На правах рукописи
ОСОБЕННОСТИ СОСТАВА УГЛЕВОДНОГО КОМПОНЕНТА ГЛИКОПРОТЕИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ ТРОМБОЦИТОВ И ИХ АГРЕГАЦИОННОЙ СПОСОБНОСТИ У ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ И У БОЛЬНЫХ С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПАРОДОНТА
03.00.13 – физиология
14.00.21 – стоматология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Саратов – 2007
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Научные руководители:
заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук,
профессор ;
доктор медицинских наук,
профессор .
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор ;
доктор медицинских наук, профессор .
Ведущая организация: ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава».
Защита состоится «__»_________2007 года в __ часов на заседании диссертационного совета Д 208.094.03 при ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава» 12.
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава».
Автореферат разослан «__»_________2007 года.
Ученый секретарь диссертационного совета,
кандидат медицинских наук, доцент
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Актуальность проблемы
Несмотря на большой интерес к изучению болезней пародонта они до сих пор остаются недостаточно изученными. Среди них особое место занимают заболевания воспалительного характера, прежде всего гингивит и генерализованный пародонтит ( и соавт., 1982, 1984, 1989, 1998; и соавт., 1992, 1994, 1995, 1996, 2002; и соавт., 1997, 1999, 2000, 2001; , 2005).
Изменения микроциркуляции занимают одно из ведущих мест в нарушениях гомеостаза организма человека (, , 1975; , 1999, 2002, 2005). Роль нарушений в различных звеньях системы гемостаза и гемореологических расстройств хорошо известна в патогенезе микроциркуляторных нарушений (, , 1975; Schmid-Schonbein H., 1988).
Расстройства микроциркуляции играют ключевую роль в патогенезе воспалительных заболеваний пародонта и коррелируют со степенью их тяжести. Изменения в сосудах пародонта и нарушения кровотока служат верным диагностическим признаком на ранних этапах нарушения трофики в тканях пародонта. По мере прогрессирования и генерализации патологического процесса нарушения микроциркуляции нарастают, а изменения в сосудах приобретают генерализованный характер (, 2001; , , и соавт., 2005). В микроциркуляторном русле пародонта методом реопародонтографии выявлено снижение показателя тонуса сосудов, индексов периферического сопротивления и эластичности сосудов (, , 2001; , 2002). Повреждение эндотелиоцитов сопровождается развитием сладж-синдрома, что подтверждается наличием значительного количества тромбоцитов, располагающихся не только в просвете сосудов, но и в собственно слизистой оболочке десны (, , и соавт., 2001).
В настоящее время имеются лишь единичные работы, посвященные состоянию микроциркуляторного звена системы гемостаза (функциональной активности тромбоцитов и тромборезистентности эндотелия сосудистой стенки) у больных гингивитом и генерализованным пародонтитом (, , и соавт., 2002, 2003; , 2004; , и соавт., 2005; , , 2005; , 2007).
В тоже время известна роль гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов, взаимодействующих со специфическими агонистами в осуществлении их функциональной активности – адгезии, агрегации и секреции (, , 1994; и соавт., 1999; , 1999, 2002, 2005; , 2000; , 2004; Fitzgerald L. А., Phillips D. R., 1987). Важное значение при этом имеет состав углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок (, , 2000; , , 2002; , , 2004). Однако не изучено значение рецепторного аппарата тромбоцитов, в частности, состава их углеводного компонента у больных с воспалительными заболеваниями пародонта, приводящими к изменению функциональной активности тромбоцитов и связанного с этим нарушением внутрисосудистого компонента микроциркуляции.
Цель работы: изучить особенности состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у практически здоровых лиц, его изменения у больных с воспалительными заболеваниями пародонта и определить роль нарушения состава гликопротеиновых рецепторов в функциональной активности тромбоцитов при указанной патологии пародонта.
Задачи исследования:
1. Изучить роль состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран в агрегационной активности тромбоцитов у практически здоровых лиц.
2. Определить особенности состава гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок у больных различными формами гингивита и установить характер его изменений после купирования воспалительного процесса в тканях пародонта.
3. Выяснить состав углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок у больных генерализованным пародонтитом различной степени тяжести в стадии обострения заболевания.
4. Определить состав гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у больных генерализованным пародонтитом различной степени тяжести в стадии ремиссии.
5. Выяснить особенности состава гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов в стадии обострения и ремиссии у больных с быстропрогрессирующим пародонтитом.
