Генетическая гетерогенность наследственной предрасположенности к гипертонической болезни (стр. 2 )

Положения, выносимые на защиту.

1. У взрослых больных с ЭАГ (возраст от 21 до 55 лет) ассоциированы полиморфные варианты ID ACE, Arg16Gly ADRB2 и T-786C NOS3.

2. Генотипы полиморфизмов ID ACE и Arg16Gly ADRB2 сопряжены у взрослых больных с ЭАГ.

3.С синдромом преэклапсии-эклампсии ассоциирован вариант M235T гена AGT.

4.C изолированной гестационной артериальной гипертензией ассоциированы варианты ID ACE и Arg16Gly ADRB2. При начале заболевания до периода беременности ассоциации с изученными полиморфизмами не наблюдается.

5.С ЭАГ у детей и подростков ассоциирован полиморфный вариант Arg16Gly гена ADRB2.

Внедрение результатов исследования в практику. Результаты исследования генетической гетерогенности наследственной предрасположенности к гипертонической болезни используются для диагностики наследственной предрасположенности к различным формам артериальной гипертензии и к её осложнениям (ишемической болезни сердца и др.) в отделе молекулярно-генетических исследований НИЛ общей патологии ФГУ “МНИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий”, на кафедре общей и медицинской генетики МБФ РГМУ им. , в Медико-генетическом научном центре РАМН а также на клинических базах терапевтических кафедр МГМСУ и РГМУ им. Пирогова.

Апробация работы. Результаты, полученные в данной работе, были представлены на Объединённой научной конференции кафедры общей и медицинской генетики МБФ РГМУ им. совместно с кафедрой поликлинической терапии Московского факультета РГМУ им. и кафедрой внутренних болезней стоматологического факультета Московского Государственного Медико-Стоматологического университета (18.01.2009), на V съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, май 2005 года), на Европейской конференции по генетике человека 2007 года (European Human Genetics Conference 2007) в Ницце, Франция и на I конгрессе Федерации педиатров стран СНГ “Ребёнок и общество: проблемы здоровья, развития и питания” (Украина, Киев, май 2009 года).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 печатных научных работы, в том числе 2 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК, 3 тезиса докладов в материалах отечественных научно-практических конференций, 1 тезис в материалах зарубежной научно-практической конференции.

Структура и объём диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав, включающих в себя обзор литературы, описание материалов и методов исследования, их результатов и обсуждения, а также, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 168 страницах машинописного текста, содержит 87 таблиц и 7 рисунков. Список использованной литературы включает 6 отечественных и 164 зарубежных источника.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе было исследовано 418 образцов ДНК крови, полученной у 108 взрослых пациентов с ЭАГ (возраст от 21 до 55 лет, средний возраст 33 года), 95 беременных женщин с симптомами артериальной гипертензии (возраст от 21 до 35 лет, средний возраст 28 лет) и 35 детей и подростков (возраст от 9 до 17 лет, средний возраст 14 лет). Контрольные группы включали в себя 99 взрослых мужчин и женщин без признаков ЭАГ (возраст от 23 до 56 лет, средний возраст 35 лет), 51 беременную женщину без признаков артериальной гипертензии (возраст от 21 до 33 лет, средний возраст 27 лет) и 30 детей и подростков без симптомов ЭАГ (возраст 8-16 лет, средний возраст 13 лет).

Генетические полиморфизмы четырёх выбранных генов изучались методом электрофореза в агарозном и полиакриламидном гелях с последующим документированием результатов для последующей статистической обработки.

В ходе работы проводились следующие процедуры: выделение ДНК, амплификация участков интереса изучаемых генов, проверка качества проведённой амплификации, собственно электрофоретический анализ амплифицированных продуктов и результирующая документация.

Для электрофоретического анализа исследуемых фрагментов ДНК применялись три метода в зависимости от гена: конформационный анализ однонитевой ДНК – т. н. SSCP, электрофорез в агарозном геле и электрофорез в полиакриламидном геле с предварительной обработкой фрагментов ДНК соответствующими эндонуклеазами (рестриктазами).

Основой статистической обработки в данной работе был χ2- анализ четырёхпольных таблиц распределения гено-и гаплотипов в норме и контроле. В качестве порога уровня значимости был выбран стандартный уровень P=0.05 (5%). В необходимых случаях использовали точный критерий Фишера. Вычисляли отношение шансов OR, характеризующее риск заболевания. Анализ сопряжённости проводили методом построения девятипольных таблиц сопряжённости вариантов генотипов (таблиц кросс-табуляции) определённых полиморфизмов с последующим χ2-анализом. В качестве порога уровня значимости был выбран стандартный уровень P=0.05 (5%).

