«а» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров инфицированных мышей по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе;
«b» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования.
Так, по результатам ИГХ исследования с использованием маркера PCNA установлено, что через 1 сутки после инфицирования величина численной плотности фибробластов, экспрессирующих этот маркер была больше величины данного параметра у интактных животных почти в 3 раза (см. табл. 4). В дальнейшем наблюдали постепенное увеличение численной плотности PCNA+фибробластов. К 10 суткам после инфицирования величина искомого показателя достигала максимального значения, почти в 2 раза больше по сравнению с таковой в 1 сутки после инфицирования. На 14 сутки эксперимента величина численной плотности фибробластов экспрессирующих PCNA уменьшилась в 3,7 раза по сравнению с величиной этого параметра в предыдущий период заболевания (см. табл. 4), возможно, в связи с процессом дифференцирования фибробластов и соответственно снижением их пролиферативной активности (см. табл. 4).
«Фибропластическая активность» фибробластов, напротив, в 1 сутки после инфицирования была меньшей, чем у интактных животных в 2,5 раза, но в последующем увеличивалась вплоть до 14 суток, превышая таковую более чем в 5 раз относительно величины этого параметра у инфицированных мышей в 1 сутки эксперимента (см. табл. 4).
Согласно данным корреляционного анализа между величинами показателей инфицированных фибробластов и их «фибропластической активностью» была выявлена высокая отрицательная корреляционная связь (см. рис. 2). Последняя возрастала с увеличением периода после инфицирования и, следовательно, степени дифференцирования фибробластов.
Рис 2. Результаты корреляционного анализа «фибропластической активности» фибробластов и численной плотности Inf A+фибробластов в легких мышей линии C57Bl/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 с указанием корреляционной связи между величинами исследуемых параметров.
б/п – безразмерный показатель.
Результаты исследования матриксных металлопротеиназ (MMP) и их ингибиторов (TIMP) в процессе фиброгенеза
При морфометрическом исследовании полученных образцов легких мышей линии C57Bl/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 во все периоды эксперимента наибольшее количество из исследуемых клеток, экспрессирующих MMP-2, MMP-9, MMP-10 и TIMP-2 составляли макрофаги (см. табл. 5, 6, 8). В 1-3 сутки инфекционного процесса клетки, экспрессирующие исследуемые маркеры располагались преимущественно в межальвеолярных перегородках, в меньшей степени, вокруг бронхов и сосудов. Начиная с 6 суток заболевания, большинство позитивно окрашенных клеток наблюдали в инфильтратах и зонах ателектазов.
При исследовании образцов легких мышей линии C57Bl/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 было обнаружено, что в 1 сутки заболевания величина численной плотности макрофагов, экспрессирующих ММР-2 была большей по сравнению с таковой в контроле в 2,5 раза. Количество фибробластов, экспрессирующих исследуемый маркер в 1 сутки эксперимента было больше в 3,2 раза относительно аналогичного параметра у мышей в контрольной группе (см. табл. 5, 6).
Максимальной величины численная плотность макрофагов, экспрессирующих MMP-2 достигала на 6 сутки эксперимента, в 2 раза превышая таковую у мышей в 1 сутки инфекционного процесса. В последующем наблюдали уменьшение количества MMP-2+макрофагов вплоть до 14 суток (см. табл. 5). К данному сроку эксперимента величина численной плотности макрофагов, экспрессирующих исследуемый маркер уменьшилась в 1,5 раза по сравнению с величиной того же показателя на 6 сутки инфекционного процесса.
Количество макрофагов, экспрессирующих MMP-9 и MMP-10 было больше, чем у мышей контрольной группы в 2,5 и в 2,7 раза соответственно. Величина численной плотности MMP-9+макрофагов и MMP-10+макрофагов была наибольшей в 2,6 и в 1,6 раза на 6 сутки относительно величины аналогичного показателя в 1 сутки эксперимента (см. табл. 5). В последующие периоды инфекционного процесса наблюдали постепенное снижение величин численной плотности макрофагов, экспрессирующих MMP-9 в 1,7 раз на 14 сутки, и в 1,6 раза, макрофагов, экспрессирующих ММР-10 в тот же период эксперимента.
Таблица 5
Результаты исследования численной плотности макрофагов, экспрессирующих матриксные металлопротеиназы и их ингибиторы в легких мышей линии C57Bl/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 (M±m)
Объект и параметры исследования | Сутки исследования | Мыши линии C57Bl/6 | |
Интактные | Инфицированные | ||
MMP-2 (Nai) | 1 | 0,8±0,12 | 1,9±0,25a |
3 | 2,3±0,31a | ||
6 | 3,9±0,22ab | ||
10 | 3,7±0,29a | ||
14 | 2,6±0,36ab | ||
MMP-9 (Nai) | 1 | 0,8±0,16 | 2,1±0,39a |
3 | 3,1±0,35a | ||
6 | 5,5±0,63ab | ||
10 | 4,8±0,41a | ||
14 | 3,2±0,56ab | ||
MMP-10 (Nai) | 1 | 0,9±0,19 | 2,4±0,47a |
3 | 3,1±0,31ab | ||
6 | 3,9±0,52a | ||
10 | 2,9±0,38ab | ||
14 | 2,4±0,19a |
Примечания:
«а» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров инфицированных мышей по сравнению с аналогичными показателями у мышей в контрольной группе;
«b» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования.
Величина численной плотности фибробластов в легких мышей линии C57Bl/6, экспрессирующих MMP-2 возрастала с 1 по 10 сутки более чем в 3 раза по сравнению с величиной аналогичного параметра в 1 сутки инфекционного процесса (см. табл. 6). К 14 суткам эксперимента наблюдали тенденцию к снижению величины данного показателя.