6. Установить степень нарушений в агрегационной активности тромбоцитов при воспалительных заболеваниях пародонта в зависимости от характера изменений в составе углеводного компонента их гликопротеиновых рецепторов.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. У практически здоровых лиц процесс агрегации тромбоцитов в основном обеспечивается содержанием в углеводном компоненте их гликопротеиновых рецепторов b-D-галактозы. Меньшее значение в механизме агрегации кровяных пластинок имеет наличие в углеводном остатке их гликопротеиновых рецепторов N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. Роль маннозы в рецепторах тромбоцитов в процессе их агрегации незначительна.
2. У больных катаральным и язвенным гингивитом в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов увеличивается содержание преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы. После купирования воспалительного процесса в тканях пародонта происходит восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, характерного для практически здоровых лиц.
3. При обострении генерализованного пародонтита различной степени тяжести в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов больных увеличивается содержание N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы.
4. В стадии ремиссии генерализованного пародонтита легкой степени происходит полное восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, а при средней и тяжелой степени – лишь частичное.
5. Наибольшее изменение в составе гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов за счет увеличения содержания N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, и в меньшей степени маннозы и b-D-галактозы наблюдается у пациентов с быстропрогрессирующим пародонтитом. После проведенного комплексного лечения указанного заболевания не происходит восстановления состава их гликопротеиновых рецепторов.
6. Усиление процесса агрегации тромбоцитов у больных с воспалительными заболеваниями пародонта обусловлено возрастанием содержания в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы в отличие от практически здоровых лиц, у которых он обеспечивается наличием в их рецепторах преимущественно b-D-галактозы.
Научная новизна
Установлено, что у практически здоровых лиц процесс агрегации тромбоцитов обусловлен наличием в углеводном компоненте их гликопротеиновых рецепторов b-D-галактозы, в меньшей степени - N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. Роль маннозы в рецепторах тромбоцитов в процессе их агрегации незначительна.
Впервые показано, что нарушения функциональной активности кровяных пластинок, сопровождающиеся усилением их способности к агрегации, у больных в стадии обострения различных форм воспалительных заболеваний пародонта обусловлены изменением состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов за счет возрастания содержания N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы. Восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов происходит только после купирования воспалительного процесса при катаральном и язвенном гингивите, а также в стадии ремиссии генерализованного пародонтита легкой степени.
Наибольшие изменения в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов наблюдаются у больных с быстропрогрессирующим пародонтитом, а также при генерализованном пародонтите средней и тяжелой степени в стадии обострения.
Практическая значимость
1. Определение изменения состава углеводной детерминанты гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, имеющего важное значение в нарушении внутрисосудистого компонента микроциркуляции, может служить объективным критерием тяжести течения воспалительного процесса в тканях пародонта.
2. Нарушение микроциркуляции, выявленное у больных с воспалительными заболеваниями пародонта, и обусловленное усиленной способностью тромбоцитов к агрегации за счет изменения состава их гликопротеиновых рецепторов, диктует необходимость включения в состав комплексного лечения больных с указанной патологией лекарственных препаратов, нормализующих состав гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок и связанное с этим восстановление нарушенных функций тромбоцитов.
Внедрение результатов
Основные положения диссертации используются при обследовании больных воспалительными заболеваниями пародонта в стоматологическом отделении №2 Клинической больницы №3 ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава».
Полученные результаты исследований внедрены в учебный процесс на кафедрах нормальной физиологии, хирургической стоматологии и терапевтической стоматологии ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава».
Апробация работы
Результаты работы доложены и обсуждены на 8-й Всероссийской научной конференции «Новые технологии в стоматологии и имплантологии» (Саратов, 2006); VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в ХХI веке» (Москва, 2006); II Всероссийской научной конференции с международным участием «Микроциркуляция в клинической практике» (Москва, 2006); VI Международной конференции «Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям)» (Ярославль, 2007).
По материалам диссертации опубликовано 7 работ, одна из них в реферируемом журнале, рекомендованная к печати ВАК.
Объем и структура работы
Диссертация изложена на 190 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, двух глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 351 источник, из них 144 – отечественных, 207 – зарубежных авторов. Диссертация содержит 40 таблиц, 13 рисунков.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Клиническая характеристика объектов исследования
Для решения цели и задач исследования под нашим наблюдением находились 267 больных с заболеваниями пародонта, из них 85 пациентов с гингивитом, 182 – с пародонтитом (таб.1). Больные находились на амбулаторном лечении в стоматологической поликлинике 3-й клинической больницы ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава»; стоматологическом отделении областного госпиталя ветеранов войн (г. Саратов); стоматологической клинике «Дента-Мед» (г. Саратов).
