бактерий из семейства Enterobacteriaceae, а их обнаружение свидетельствует о неопределенном по времени фекальном загрязнении исследуемых объектов. В отношении этой подгруппы особенно высокие требования предъявляются к объектам, прошедшим термическую обработку. В связи с этим проводится обязательный контроль поверхностей пищевых продук - тов, вторых и третьих блюд на раздаче, пищевых продуктов, имеющих жидкую консистенцию и смывов.

3. БГКП, сбраживающие лактозу до газа при температуре 43–44,5 0 С. Обнаружение микроорганизмов этой подгруппы в исследуемом объекте почти всегда свидетельствует о его свежем фекальном загрязнении.

Все же E. coli и другие представители БГКП не считаются четкими индикаторами санитарной чистоты исследуемых объектов. Во-первых, они не способны долго выживать в пищевых продуктах в отличие от многих патогенных микроорганизмов – энтеровирусов, шигелл, паратифозных палочек. Во-вторых, были выявлены случаи сальмонеллеза водного происхождения, когда на фоне кажущегося санитарного благополучия водоема (при содержании E. coli в незначительном количестве – 4 бакт./л) выявляли высокий уровень содержания сальмонелл - в 4–5 раз выше содержания E. coli.

Бактерии родов Enterococcus и Proteus Род Enterococcus. Представители рода широко распространены в природе. Факультативные Грам+ анаэробы, спор не образуют. В мазках из сахарных сред имеют круглую, овальную или ланцетовидную форму, располагаются парами, небольшими скоплениями, реже – короткими цепочками. Подвижны, либо неподвижны, иногда синтезируют капсулу. На жидких средах дают диффузный рост, на плотных – мелкие круглые вы - пуклые блестящие колонии или нежный налет. Растут при 10 0 С и 45 0 С, 54 рН = 9,6, в молоке с 0,1 % метиленовым синим, в 10 и 40 % желчи. В средах с молоком, кровью, сывороткой формируют водонерастворимый пигмент белого или лимонно-желтого цвета.

Энтерококки являются одним из фоновых видов микроорганизмов в кишечнике человека, млекопитающих, птиц. Нередко обнаруживаются на коже промежности и в просвете половых путей, полостей глотки, рта, носа.

Долго живут в пищевых продуктах, в которых при комнатной температуре могут размножаться. Устойчивы к высушиванию, свету, низкой температуре. Типовой вид – E. faecalis – использует аргинин как источник энергии, сбраживает сорбит, но не сбраживает арабинозу, не нуждается в фолиевой кислоте, редуцирует трифенилтетразолий хлорид (ТТХ). В род также входят виды E. faecium, E. durans, E. gallinarum, E. hirae, E. saccharolyticus, E. solitarius и др. Для энтерококков свойственно быстрое отмирание во внешней среде, гораздо более раннее, чем для E. coli. Поэтому выявле - ние этих бактерий практически всегда свидетельствует о свежем фекаль - ном загрязнении. Этих представителей СПМ принято определять в воде, почве, а также в пищевых продуктах.