Общая микробиология (стр. 3 )

1.Фиксированный мазок помещают на «салазки» в кювету, дают ему остыть.

2.Наносят на него пипеткой несколько капель красителя на 2-3 мин.

3.Смывают краситель водой.

4. Высушивают препарат фильтровальной бумагой.

Морфология бактерий – размер, форма и взаимное расположение бактериальных клеток

Схема описания морфологии бактерий в мазке:

1.  Форма

2.  Размеры

3.  Характер концов ( для палочек )

4.  Взаиморасположение

Приготовление нативных препаратов для прижизненного изучения микроорганизмов.

Метод «висячей» капли.

1. На покровное стекло наносят каплю исследуемого материала.

2. Предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так. Чтобы капля находилась в центре лунки.

3. Переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В готовом препарате капля должна висеть над лункой, не касаясь ее дна.

Для микроскопии вначале используют объектив малого увеличения, находят край капли, а затем устанавливают иммерсионный объектив и исследуют препарат, определяя подвижность микроорганизмов.

Метод «раздавленной» капли.

На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала и покрывают ее покровным стеклом. Капля не должна выходить за пределы покровного стекла. Раздавленную или висячую каплю, микроскопируют с помощью с иммерсионной систе­мы в затемненном поле зрения — при суженной диафрагме и опущенном конденсоре.

Рекомендуется их микроскопировать в микроскопе с темным полем зрения.

Контрольные вопросы:

1. Что изучает медицинская микробиология?

2. Какие виды лабораторий существуют?

3. Назовите основные виды микроскопов, используемых для работы различных лабораторий.

4. Что такое морфология бактерий?

5. Назовите основные морфологические формы бактерий.

6. Почему разрешающая способность иммерсионного объектива выше, чем сухого?

7. Назовите этапы приготовления мазка для иммерсионной микроскопии.

8. Для чего необходима фиксация мазка?

9. Какова последовательность простой окраски препарата микроорганизмов?

таблицу:

Отличительные черты прокариот от эукариот

признак	прокариоты	эукариоты
Мезосомы
Анаэробный процесс
Фиксация азота
Мембранные структуры
Органеллы движения
Генетический материал
Расположение
Форма
Внехромосомная ДНК
Гистоны
Тип деления
Синтез белка
рибосомы
Место синтеза
Клеточная стенка
Структурные элементы
Стеролы

Список литературы:

Обязательная:

1. Б,, , Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

2.Борисов к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

3., , Рыбакова . М., Медицина. 1998 г.

4., Бабичев Лит. 2000 г.

Дополнительная:

1.  , Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2.  , , Борисов . М. 1983 г.

3.  Общая микробиология. М., 1982 г.

Занятие № 2 Морфология бактерий. Тинкториальные свойства бактерий. Окраска по методу Грама.

Цель: Научиться окрашивать мазки по методу Грама и изучать морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов

Знать: Особенности морфологии бактериальных клеток. Методику окрашивания по методу Грама.

Уметь: Приготовить мазок, окрасить его, осуществить микроскопию с помощью иммерсионного микроскопа, описать морфологию и отдельные особенности ультраструктуры клеток бактерий.

Обоснование темы: Морфология бактериальной клетки имеет важное значение для классификации бактерий и используется для бактериоскопического метода диагностики некоторых инфекционных заболеваний

Вопросы для самоподготовки:

1. Основные морфологические группы бактерий.

2. Особенности морфологии грибов, актиномицетов, риккетсий, спирохет, микоплазм и хламидий.

3. Понятие о простых и сложных методах окраски.

4. Выявление различий в строении клеточной стенки бактерий с помощью окраски по Граму.

ПЛАН

Программа:

1. Морфология бактериальных клеток.

2. Дифференциация бактерий с помощью окраски по методу Грама

3. Основные отличительные черты простых и сложных методов окрашивания.

Демонстрация:

1. Мазок из смеси бактерий ( окраска по методу Грама)

2. Мазки различных морфологических форм микроорганизмов.

Задание студентам:

1.  Микроскопировать и дифференцировать бактерии по морфологическим и тинкториальным свойствам в готовом препарате из смеси бактерий (окраска по методу Грама). Зарисовать.

2.  Самостоятельно приготовить мазки из культур кишечной палочки и стфилококка, окрасить по методу Грама, микроскопировать и дифференцировать бактерии по морфологическим признакам и тинкториальным свойствам. Зарисовать.