При постановке диагноза заболеваний пародонта учитывалась классификация, принятая на ХVI Пленуме Всесоюзного общества стоматологов (1983г.) с изменениями и дополнениями Президиума секции пародонтологии Российской академии стоматологии (2001г.).
Таблица 1
Группы обследованных больных
Характер поражения пародонта | n=267 | |
абсолютное число | % | |
Гингивит катаральный | 51 | 19,1 |
Гингивит язвенный | 34 | 12,74 |
Пародонтит легкой степени | 44 | 16,52 |
Пародонтит средней степени | 49 | 18,4 |
Пародонтит тяжелой степени | 50 | 18,73 |
Быстропрогрессирующий пародонтит | 39 | 14,51 |
Контрольные исследования проведены на 30 практически здоровых лицах обоего пола, у которых при обследовании не было выявлено какой-либо патологии челюстно-лицевой области. Все лица этой группы давали письменное согласие на проведение обследования. Средний возраст практически здоровых лиц составил 48,3±1,9 года.
Возраст больных с заболеваниями пародонта колебался от 17 до 68 лет, средний возраст составил 49,7±2,1 года. Среди обследованных лиц с заболеваниями пародонта мужчин было 56,2%, женщин – 43,8%.
С гингивитом было обследовано 85 пациентов. Из них у 51 человека (60,0%) был выявлен катаральный гингивит, у,0%) - язвенный гингивит.
Из общего количества больных пародонтитом (182 пациента) 44 человека (24,12%) имели генерализованный пародонтит легкой степени,,94%) - генерализованный пародонтит средней степени,,5%) - генерализованный пародонтит тяжелой степени,,44%) - быстропрогрессирующий пародонтит.
Для получения объективных результатов больные всех обследованных групп были сопоставлены по продолжительности болезни, характеру и глубине поражения тканей пародонта. Все больные были без выраженной сопутствующей патологии.
Всем пациентам проводилось комплексное обследование. Результаты фиксировались в истории болезни по форме 043/у и формализованной истории болезни.
Программа обследования включала клинический осмотр, при котором отмечали зубную формулу, состояние прикуса, уздечек верхней и нижней губ, тяжей, наличие мягкого зубного налета, над - и поддесневых отложений, отмечали глубину пародонтальных карманов, характер экссудата, степень кровоточивости десны, изменение цвета слизистой оболочки десны.
Для объективной оценки состояния тканей пародонта обследование больных с воспалительными заболеваниями пародонта проводилось по следующим показателям: определение УИГ - упрощенного индекса гигиены (Грин-Вермильон, 1969); ИГ - индекса гингивита (Löe и Silness, 1967); РМА - папиллярно-маргинально-альвеолярного индекса (Parma C., 1960); ПИ - пародонтального индекса (Russel А., 19таб.2); определение кровоточивости десны при зондировании (, , 1996); измерение глубины пародонтальных карманов, степени подвижности зубов (, 1954). Кроме того проводилось определение индекса периферического кровообращения (, 1981), пробы функциональной стойкости капилляров (, 1967), рентгенологическое исследование (панорамная рентгенография, ортопантомография), реопародонтография, а также клинический и биохимический анализы крови.
Таблица 2
Индексная оценка состояния пародонта здоровых лиц и больных воспалительными заболеваниями пародонта
Группы | УИГ | РМА(%) | ПИ |
Гингивит | 2,1±0,5 | 44,5±2,5 | 1,5±0,2 |
Пародонтит легкой степени | 2,2±0,5 | 46,7±2,0 | 3,4±0,7 |
Пародонтит средней степени | 2,3±0,9 | 63,5±3,0 | 4,2±0,8 |
Пародонтит тяжелой степени | 2,6±0,1 | 82,5±2,5 | 6,4±0,5 |
Быстропрогрессирующий пародонтит | 2,8±0,2 | 85,7±2,5 | 7,6±0,9 |
Здоровые | 0,9±0,09 | - | - |
Исследование системы гемостаза
Исследование микроциркуляторного (сосудисто-тромбоцитарного) звена системы гемостаза проводилось в лаборатории гемостаза и реологии крови на кафедре нормальной физиологии ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава» (заведующий кафедрой заслуженный деятель науки РФ, профессор ).
Микроциркуляторное звено системы гемостаза оценивали по функциональной активности тромбоцитов.
Метод исследования агрегационной функции тромбоцитов
Основным методом исследования агрегационной функции тромбоцитов является метод светорассеяния, предложенный Борном (1963), применившим графическую регистрацию изменения оптической плотности раствора.
Принцип метода заключается в регистрации оптической плотности (светопропускания) суспензии отмытых тромбоцитов. Измерения проводятся в условиях перемешивания клеток до и после добавления веществ – индукторов агрегации. Изменение оптических свойств исследуемого раствора в процессе агрегации тромбоцитов происходит за счет рассеивающей поверхности клеток в результате их склеивания друг с другом.
По мере агрегации тромбоцитов интенсивность света, прошедшего через суспензию клеток, увеличивается.
Характер агрегационной кривой зависит от концентрации тромбоцитов в плазме, скорости перемешивания плазмы и концентрации добавляемого индуктора агрегации.
Нами определялась агрегация тромбоцитов методом, предложенным в 1989 году и соавт., разработанным в КНЦ АМН РФ, при помощи лазерного анализатора агрегации «Биола 230», сопряженного через интерфейс с IBM-совместимым компьютером. Метод основан на создании потока тромбоцитов через оптический канал прибора и статистическом анализе флуктуации светопропускания, вызванных случайными изменениями числа частиц в канале. Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему радиусу и размеру микроагрегатов и использовалась нами для исследования кинетики агрегации. Метод отличается от классического метода Борна (1962) в модификации О’Брайена (1966) высокой чувствительностью.
Данный метод изучения агрегации тромбоцитов достаточно физиологичен, так как тромбоциты находятся в естественной среде обитания – плазме крови, в которой сохраняются основные компоненты системы гемостаза, оказывающие в условиях целостного организма влияние на процесс агрегации тромбоцитов.
Функциональную активность кровяных пластинок определяли в богатой тромбоцитами плазме и суспензии отмытых тромбоцитов. Богатую тромбоцитами плазму получали путем центрифугирования стабилизированной крови. Суспензию отмытых тромбоцитов получали по методу H. Patcheke (1981) с изменениями (, , и соавт., 1991). Тромбоциты дважды отмывали растворами Тироде – цитрат (рН=6,5), затем суспензировали в модифицированном растворе Тироде – Hepes (рН=7,35) с добавлением СаСl2 1 мМ, MgCl2 1 мМ.
Индукторами агрегации отмытых тромбоцитов были растительные лектины: конканавалин А (Соn А), лектин зародышей пшеницы (WGA) и фитогемагглютинин Р - РНА-Р (фирма «Лектинотест», Украина). При исследовании агрегации к 300 мкл отмытых тромбоцитов после минутного термостатирования при 37ºС добавляли Соn А, WGA и РНА-Р по 10 мкл в концентрации 32 мкг/мл (, 1995; , , и соавт., 1998).
Лектины для настоящего исследования были выбраны с учетом их различной углеводной специфичности (, 1995) с целью наиболее точной и полной идентификации углеводных компонентов тромбоцитарных гликопротеиновых рецепторов, опосредующих их агрегацию. Так, РНА-Р взаимодействует почти со всеми углеводными компонентами гликопротеиновых рецепторов, хотя преимущественно он связывается с участками b-D-галактозы (, 1988). WGA специфически реагирует с N-ацетил-D-глюкозамином, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислотой (, , 1989), Con А – с маннозасодержащими участками (, , 1986).
Агрегацию тромбоцитов исследовали при стандартных условиях термостатирования (37ºС) и скорости перемешивания магнитной мешалки 800 об/мин. Индуктор добавлялся на 30-й секунде от исследования. Длительность регистрации процесса агрегации тромбоцитов составляла 15 мин.
При помощи IBM-совместимого компьютера и специализированной MS-Windows-cовместимой программы «Aggr» производилась запись кривых, отражающих процесс агрегации, индуцируемый различными лектинами, - агрегатограмм, которые и подвергались последующему анализу.
За начальный уровень агрегации (0%) принималось светопропускание обедненной тромбоцитами плазмы. Калибровка прибора проводилась заново для каждого образца крови.
Специализированная MS-Windows-cовместимая программа «Aggr» (НПФ «Биола», Россия) позволяла определять две группы показателей: а) характеризующие изменение светопропускания ОТП (собственно агрегацию); б) характеризующие изменение среднего размера тромбоцитарных агрегатов.
При объяснении результатов, полученных при анализе агрегатограммы, принимались во внимание их общепринятые трактовки (, , 1998; , , 1999; , , 2000; Kirichuk V., Voskoboy I., 1997).
