Общая микробиология (стр. 9 )

3. Диффузионный тест, особенности его постановки

4. Учет результатов диффузионного теста.

5. Принципы рациональной антибиотикотерапии.

Демонстрация:

1. Результат постановки диффузионного теста.

2. Опыт по бактериоцинотипированию.

3. Аптимикробные препараты.

4. Тест с ТТХ.

5. Тест с использованием метода серийных разведений.

Задание студентам:

1.Учесть результаты опыта по бактериоцинотипированию.

2.Заполнить таблицу:

3. Описать постановку диффузионного теста на антибиотикорезистентность, осуществить постановку теста и учесть результаты. Заполнить таблицу:

Название антибиотика	Диаметр зоны задержки роста	Вывод

4. Отметить достоинства и недостатки данного метода

5. Учесть результаты теста на антибиотикорезистентность методом серийных разведений.

Информационный материал

В природных условиях различные виды микроорганизмов живут в ассоциациях, оказывая взаимное влияние друг на друга, зависящее свойств микробов и от окружающих условий. Одной из форм взаимодействия микробов является антагонизм.

Антагонизм - взаимоотношения между микроорганизмами, которые проявляются в бактериостатическом или бактериоцидном действии друг на друга (задержка развития и гибели микроорганизмов, на которых микроб-антагонист оказывает свое действие)

Явление антагонизма в мире микробов известно давно (Мечников); антагонизм наблюдается среди многочисленных групп микробов и в настоящее время широко используется в медицинской практике в виде применения антибиотиков для лечения и профилактики инфекционных болезней. Антагонисты обнаруживаются в почве, воздухе, воде. При посеве исследуемого материала или смесей микробов присутствие микробов-антагонистов обнаруживается по светлым зо­нам, окружающим их колонии; эти зоны свидетельствуют о подавлении роста угнетаемого микроба, причем величина зоны угнетения определяет ту или иную степень активности антаго­ниста.

1. Чашку с мясо-пептонным агаром равномерно засевают шпателем суточной бульонной культурой угнетаемого микроба (например, стафилококка). Затем из чашки с агаром, предварительно засеянной антагонистом (например, актиномицетом), вырезают вместе с агаром колонию антагониста и накладывают на первую засеянную чашку (колонией кверху). Эту чашку ставят в термостат при 37°. Результат учитывают через сутки — образуется стерильная зона.

2. На чашку с мясо-пептонным агаром посредине широкой полосой засевают суточную бульонную культуру антагониста (например, В. coli M-17). Через сутки перпендикулярно к посеву вплотную подсевают суточную бульонную культуру угнетаемого микроба (стафилококк, шигелла). Результат учитывают через сутки пребывания в термостате — рост угнетаемого микроба отступает от полосы, засеянной антагонистом.

Антибиотики – специфические продукты жизнедеятельности микроорганизмов, обладающие активностью по отношению к определенным организмам – бактериям, грибам, актиномицетам. Антибиотики задерживают либо подавляют их рост.

Существует несколько классификаций, основанных на разных признаках и свойствах антибиотических препаратов.

Основные классификации следующие:

По происхождению; по химической структуре; по механизму действия; по спектру действия; по конечному эффекту.

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяют различными методами. Наиболее распространены следующие.

Метод серийных разведений.

Готовят основной раствор препарата, содержащий определенное количество единиц. Затем в ряд пробирок наливают 1 мл. МПБ. В первую пробирку последовательно переносят по1 мл. основного раствора препарата, затем во 2-ю, 3-ю и т. д.при этом каждое следующее разведение содержит вдвое меньше антибиотика, чем в предыдущем разведении. Затем в каждую пробирку вносят одинаковое количество испытуемой культуры. Контролем являются 2 пробирки. В одной из них МПБ и микроорганизм, в другой МПБ и антибиотик. Посевы инкубируют 18-24 ч. в термостате. Минимальная концентрация антибиотика, при которой не проявляется размножение бактерий, называется бактериостатической дозой.

Метод дисков.