Количество фибробластов, экспрессирующих ММР-9 к 1 суткам эксперимента было большим в 4 раза по сравнению с таковым у интактных мышей, и достигало наибольшей величины на 10 сутки, т. е. почти в 3 раза большей относительно величины аналогичного параметра в 1 сутки инфекционного процесса. В последующем наблюдали тенденцию к снижению количества MMP-9+фибробластов (см. табл. 6).
Величина численной плотности фибробластов, экспрессирующих ММР-10 к 1 суткам исследования была больше в 3,4 раза относительно таковой в группе контроля, с последующим увеличением их количества к 6 суткам в 3,7 раза по сравнению с величиной аналогичного параметра в 1 сутки эксперимента. На 10 сутки инфекционного процесса наблюдали снижение величины численной плотности MMP-10+фибробластов в 1,4 раза по сравнению с величиной этого показателя в предыдущие сроки эксперимента, с последующей тенденцией к снижению на 14 сутки инфекционного заболевания (см. табл. 6).
Таблица 6
Результаты исследования численной плотности фибробластов, экспрессирующих матриксные металлопротеиназы и их ингибиторы в легких мышей линии C57Bl/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 (M±m)
Объект и параметры исследования | Сутки исследования | Мыши линии C57Bl/6 | |
Интактные | Инфицированные | ||
MMP-2 | 1 | 0,3±0,15 | 0,9±0,24a |
3 | 1,3±0,33a | ||
6 | 2,7±0,41ab | ||
10 | 2,9±0,28a | ||
14 | 2,6±0,27a | ||
MMP-9 | 1 | 0,2±0,09 | 0,6±0,31a |
3 | 1,0±0,28a | ||
6 | 1,7±0,26ab | ||
10 | 1,9±0,29a | ||
14 | 1,3±0,36a | ||
MMP-10 | 1 | 0,2±0,05 | 0,6±0,26a |
3 | 1,5±0,22ab | ||
6 | 2,4±0,24ab | ||
10 | 1,7±0,29ab | ||
14 | 1,2±0,33a |
Примечания:
«а» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров инфицированных мышей по сравнению с аналогичными показателями у мышей в контрольной группе;
«b» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования.
Полученные данные (см. табл. 5, 6) свидетельствуют о том, что увеличение численной плотности клеток (макрофагов и фибробластов), экспрессирующих MMP-2, MMP-9, MMP-10 сопряжено с быстро прогрессирующим ранним фиброзом легких инфицированных мышей, что подтверждается сильной и средней положительной корреляционной связью величин коллагенов определенных типов и денатурирующими их соответствующими ММРs (см. табл. 7).
Таблица 7
Результаты корреляционного анализа между величинами объемных плотностей коллагенов различных типов и денатурирующих их ММРs, экспрессируемых макрофагами и фибробластами в легких мышей линии C57Bl/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05
Объекты корреляционного исследования | Коэффициент корреляции | |
Мф | Фб | |
Коллаген I (Vv) – MMP-2, -9 (Nai) | 0,858 | 0,951 |
Коллаген III (Vv) – MMP-10 (Nai) | 0,992 | 0,909 |
Коллаген IV (Vv) – MMP-2, -9, -10 (Nai) | 0,954 | 0,972 |
Коллаген VI (Vv) – MMP-2, -9 (Nai) | 0,524 | 0,723 |
ИГХ методом в легких мышей линии C57Bl/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05, исследовали численную плотность клеток, экспрессирующих TIMP-2 (см. табл. 8). Величина численной плотности макрофагов, экспрессирующих TIMP-2 к 1 суткам эксперимента была выше в 3,8 раза относительно таковой у мышей контрольной группы. Наибольшее количество TIMP-2+макрофагов наблюдали на 10 сутки, по сравнению с величиной аналогичного параметра в 1 сутки эксперимента их количество увеличилось в 3 раза. В последующие сутки наблюдали тенденцию к снижению величины численной плотности клеток, экспрессирующих исследуемый маркер (см. табл. 8).
Количество TIMP-2+фибробластов уже в 1 сутки эксперимента было большим, чем у мышей в контрольной группе в 7,7 раз (см. табл. 8). К 6 суткам инфекционного процесса наблюдали увеличение количества фибробластов, экспрессирующих исследуемый маркер почти в 4 раза по сравнению с таковым в 1 сутки заболевания. В более поздние периоды эксперимента (10 и 14 сутки) наблюдали снижение величины численной плотности TIMP-2+фибробластов, к 14 суткам в 1,2 раза по сравнению с величиной аналогичного показателя на 6 сутки инфекционного процесса (см. табл. 8).
Таблица 8
Результаты исследования численных плотностей макрофагов и фибробластов, экспрессирующих TIMP-2 в легких мышей линии C57Bl/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 (M±m)
Исследуемые клетки | Сутки после инфицирования | Экспрессия TIMP-2 (Nai) | |
Интактные | Инфицированные | ||
Макрофаги | 1 | 0,9±0,15c | 3,5±0,37ac |
3 | 5,5±0,41abc | ||
6 | 9,9±0,64abc | ||
10 | 10,2±0,57ac | ||
14 | 9,3±0,43ac | ||
Фибробласты | 1 | 0,2±0,07c | 1,9±0,26ac |
3 | 3,7±0,31abc | ||
6 | 7,6±0,45abc | ||
10 | 6,2±0,33abc | ||
14 | 5,5±0,27ac |
Примечания:
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