Методы математического анализа полученных данных
Анализ полученных результатов клинических исследований проводился методами математической статистики с помощью пакета прикладных программ «STATGRAPHICS Plus 5.1.», разработанных Statistical Graphics Corp. в гг.
Тест Колмогорова-Смирнова и критерий согласия χ2 показали, что все предложенные случайные величины в основном распределены по нормальному закону, с достоверностью не менее 95%. Для данных, закон распределения которых имеет отклонения от нормального, были использованы методы, не чувствительные к виду распределения. При статистической обработке были вычислены основные вероятные характеристики случайных величин (среднее значение, среднее квадратичное отклонение, доверительный интервал), которые, согласно функции распределения погрешностей Стьюдента, имели достоверность не менее 95% (Р-значение ≤ 0,05). Для анализа данных были использованы следующие методы математической статистики: t-критерий Стьюдента, критерий Фишера, метод контрастов множественного сравнения с процедурой H. Schtffe, дисперсионный анализ, множественный пошаговый регрессионный анализ, выборочная регрессия, дискриминантный анализ («STATGRAPHICS Plus 5.1.», 2001).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Особенности состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов практически здоровых людей
Процессы адгезии и агрегации кровяных пластинок определяются функциональным состоянием их рецепторного аппарата – гликопротеиновых рецепторов (, , 1994; и др., 1999; , 1999, 2002, 2004; , 2000; , 2004; Fitzgerald L. А., Phillips D. R., 1987), которое обусловлено биохимическим составом их О - и N-гликанов (, , 2000).
Исследование действия лектинов на тромбоциты показало, что некоторые из них способны индуцировать агрегацию тромбоцитов и секрецию тромбоцитарных гранул, а также агрегацию эритроцитов и нейтрофильных лейкоцитов (, , 2000, 2004). Предполагается, что действие лектинов может моделировать эффекты классических агонистов тромбоцитов, таких как тромбин, АДФ и др. (, , 2000; Ganguly P. et al., 1979, 1980, 1985; Torti et al., 1995). Подобные свойства лектинов позволяют использовать их не только для анализа структуры углеводных цепей тромбоцитарных гликопротеидов, но и для изучения участия этих белков в процессах активации и агрегации тромбоцитов ( и соавт., 1998).
Как видно их данных, представленных в таблицах 3, 4, 5 и на рис.1 фитогемагглютинин Р (РНА-Р), лектин зародышей пшеницы (WGA) и конканавалин А (Con A) в дозе 32 мкг/мл индуцируют агрегацию тромбоцитов практически здоровых людей, о чем свидетельствует наличие в агрегатограмме таких показателей агрегации тромбоцитов, как максимальная степень их агрегации, время достижения максимальной степени агрегации, максимальная скорость агрегации тромбоцитов, время достижения максимальной скорости образования тромбоцитарных агрегатов, причем наибольшее значение эти показатели имеют при использовании в качестве индуктора агрегации фитогемагглютинина Р, меньшее – лектина зародышей пшеницы WGA. Наименьшее значение указанных показателей агрегатограмм наблюдается при использовании в качестве индуктора агрегации - конканавалина А [Con A] (рис.1).
|
|
|
|
|
Рис.1. Агрегатограммы здоровых лиц, вызванные лектинами
РНА – Р, WGA, Соn A в дозах 32 мкг/мл
Представленные данные свидетельствуют о том, что процесс агрегации тромбоцитов в основном обеспечивается наличием в их гликопротеиновых рецепторах b-D-галактозы. Меньшее значение в механизме агрегации кровяных пластинок имеет наличие в углеводной детерминанте гликопротеидов тромбоцитов N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. Роль маннозы в N-гликанах тромбоцитов как индуктора их агрегации незначительна. Аналогичные данные получены другими авторами (, , 2000, 2004).
Таблица 3
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной РНА-Р, у здоровых лиц и больных генерализованным катаральным гингивитом (М±m)
Показатели Группы | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 33,5±1,22 | 254,2±11,8 | 28,2±1,19 | 50,8±2,1 |
До лечения (n=22) | 36,7±1,07 Р1<0,05 | 232,6±9,4 Р1<0,05 | 31,8±1,01 Р1<0,05 | 44,4±1,6 Р1<0,05 |
После лечения (n=19) | 32,7±1,04 Р1>0,05 Р2<0,02 | 249,9±10,7 Р1>0,05 Р2<0,05 | 27,4±1,31 Р1>0,05 Р2<0,02 | 51,7±1,9 Р1>0,05 Р2<0,01 |
Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными до лечения.
Таблица 4
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной WGA, у здоровых лиц и больных генерализованным катаральным гингивитом (М±m)
Показатели Группы | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 12,26±1,15 | 130,4±11,4 | 7,02±0,65 | 46,6±1,2 |
До лечения (n=22) | 14,98±1,12 Р1<0,05 | 109,0±8,7 Р1<0,05 | 8,47±0,58 Р1<0,02 | 41,7±0,98 Р1<0,01 |
После лечения (n=19) | 12,47±1,19 Р1>0,05 Р2<0,05 | 127,7±9,7 Р1>0,05 Р2<0,05 | 6,98±0,72 Р1>0,05 Р2<0,02 | 45,9±1,2 Р1>0,05 Р2<0,02 |
Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными до лечения.
Таблица 5
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной ConA, у здоровых лиц и больных генерализованным катаральным гингивитом (М±m)
Показатели Группы | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 7,2±0,23 | 150,3±24,1 | 4,22±0,14 | 44,8±7,1 |
До лечения (n=22) | 8,4±0,32 Р1<0,01 | 122,2±12,4 Р1<0,05 | 4,89±0,12 Р1<0,02 | 32,5±2,8 Р1<0,05 |
После лечения (n=19) | 7,0±0,42 Р1>0,05 Р2<0,01 | 148,8±16,8 Р1>0,05 Р2<0,05 | 4,13±0,16 Р1>0,05 Р2<0,02 | 42,9±3,7 Р1>0,05 Р2<0,01 |
Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными до лечения.
2. Изменения состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов у больных гингивитом
Результаты проведенных нами исследований свидетельствуют о том, что нарушение агрегационной способности тромбоцитов у больных с воспалительными заболеваниями пародонта обусловлены изменением состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок.
Так, у больных генерализованным катаральным гингивитом в гликопротеиновых рецепторах тромбоцитов увеличено содержание b-D-галактозы (табл.3), N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты (табл.4), маннозы (табл.5) по сравнению с данными практически здоровых лиц из группы контроля. Степень возрастания различных углеводных детерминант в гликопротеиновых рецепторах мембран тромбоцитов неодинакова: возрастание агрегационной активности тромбоцитов у данной категории пациентов обусловлено в большей степени за счет увеличения в гликопротеиновых рецепторах N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, меньше – за счет маннозы, в меньшей мере это относится к b-D-галактозе.
Проведенная комплексная терапия приводила к купированию воспалительного процесса в десне. Объективным критерием выраженности воспалительных явлений в тканях пародонта является значение папиллярно-маргинально-альвеолярного (РМА) индекса, величина которого уменьшалась с 44,5±2,5% до 4,3±3,8%. При этом в гликопротеиновых рецепторах тромбоцитов восстанавливается физиологическое содержание b-D-галактозы, N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы, характерное для практически здоровых лиц контрольной группы. Это приводит к нормализации функционального состояния рецепторного аппарата кровяных пластинок и их агрегационной способности (табл. 3, 4, 5).
Аналогичные изменения в составе гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов нами выявлены у больных язвенным гингивитом, то есть в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов возрастает содержание N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы, приводящее к возрастанию агрегационной активности тромбоцитов.
Сравнительный анализ показал, что наибольшее усиление способности тромбоцитов к агрегации и изменение состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов за счет возрастания в них преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы происходят при язвенном гингивите.
В фазе регенерации язвенного гингивита происходит полное восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран кровяных пластинок, соответствующее показателям практически здоровых лиц группы контроля. Одновременно с этим происходила нормализация функциональной активности тромбоцитов. Параллельно восстанавливалась клиническая картина, что сопровождалось снижением показателей УИГ до 1,5±0,2 и индекса РМА до 5,3±2,8%.
Представленные данные свидетельствуют о том, что у больных различными формами гингивита нарушение функциональной способности тромбоцитов обусловлено изменением состава углеводного компонента их гликопротеиновых рецепторов. Кроме того, необходимо отметить тот факт, что если у практически здоровых лиц процесс агрегации тромбоцитов осуществляется за счет наличия в гликопротеиновых рецепторах b-D-галактозы, то нарушение агрегационной способности кровяных пластинок у больных различными формами гингивита обусловлено возрастанием содержания в углеводном компоненте гликопротеидного рецептора преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы.