На поверхность питательной среды (АГВ) в чашки Петри засевают «газоном» исследуемую культуру микроорганизмов. Посев проводят, затем на поверхность посева на расстоянии друг от друга накладывают бумажные диски одинакового диаметра, пропитанные различными антибиотиками. Посевы выдерживают в термостате в течение суток. Вокруг дисков образуется зоны задержки роста. Ее измеряют и делают вывод об антиботической активности препарата. Если диаметр зоны задержки роста до11мм, микроорганизм устойчив к действию данного антибиотика, если составляет от 11 до 15 мм, микроорганизм считается умеренно устойчивым, от 15 до 25мм – чувствителен, и свыше 25 – высоко чувствителен.

Методические указания:

Таблица:Принципы классификации микроорганизмов.

Классификация	Примеры
По химическому строению
По происхождению
По способу получения
По группам чувствительных микроорганизмов
По конечному эффекту
По спектру действия
По механизму действия

Методика посева методом бактериального «газона»:

1.Приготовить 2 мл. взвеси исследуемой культуры.

2. Вылить 1 мл. взвеси на поверхность питательной среды при помощи пипетки.

3. «Прокачать» чашку Петри для равномерного распределения материала по поверхности среды.

4. Убрать избыток жидкости с поверхности среды при помощи пипетки.

5. Пипетку с оставшейся взвесью поместить в дезраствор.

Оценка действия на бактерии антимикробных препаратов методом дисков.

1.Исследуемую культуру засевают газоном на чашку Петри с плотной питательной средой (чаще всего на МПА).

2.На засеянную поверхность среды сразу же раскладывают (не более 6 на чашку) стандартные бумажные диски, содержащие антибиотики (30 мкг). Каждый диск маркирован тремя буквами от названия соответствующего антибиотика.

3.Засеянные чашки помещают в термостат.

4.Через 24 часа учитывают результат, измеряя диаметр зоны задержки роста. Чувствительность культуры к антибиотику определяют по таблице, но ориентировочно можно считать: до 12 мм - устойчив, до 20 – умеренно устойчив, более 20 - чувствителен.

Контрольные вопросы:

1.Что такое антибиотики? Какова история их открытия?

2. На чем основан механизм действия пенициллинов?

3. Дайте характеристику диффузионному методу постановки теста на антибиотикорезистентность. Назовите его достоинства и недостатки.

4. Каковы требования к антимикробным препаратам?

5. Какие осложнения могут вызывать антибиотики?

Список литературы:

Обязательная:

1.  , , Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., медицина. 1994 г.

2.  , , Рыбакова . М., Медицина. 1998 г.

3.  , , Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. СпецЛит, 2000 г

4.  Борисов к практическим занятиям по микробиологии. М. 1973 г.

Дополнительная:

1.  , Кривошеин . М., 1980 г.

2.  , Микробиология с основами вирусологии. М., 1974 .

3.  Общая микробиология. М., Мир, 1982

Занятие №8 Бактериофагия.

Цель: Изучить методы выделения, идентификации и титрования бактериофагов. Познакомиться с принципами применения препаратов бактериофагов для лечения и профилактики инфекционных заболеваний.

Знать: Строение бактериофагов, их классификацию, их основные свойства. Определение понятий фагопрофилактика, фаготипирование, фаготерапия, фагодифференцировка.

Уметь: осуществлять постановку опыта по фаготипированию, фагодифференцировке, учитывать их результаты.

Обоснование темы: Фаготипирование является одним из методов идентификации микроорганизмов. Бактериофаги нашли широкое применение для лечения и профилактики инфекционных заболеваний.

Вопросы для самоподготовки:

1.Строение бактериофага, его морфологические группы.

2.Свойства бактериофагов.

3. Этапы взаимодействия бактериофага с бактериальной клеткой.

4. Феномен роста бактериофага на плотной и жидкой питательной среде.

5. Качественные пробы на бактериофаг.

6.Способы титрования бактериофагов.

7 Применение бактериофагов в медицине.

ПЛАН

Программа:

1.Методы выделения бактериофага из окружающей среды и их идентификация.

2.Метод титрования бактериофага по Грациа

3. Метод определения лизогенных бактерий.

4.Метод фаготипирования стафилококков.

5.Качественный проба на бактериофаг по Отто.

Демонстрация:

1. Методы выделения фага из внешней среды.

2. Фаготипирование микроорганизмов.

Задание студентам: