Приведенные выше данные позволяют сделать заключение, что этанол in vitro обладает способностью подавлять цитолитическую активность NK-клеток в широком диапазоне концентраций.
1.3. Влияние этанола на экспрессию активационных CD молекул
Исследовали влияние этанола in vitro на экспрессию активационных CD молекул (CD25, HLA–DR и CD38) на T - и B-лимфоцитах и NK-клетках, которую определяли по интенсивности флуоресценции всех позитивных CD4+, CD8+ Т-лимфоцитов, CD19+ В-лимфоцитов и CD3-56+ NK-клеток. На весь период культивирования лимфоцитов цельной крови здоровых лиц (18 часов при 37°C в атмосфере влажности с 5% СО2) в инкубационную среду вносили этанол в конечных концентрациях 6×10-5; 6×10-4; 6×10-3; 6×10-2 и 6×10-1 мг/мл. Контролем служили соответствующие культуры клеток без внесения этанола.
Результаты исследования представлены в табл. 6. Как видно из таблицы, концентрации этанола, которые обладают наиболее выраженным эффектом усиления индуцированной Con A пролиферации T-лимфоцитов in vitro, приводят к статистически значимому снижению экспрессии HLA–DR молекул на CD4+ Т-лимфоцитах. Наиболее выраженный эффект снижения экспрессии HLA–DR молекул на CD4+ Т-лимфоцитах наблюдается при дозах этанола, вызывающих слабое (6×10-2 мг/мл) и сильное (6×10-1 мг/мл) опьянение. В то же время, как видно из табл. 6, этанол в концентрациях 6×10-5–6×10-1 мг/мл статистически значимо повышает экспрессию этих молекул на CD8+ Т-клетках и CD19+ B-лимфоцитах в сравнении с показателями культур без внесения этанола. Этанол в указанных концентрациях также статистически значимо усиливает экспрессию молекулы адгезии CD38 как на CD8+ Т-клетках, так и на CD19+ В-лимфоцитах (табл. 6).
Таблица 6.
Влияние этанола на экспрессию активационных молекул CD25, HLA–DR и CD38 на клетках периферической крови здоровых лиц in vitro (M±σ)
Показатель | Интенсивность флуоресценции (у. е.) MFI (mean fluorescence unit) | |||||
Контроль (n=10) | 6×10-5 мг/мл (n=10) | 6×10-4 мг/мл (n=10) | 6 ×10-3 мг/мл (n=10) | 6×10-2 мг/мл (n=10) | 6×10-1 мг/мл (n=10) | |
CD4+25+ | 18±2,77 | 17,99±2,8 | 18,4±2,8 | 18,3±2,7 | 18,3±2,77 | 19,3±2,93 |
CD4+DR+ | 231,6±8,4 | 229,5±8,5 | 214,8±7,21↓ | 125,2±6,67* | 89,6±4,06** | 98,6±4,54** |
CD4+38+ | 91±5,6 | 91,3±5,0 | 90,95±5,68 | 91,0±5,5 | 105,3±3,42 | 103,4±3,1 |
CD8+25+ | 1,5±0,16 | 7,8±2,0*** | 14,0±2,1*** | 25,5±2,5 *** | 23,5±1,8*** | 20±1,1*** |
CD8+DR+ | 196±19,2 | 399,2±20,7* | 516±35,85** | 1799±122,2*** | 1111±100,4*** | 790±45,9 *** |
CD8+38+ | 138,7±7,94 | 140,6±9,0 | 158,28±8,0↑ | 174,4±5,78* | 216,3±9,2** | 203,33±8,46 * |
CD19+DR+ | 224,3±9,96 | 238,2±9,3 | 269,4±10,15↑ | 300,7±8,4* | 359,4±7,46* | 295,66±8,97 * |
CD19+38+ | 22,6±1,4 | 23,0±2,0 | 24,1±1,9 | 28,15±2,4↑ | 39,5±3,5* | 38,2±3,24 * |
CD3-56+DR+ | 160,7±20,6 | 161,1±21,0 | 165,3±20,8 | 166,4±24,6 | 164,25±25,1 | 163,66±23,1 |
Примечание: * – p<0,05; ** – p<0,001; *** – p<0,001 – статистически значимые отличия показателей экспрессии CD25, HLA–DR, CD38 на T - и B-лимфоцитах и NK-клетках в присутствии этанола в сравнении с контрольными культурами в отсутствии этанола; ↑ – тенденция к увеличению и ↓ – тенденция к снижению показателя от нормы; t-критерий Стьюдента
Под влиянием этанола на CD8+-лимфоцитах статистически значимо повышается экспрессия CD25-молекулы, причём это повышение отмечается при всех исследованных концентрациях этанола (6×10-5–6×10-1 мг/мл) в сравнении с контрольными культурами без внесения этанола. Изменений в экспрессии CD25 молекул на CD4+ Т-лимфоцитах не наблюдается (табл. 6).
Таким образом, этанол обладает тропностью к CD8+ Т-лимфоцитам, что проявляется усилением экспрессии активационных молекул на этих клетках и снижением их экспрессии на CD4+ Т-лимфоцитах. Усиление экспрессии активационных молекул на CD8+–цитолитических Т-лимфоцитах приводит к активации эффекторного (киллерного) механизма иммунной системы, что является в свою очередь определяющим моментом в развитии патологии органов и систем.
1.4. Влияние этанола на экспрессию молекул HLA I класса
Исследовано влияние этанола на экспрессию молекул HLA I класса на клетках крови in vitro, которую определяли по интенсивности флуоресценции всех позитивных клеток периферической крови (T - и В-лимфоцитов, NK-клеток, моноцитов и нейтрофилов). На весь период культивирования (18 часов при 37°C в атмосфере влажности с 5% СО2) лимфоцитов цельной крови (от 10 здоровых лиц без синдрома зависимости от алкоголя) в инкубационную среду вносили этанол в конечных концентрациях 6×10-5; 6×10-4; 6×10-3; 6×10-2 и 6×10-1 мг/мл. Контролем служили соответствующие культуры клеток без этанола (табл. 7). Обработку крови после 18-часовой инкубации с этанолом и без него проводили согласно протоколу фирмы “Becton Dickinson” (USA) с помощью моноклональных антител к молекулам HLA I класса.
Таблица 7.
Экспрессия молекул HLA I класса на клетках периферической крови здоровых лиц после воздействия различных доз этанола in vitro (M±σ)
Концентрации этанола, мг/мл | Интенсивность флуоресценции, у. е. n=10 | |
контроль (в отсутствии этанола) | 438,±14,92 | |
6×10-5 | 600±21,4* |
|
6×10-4 | 648,5±22,6 * |
|
6×10-3 | 690,4±23,0 * |
|
6×10-2 | 818,1±23,5 ** |
|
6×10-1 | 829,5±24,7 ** |
|
Примечание: * – p<0,05; ** – p<0,001 – статистически значимые отличия показателя суммарной экспрессии молекул HLA I класса в присутствии этанола от показателя контрольных культур в отсутствии этанола; t-критерий Стьюдента
Результаты исследования представлены в табл. 7. Как видно из таблицы, этанол в концентрациях 6×10-5–6×10-1мг/мл, вносимый в культуры клеток крови in vitro, усиливает экспрессию молекул HLA I класса на всех клетках крови. Обнаружено, что наибольшим, статистически значимым, эффектом усиления экспрессии этих молекул, обладают дозы этанола, вызывающие слабое (6×10-2 мг/мл) и сильное (6×10-1) опьянение.
Таким образом, установлено, что этанол обладает способностью усиливать экспрессию молекул HLA I класса на клетках крови и, по-видимому, на многих других клетках организма, в широком диапазоне доз. Известно, что молекулы HLA I класса осуществляют контактные взаимодействия различных клеток организма человека с CD8+-лимфоцитами, что свидетельствует о влиянии этанола на процессы кооперации между этими иммунокомпетентными клетками и другими клетками организма.
1.5. Влияние этанола на хемилюминесценцию фагоцитов
Исследовали влияние этанола на способность фагоцитирующих клеток крови человека активироваться при воздействии на них зимозаном и ФМА in vitro. На весь период культивирования (18 часов при 37°C в атмосфере влажности с 5% СО2) клеток цельной крови от 10 здоровых лиц в инкубационную среду вносили этанол в конечных концентрациях 6×10-5–6×10-1 мг/мл, контролем служили соответствующие культуры клеток без этанола.
Результаты исследования влияния этанола на кислородзависимую активность фагоцитирующих клеток in vitro представлены в табл. 8. Как видно из таблицы, этанол в концентрациях, вызывающих слабое (6×10-2 мг/мл) и сильное (6×10-1 мг/мл) опьянение, подавляет хемилюминесценцию фагоцитирующих клеток, как спонтанную кислородзависимую, так и индуцированную зимозаном и ФМА. Причем, это подавление было статистически значимым по сравнению с показателями культур без этанола. Выявленные факты являются, по-видимому, следствием токсического эффекта высоких концентраций этанола. В то же время, этанол в концентрациях 6×10-5–6×10-3мг/мл не индуцирует спонтанную и статистически значимо подавляет зимозан-индуцированную хемилюминесценцию фагоцитов. Обнаружено также, что этанол, при внесении его в культуры фагоцитирующих клеток in vitro в концентрациях 6×10-5–6×10-1мг/мл, подавляет ФМА-индуцированную хемилюминесценцию фагоцитирующих клеток.
Таблица 8.
Влияние этанола на хемилюминесценцию фагоцитирующих клеток после 18-часовой инкубации цельной крови здоровых лиц in vitro (M±σ)
Концентрация этанола, мг/мл | Хемилюминесценция фагоцитирующих клеток, n=10 | ||||
Спонтанная (имп/мин) | Индуцированная зимозаном | Индуцированная ФМА | |||
имп/мин | ИС | имп/мин | ИС | ||
контроль (без этанола) | 1642,3±492.3 | 13292±1118 | 8,48±2,3 | 8892±748 | 5,4±1,49 |
6×10-5 | 1643±486 | 12396±1052 | 7,5±1,8 | 6036±332* | 4,95±1,23 |
6×10-4 | 1654±500 | 11228±945 | 6,8±1,59 | 5326±327* | 3,67±1,22 * |
6×10-3 | 1645,6±500,0 | 10878±875,4 | 6,6±1,54 | 5081,3±305* | 3,2±0,98 * |
6×10-2 | 673±50,9** | 2288±405 *** | 3,5±0,71** | 1952,6±398** | 3,08±0,97 * |
6×10-1 | 337±23,8*** | 308±7,2*** | 0,9±0,2*** | 360,3±21,4*** | 1,06±0,45*** |
Примечание: * – p<0,05; ** – p<0,001; *** – p<0,0001 – статистически значимые отличия показателей хемилюминесценции фагоцитов в присутствии этанола от показателей контрольных культур в отсутствии этанола; t-критерий Стьюдента
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 |
Основные порталы (построено редакторами)