3. Изменения состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов у больных пародонтитом
Нами проанализировано также соотношение между способностью тромбоцитов к агрегации и изменением состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у больных генерализованным пародонтитом различной степени тяжести в стадии обострения и ремиссии заболевания.
В большей степени повышение агрегационной активности тромбоцитов наблюдалось у больных генерализованным пародонтитом в стадии обострения заболевания, за счет увеличения содержания в их гликопротеиновых рецепторах прежде всего N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, в меньшей степени D-галактозы и маннозы. Причем, наблюдалась значительно выраженная закономерность – чем тяжелее степень генерализованного пародонтита в стадии обострения, тем более повышается содержание в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов не только N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, но и D-галактозы и маннозы (табл. 6, 7, 8, 9, 10, 11). Наиболее выраженные изменения в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов наблюдаются у пациентов с тяжелой степенью заболевания.
Таблица 6
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной РНА-Р, у здоровых лиц и больных генерализованным пародонтитом легкой степени (М±m)
Показатели Группы | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 33,5±1,22 | 254,2±11,8 | 28,2±1,19 | 50,8±2,1 |
В стадии обострения (n=18) | 35,9±1,11 Р1<0,05 | 248,7±10,2 Р1>0,05 | 30,4±0,91 Р1>0,05 | 43,2±1,8 Р1<0,05 |
В стадии ремиссии (n=14) | 34,2±1,16 Р1>0,05 Р2>0,05 | 258,4±10,9 Р1>0,05 Р2>0,05 | 27,8±0,85 Р1>0,05 Р2<0,05 | 52,1±1,7 Р1>0,05 Р2<0,05 |
Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными в
стадии обострения.
Таблица 7
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной WGA, у здоровых лиц и больных генерализованным пародонтитом легкой степени (М±m)
Показатели Группы | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 12,26±1,15 | 130,4±11,4 | 7,02±0,65 | 46,6±1,2 |
В стадии обострения (n=18) | 15,07±0,89 Р1<0,05 | 106,0±7,9 Р1<0,05 | 8,85±0,74 Р1<0,05 | 42,2±1,1 Р1<0,05 |
В стадии ремиссии (n=14) | 13,49±1,18 Р1>0,05 Р2>0,05 | 122,7±8,8 Р1>0,05 Р2<0,05 | 8,02±0,65 Р1>0,05 Р2>0,05 | 44,7±1,3 Р1>0,05 Р2>0,05 |
Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными в
стадии обострения.
Таблица 8
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной Con А, у здоровых лиц и больных генерализованным пародонтитом легкой степени (М±m)
Показатели Группы | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 7,2±0,23 | 150,3±24,1 | 4,22±0,14 | 44,8±7,1 |
В стадии обострения (n=18) | 7,47±0,36 Р1>0,05 | 138,4±9,9 Р1>0,05 | 4,79±0,12 Р1<0,05 | 40,3±2,2 Р1>0,05 |
В стадии ремиссии (n=14) | 7,02±0,42 Р1>0,05 Р2>0,05 | 143,9±8,6 Р1>0,05 Р2>0,05 | 4,14±0,16 Р1>0,05 Р2<0,05 | 42,6±3,1 Р1>0,05 Р2>0,05 |
Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными в
стадии обострения.
Наибольший клинический эффект от проводимого лечения отмечен при генерализованном пародонтите легкой степени, при котором происходила полная нормализация показателей индекса РМА до 6,1±1,4% и ПИ до 1,35±0,2. Также в стадии ремиссии генерализованного пародонтита у больных легкой степенью происходит полное восстановление содержания в углеводной детерминанте гликопротеиновых рецепторов N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, D-галактозы и маннозы, соответствующее данным практически здоровых людей (табл. 6, 7, 8).
В то же время у пациентов со средней степенью заболевания в фазе ремиссии происходит полное восстановление содержания только b-D-галактозы, но не нормализуется содержание в гликопротеиновых рецепторах N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы до уровня практически здоровых лиц. При этом показатели клинических индексов так же не достигали контрольных значений (РМА=9,4±1,8%, ПИ=1,55±0,2).
У больных генерализованным пародонтитом тяжелой степени в стадии ремиссии не происходит полного восстановления всех указанных компонентов гликопротеиновых рецепторов до уровня практически здоровых лиц (табл. 9, 10, 11), как это наблюдается при легкой и частично средней степени заболевания. При этом сохраняется способность тромбоцитов к усиленной агрегации. Данные показатели четко коррелировали со значениями индексов РМА=11,8±1,4% и ПИ=1,85±0,1, которые подтверждали наличие воспаления в тканях пародонта.