3.  Микроскопировать и зарисовать мазки различных морфологических форм бактерий. Заполнить таблицу:

Основные морфологические формы бактерий

Кокки	Палочки	Извитые	Нитчатые

Информационный материал.

Морфологические формы бактерий

Известны четыре основные формы бактерий: шарообразная, палочковидная и извитая и нитевидная. В соответствии с этим все бактерии по форме подразделяются на следующие группы:

1) кокки (шарообразные),

2) бактерии (палочковидные),

3) спириллы (извитые в виде спирали)

4) актиномицеты (нитевидные)

1. Кокки — бактерии круглой формы, имеющие в диаметре 1—2 мкм. Они различаются между собой по взаимному расположению отдельных клеток, которое зависит от способа их деления. Если по окончании деления кокки разъединяются на отдельные шарики, получается форма микрококка. Группа из двух кокков носит название диплококка. Если деление кокков происходит в одном направ­лении и образующиеся кокки не разъединяются, то получается цепочка из шариков. Эта форма носит название стрептококка. При делении в двух взаимно перпендикулярных направлениях возникают сочетания по четыре кокка — тетракокка.

Если деление происходит в трех взаимно перпендикулярных направлениях, кокки соединяются в виде объемных пакетов и получают название сарцин .

Если кокки образуют скопления клеток в виде виноградных гроздьев, они называются стафилококками.

Кроме того, кокки могут иметь правильную круглую форму, овальную форму, ланцетовидную форму, бобовидную форму.

2. Бактерии – имеют палочковидную форму размером от нескольких долей микрона до 1—5 мкм (различают короткие, длинные, тонкие и толстые палочки). Они различаются друг от друга наличием споры, ее диаметром, формой концов и т. д. Бациллами называют палочки, которые способны образовывать споры, не превышающие в диаметре клетку. Клостридиями считают бактерии, способные к образованию спор, значительно превышающих диаметр бактериальной клетки. Палочки, не способные к спорообразованию, называются бактериями (в узком смысле этого слова).

Бывают палочки с закругленными концами, например, кишечная палочка, с обрезанными краями (палочка сибирской язвы); с заостренными краями (фузобактерии). У коринобактерий края палочек утолщены из-за наличия в них запасов валютина.

Палочки могут располагаются одиночно, по две бактерии (диплобациллы), в виде цепочек (стрептобациллы); некоторые палочки располагают­ся под углом (коринобактерии дифтерии ).

3.  Извитые формы. Если бактерия имеет один завиток спирали, она называется вибрионом (холерный вибрион ). Длина вибрионов 1—3 мкм. Кампилобактерии имеют изгибы тела, напоминающие крылья летящей чайки.

Спириллы, спиралевидные, неподвижные микроорганизмы, имеющие более одного завитка, длиной от 5 до 30 мкм.

Спирохеты - подвижные, извитые формы микроорганизмов. Различают следующие разновидности спирохет: трепонемы имеют 8-12 завитков, симметричны; боррелии имеют 3-8 крупных завитка, не симметричны и лептоспиры, симметричные микроорганизмы имеющие более 10 мелких завитков и 2 крупных изгиба на концах клетки, напоминающие букву S или C.

Методические указания:

Сложные методы окраски используют для выявления различных компонентов бактериальных клеток и для дифференциации бактерий в зависимости от химического состава и ультраструктуры. Для сложных методов окрашивания в отличии от простых используется не менее двух различных красителей, один из которых является основным а другой дополнительным.

Окраска по методу Грама:

1.  На фиксированный мазок нанести основной краситель – генциановый фиолетовый через полоску фильтровальной бумаги. Выдержать 2 мин.

2.  Не промывая мазок, нанести раствор Люголя на 1 мин.

3.  Обесцветить этиловым спиртом 5-10 сек.

4.  Промыть водой.

5.  Нанести раствор водного фуксина на 1-2 мин.

6.  Промыть водой, высушить.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные в красный. Принцип метода заключается в том что генциановый фиолетовый связывается с пептидогликаном клеточной стенки. Толстый слой пептидогликана грамположительных бактерий связывает много красителя. Тонкий слой – грамотрицательных – мало. Раствор Люголя фиксирует краситель за счет образования комплекса краситель-пептидогликан-йод. При обработке мазка спиртом грамотрицательные микроорганизмы быстро теряют краситель и обесцвечиваются. А грамположительные микрооганизмы остаются окрашенными в сине-фиолетовый цвет. Дополнительный краситель окрашивает грамотрицательные микроорганизмы в красный цвет.