Статистические расчёты были выполнены с помощью компьютерной программы STATISTICA 6.0

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Эссенциальная артериальная гипертензия взрослых

Анализ частот аллельных вариантов отдельных полиморфизмов

Проведенный анализ частот генотипов отдельных полиморфизмов относительно их ассоциации с ЭАГ у взрослых показал, что с данной формой ЭАГ ассоциированы варианты Arg16Gly гена ADRB2, ID гена ACE и T-786T гена NOS3 (таблицы 1-3).

Таблица 1 Значения отношения шансов (OR) и соответствующих доверительных интервалов (CI) при сравнении частот генотипов по полиморфизму ID в гене ACE среди взрослых пациентов с ЭАГ и в контрольной выборке

Генотип	OR (CI)	P
DD	1.93 (1.07 – 3.47)	<0.0046
ID	0.81 (0.46 – 1.43)	>0.4728
II	0.53 (0.26 – 1.08)	<0.0167

Таблица 1 показывает, что генотип DD повышает риск развития рассматриваемого заболевания. Если сравнивать данный результат с данными литературы, то можно отметить, что ассоциация генотипа DD согласуется с имеющимися данными, так как примерно в 60 % проанализированных нами работ получен положительный результат [Rigat B et al., 1990, Tiret L et al., 1992, Kario K, 1999, Stankovic A et al., 2002 et al.].

Таблица 2 Значения отношения шансов (OR) и соответствующих доверительных интервалов (CI) при сравнении частот генотипов по полиморфизму Arg16Gly в гене ADRB2 среди взрослых пациентов с ЭАГ и в контрольной выборке

Генотип	OR (CI)	P
Arg16Arg	3.27 (1.79 – 5.97)	<0.0001
Arg16Gly	0.49 (0.28 – 0.88)	<0.0153
Gly16Gly	0.44 (0.20 – 1.00)	<0.0475

Анализируя результаты, представленные в таблице 2 относительно ассоциации полиморфизма ADRB2 Arg16Gly с ЭАГ, можно сделать следующие выводы. Во-первых, из анализа видно, что генотип Arg16Arg является фактором предрасположенности к данному заболеванию (OR=3.27). В свою очередь, генотип Gly16Gly оказывает протективный эффект (OR=0.44). Также определённым протективным эффектом с точки зрения ассоциации с ЭАГ обладает и гетерозиготный генотип Arg16Gly. В свете последних данных относительно связи данного генетического варианта с первичной функцией β2-адренэргических рецепторов можно полагать, что данный гомозиготный генотип повышает вазоконстрикторные реакции со стороны симпатоадреналовой системы, что срывает один из механизмов кратковременной регуляции АД [Puddu P et al., 2007]. Таким образом, данный вариант является этиологическим для рассматриваемой нозологии. Соответственно, для этой формы ЭАГ с генетической точки зрения подтверждается ведущая этиологическая роль симпатоадреналового пути регуляции АД. И с учетом клинико-биохимических особенностей выборки, указывающих также на значение симпатической части ВНС, можно с большой долей вероятности утверждать, что в данном случае мы имеем дело с симпатоадреналовым вариантом ЭАГ у взрослых.

Таблица 3 Значения отношения шансов (OR) и соответствующих доверительных интервалов (CI) при сравнении частот генотипов по полиморфизму T-786C в гене NOS 3 среди взрослых пациентов с ЭАГ и в контрольной выборке

Генотип	OR	P
TT	2.5 (1.39 – 4.54)	<0.0021
TC	0.36 (0.2 – 0.65)	<0.0006
CC	1.22 (0.6 – 2.5)	>0.5844

Анализ таблицы 3 показывает, что генотип TT полиморфизма T-786C эндотелиальной NO синтазы является рисковым, в то время как гетерозиготный генотип даёт протективный эффект. Как известно, NO, синтезируемый при участии NO синтазы, является антагонистом симпатоадреналовой системы касательно регуляции АД, так как, в отличие от норадреналина, оксид азота является вазодилататором резистивных сосудов кровеносной системы [Matthew E et al, 2002; Biaggioni I, 2007]. Поэтому можно предположить, что NO синтаза также участвует в этиопатогенезе предполагаемого симпатоадреналового варианта ЭАГ, причём, возможно, различные генотипы данного полиморфизма гена NO синтазы могут менять её ферментную активность, что может изменять выработку оксида азота, оказывающего вазодилататорный эффект на резистивные сосуды [Matthew E et al, 2002; Biaggioni I, 2007]. Всё это приводит к нарушению кратковременной регуляции АД.

Анализ сопряжения и частот комбинаций некоторых полиморфизмов

Анализ сопряжения и частот комбинаций некоторых полиморфных вариантов относительно их ассоциации с ЭАГ у взрослых больных показал, что наблюдается сопряжение генотипов полиморфных вариантов генов ACE ID и ADRB2 Arg16Gly (P<0.0262) (таблица 4). В контрольной же выборке сопряжение отсутствует (P>0.0520) (таблица 5).