На жидких средах образует выраженное помутнение (через 24-36 ч) и поверхностную пленку; последняя интенсивно окрашивается в оранжево-красный цвет после добавления нейтрального красного. Через 2-5 суток пленка грубеет, утолщается (до 5мм), среда постепенно просветляется, образуется рыхлый осадок. Культуры издают затхлый запах, напоминающий запах плесени.
На твердых средах (например, 5% глицериновом агаре) образует мелкие прозрачные, затем мутнеющие беловатые S-колонии с металлическим блеском. Также можно обнаружить и R-колонии. Сначала они прозрачны, а затем мутнеют, утрачивают правильную форму и сморщиваются. Нередко Pseudomonas pseudomallei образует М-колонии, напоминающие крупные (до 7 мм) куполообразные S-колонии. Диссоциацию наблюдают после 2-3 суток роста на питательной среде. На кровяном агаре растут быстро (через 96 ч колонии могут достигать 1 см), некоторые штаммы дают a-гемолиз. На агаре с лактозой и бромтимоловым синим образуют прозрачные голубые колонии (через 48 ч), на 6-7 сутки они приобретают оранжевую окраску. Некоторые штаммы образуют золотисто-коричневый пигмент на картофельных и глицериновых средах. Отличие от возбудителя сапа — способность расти на средах без глицерина.
Биохимическая активность
Ферментирует с образованием кислоты глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, галактозу, дульцит и декстрин, несколько отсроченно (к 7 суткам) — маннит, арабинозу, рамнозу, ксилозу, левулезу и раффинозу. Не образует индол и H2S; реакция Фогеса-Проскауэра отрицательна; медленно сворачивает и пептонизирует молоко: медленно разжижает желатин.
Патогенез
Внедрение возбудителя сопровождается незначительной воспалительной реакцией. Мигрирующие фагоциты поглощают Pseudomonas pseudomallei, однако фагоцитарные реакции носят незавершенный характер, и возбудитель диссеминирует по кровеносным и лимфатическим путям. В последующем процесс приобретает септико-токсемический характер с формированием абсцедирующих гранулем в различных органах, т. е. его проявления не имеют патогномоничных признаков и часто имитируют различные инфекции.
Клинические проявления
Инкубационный период варьирует от 2 до 14 суток; выделяют 4 основные формы инфекционного процесса — токсическую, острую, подострую и хроническую. Летальность при острых формах может достигать 50% и выше.
Лабораторная диагностика
Включает выделение (рис. 13), серологическое выявление Аг возбудителя, постановку биологической пробы и кожных проб с маллеином. Материалы для бактериологического исследования — кровь, мокрота, моча,
Рисунок 13. Принципиальная схема бактериологического выделения Pseudomonas pseudomallei
гнойное отделяемое из абсцессов и секционный материал (из органов, где имеются очаги поражения). Образцы, контаминированные сопутствующей микрофлорой (выявляют при микроскопии), обрабатывают пенициллином (1000 ЕД на 1 мл). Характерные особенности — медленный рост на кровяном агаре с образованием М-, S - и R-колоний кремово-оранжевого цвета; подвижность; способность к росту при температуре 42°С; способность гидролизовать желатин, аргинин и окислять глюкозу, мальтозу и лактозу. Биологическую пробу проводят на крысах (резистентны к возбудителю сапа) и морских свинках, заражаемых внутрибрюшинным введением соответственно 0,5 и 1 мл суспензии материалов; у самцов морских свинок может развиться феномен Штрауса. В зависимости от вирулентности штамма животные погибают на 3-15 сутки; их вскрытие выявляет характерные поражения внутренних органов и наличие микроорганизмов, которые следует изолировать и определить их биохимические свойства. Серологические исследования включают постановку РСК, РНГА, РА с сывороткой пациента; диагностическими титрами для РА считают разведение 1:640, для РСК — 1:20, для РНГА — 1:4 и выше.
Питательные среды для культивирования и идентификации псевдомонад
Среда Пептон — 20,0 г, глицерин — 10,0 г, калий сернокислый — 10,0 г, магний хлористый — 1,4 г, агар — 20,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл.
Среда Пептон — 20,0 г, глицерин - 10,0 г, калий фосфорнокислый двузамещенный — 1,5 г, магний сернокислый — 1,5 г, агар — 15,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 7,2).
Среда Мак-Конки. Пептон — 20,0 г, лактоза — 10,0 г, натрий хлористый — 5,0 г, таурохолат натрия — 5,0 г, нейтральный красный — 0,03 г, агар — 20,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 7,4).
Среда Хью-Лейвсена. Пептон — 2,0 г, агар - 3,0 г, натрий хлористый — 5,0 г, калий фосфорнокислый двузамещенный — 0,3 г, 0,2 %-ный водный раствор бромтимолового голубого — 15,0 мл, глюкоза — 10,0 г, дистиллированная вода — до 1000,0 мл.
Цетримидный агар. Пептон — 20,0 г, агар —13,0 г, магний хлористый — 1,4 г, калий сернокислый — 10,0 г, цетримид (цетилтриметиламмония бромид) - 0,3 г, глицерин — 10,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 7,2).
Селективная среда (Мороз, Бекбергенов, Афиногенов). Пептон — 20,0 г, агар — 10,0 г, калий сернокислый — 7,0 г, магний хлористый — 15,0 г, магний сернокислый — 1,5 г, цетилпиридиния хлорид — 2,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 6,8-7,0).
Среда с ацетамидом. Агар — 15,0 г, натрий хлористый — 5,0 г, магний сернокислый — 0,2 г, аммоний фосфорнокислый однозамещенный — 1,0 г, калий фосфорнокислый двузамещенный — 1,0 г, ацетамид — 20,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 6,7).
Среда Паллерони—Дудорова. Хлористый аммоний — 1,0 г, магний сернокислый — 0,5 г, железо аммоний цитрат — 0,05 г, хлористый кальций — 0,005 г, 0,33 М Na-К фосфатный буфер (рН 6,8) — до 1000 мл. Первые два ингредиента добавляют к буферному раствору и автоклавируют при 115°С 30 минут. Железа аммонийцитрат и хлористый кальций стерилизуют путем фильтрации и вносят в основной раствор асептически (перед засевом среды).
Картофельно-глицериновая среда. Вырезанные из очищенного картофеля цилиндры диаметром 1 см и длиной 4-5 см разрезают по диагонали для получения клиньев. Клинья выдерживают 2 ч в 1%-ном растворе бикарбоната натрия, после чего подсушивают и в течение 2 суток вымачивают в 5-6%-ной глицериновой воде или бульоне. Опускают основанием вниз в пробирки с 5%-ной глицериновой водой. Для того чтобы картофель не касался глицериновой воды, используют пробирки с перетяжкой в нижней части или в них опускают короткие стеклянные палочки. Среду автоклавируют при 115-120°С 20 минут.
Пробирки со средой хранят в наклонном положении плоской поверхностью картофеля вниз (с целью сохранения поверхности для посева влажной).
Микроорганизмы рода Frаncisella
Francisella — мелкие кокковидные (до эллипсоидных) при культивировании на подходящей среде, впоследствии плеоморфные палочки; неподвижные, спор не образуют. Строгие аэробы; не растут на обычных средах; расщепляют некоторые углеводы с образованием кислоты, образуют H2S. Распространены во многих пресноводных водоемах; могут паразитировать у человека, млекопитающих, птиц и членистоногих; род представлен видами Francisella novicida (известен один уникальный штамм, выделенный из озерной воды в США) и Francisella tularensis (возбудитель туляремии — болезнь Фрэнсиса). Заболевание впервые описано японскими врачами (1837). До открытия Охарой (1925) новой бактерии, названной кокком Охары-Хагч, болезнь не связывали с конкретным возбудителем. Как возбудитель чумоподобной лихорадки земляных белок (Cytellus beechei) микроорганизм также выделили Маккой и Чепин (1911) в районе озера Туляре (графство Туляре, штат Калифорния). Позднее была установлена эпидемическая связь заболевания с кровососущими членистоногими (1924), лишь в 1928 г. Фрэнсис доказал идентичность туляремии и болезни Охары. Нозогеографически туляремия принадлежит к распространенным инфекциям, ее регистрируют повсеместно в Северном полушарии (исключая Англию) в ареале между 30° и 70° с. ш. На территории РФ впервые официально выделена данная культура С. Суворовым и др. в 1926 г (Астраханская область). Возбудитель дифференцируют на экологогеографические расы и варианты. Тип A (Nearctica) выделяют от многих грызунов и кровососущих насекомых; высоковирулентен для человека и кроликов; ферментирует глицерин, содержит цитруллинуреидазу. Тип распространен в Северной Америке; очень патогенен для человека. Тип В (Palaearcticа) выделяют из воды и от водных животных; маловирулентен для человека и кроликов; не ферментирует глицерин, не содержит цитруллинуреидазу. Возбудитель регистрируют в Европе и Азии; не ферментирует глицерин, умеренно патогенен для домашних кроликов и человека, вариант japonica выделяют в Японии (ферментирует глицерин), вариант mediasiatica вызывает заболевания в Средней Азии в дельтах рек Или и Аму-Дарьи (ферментирует глицерин, содержит цитруллинуреидазу; умеренно патогенен для домашних кроликов и человека).
Распространение
Francisella tularensis выделена от многих диких и домашних животных, а также птиц, рыб и земноводных. Основные источники заражения человека — обыкновенные полевки (Microtus arvalis), домовые мыши (Mus musculus), водяные крысы (Arvicola terrestis), ондатры (Ondathra zibethica), а также зайцы, особенно русак (Lepus europeus) и беляк (L. timidus). Переносчики инфекции — кровососущие членистоногие: иксодовые и гамазовые клещи, блохи, слепни (оленьи мухи), комары, москиты.
На юго-западе США бактерии выделяют из оленьих мух; на северо-западе — из лесных клещей. На востоке США возможными источниками инфекции для человека считают белок-летяг (Pternmyidae).
Человек заражается от больных животных, кровососущих членистоногих или объектов внешней среды. Пути заражения: контактный (через кожу и слизистую оболочку глаз), инокулятивный (при укусе переносчика), алиментарный (через ЖКТ) и аспирационный (через дыхательные пути).
Морфология
Клетки Francisella tularensis — мелкие (размером 0,1-0,5 мкм), неподвижные капсулированные грамотрицательные палочки с выраженным полиморфизмом (от кокковидных до нитевидных форм), особенно у неарктических видов. В мазках из культур доминируют кокковидные формы, в мазках из органов — коккобактерии, которые возможно слабо воспринимают краситель и окрашиваются бледнее, чем прочие патогенные микроорганизмы, однако бактерии легко воспринимают краску Гимзы; в мазках-отпечатках не дают биполярной окраски, что отличает их от возбудителя чумы, но в чистой культуре могут окрашиваться биполярно. Размножаются почкованием. Отличий в микроструктуре клеток различных рас не отмечают: у авирулентных штаммов находят массированное подобие капсулы, у вирулентных — нестойкое слизистое вещество. Клеточная стенка имеет гладкие контуры.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 |
Основные порталы (построено редакторами)