Таблица 9
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной РНА-Р, у здоровых лиц и больных генерализованным пародонтитом тяжелой степени (М±m)
Показатели Группы | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 33,5 ± 1,22 | 254,2 ± 11,8 | 28,2 ± 1,19 | 50,8 ± 2,1 |
В стадии обострения (n=26) | 38,8 ± 1,14 Р1 < 0,01 | 204,0 ± 10,4 Р1 < 0,02 | 33,7 ± 1,14 Р1 < 0,01 | 37,6 ± 1,2 Р1 < 0,001 |
В стадии ремиссии (n=24) | 36,9 ± 1,02 Р1 < 0,05 Р2 < 0,05 | 212,6 ± 10,9 Р1 < 0,05 Р2 > 0,05 | 31,2 ± 1,07 Р1 < 0,02 Р2 < 0,05 | 39,9 ± 1,6 Р1 < 0,001 Р2 > 0,05 |
Примечания: Р1 – по сравнению с контролем, Р2 – по сравнению с данными в
стадии обострения.
Таблица 10
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной WGA, у здоровых лиц и больных генерализованным пародонтитом тяжелой степени (М±m)
Показатели Группы | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 12,26 ± 1,15 | 130,4 ± 11,4 | 7,02 ± 0,65 | 46,6 ± 1,2 |
В стадии обострения (n=26) | 16,72 ± 1,14 Р1 < 0,001 | 93,8 ± 10,6 Р1 < 0,001 | 9,24 ± 0,67 Р1 < 0,02 | 40,1 ± 0,98 Р1 < 0,01 |
В стадии ремиссии (n=24) | 16,14 ± 0,96 Р1 < 0,01 Р2 > 0,05 | 122,7 ± 7,9 Р1 < 0,01 Р2 < 0,05 | 8,46 ± 0,45 Р1 < 0,02 Р2 < 0,05 | 41,3 ± 1,13 Р1 < 0,01 Р2 > 0,05 |
Примечания: Р1 – по сравнению с контролем, Р2 – по сравнению с данными в
стадии обострения.
Таблица 11
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной Con А, у здоровых лиц и больных генерализованным пародонтитом тяжелой степени (М±m)
Показатели Группы | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 7,2 ± 0,23 | 150,3 ± 24,1 | 4,22 ± 0,14 | 44,8 ± 7,1 |
В стадии обострения (n=26) | 8,24 ± 0,19 Р1 < 0,001 | 126,7 ± 9,9 Р1 > 0,05 | 5,27 ± 0,16 Р1 < 0,001 | 37,7 ± 2,2 Р1 > 0,05 |
В стадии ремиссии (n=24) | 8,02 ± 0,14 Р1 < 0,001 Р2 > 0,05 | 141,2 ± 8,8 Р1 > 0,05 Р2 > 0,05 | 9,03 ± 0,12 Р1 < 0,001 Р2 > 0,05 | 42,6 ± 2,7 Р1 > 0,05 Р2 > 0,05 |
Примечания: Р1 – по сравнению с контролем, Р2 – по сравнению с данными в
стадии обострения.
Таким образом, в стадии ремиссии генерализованного пародонтита легкой степени происходит полная нормализация в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов всех углеводных детерминант, а у пациентов средней и тяжелой степенями – лишь частичное.
При быстропрогрессирующем пародонтите в стадии обострения заболевания в гликопротеиновых рецепторах мембран тромбоцитов также наблюдаются изменения состава их углеводного компонента за счет увеличения в большей степени содержания N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и в меньшей мере – за счет b-D-галактозы и маннозы, причем указанные изменения в составе гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов при данном заболевании более выражены, чем при других воспалительных заболеваниях пародонта. В стадии ремиссии быстропрогрессирующего пародонтита не происходит нормализации в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов; при этом сохраняется их повышенная способность к агрегации. Комплексное лечение быстропрогрессирующего пародонтита позволило значительно улучшить состояние тканей пародонта, однако показатели как индекса воспаления (РМА=18,6±1,6%), так и индекса деструкции (ПИ=2,05±0,2) тканей пародонта существенно отличаются от контрольных значений.
Сравнительный анализ показал, что наиболее выраженное изменение состава гликопротеиновых рецепторов за счет увеличения в их углеводном компоненте прежде всего N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты происходит у больных генерализованным пародонтитом средней и тяжелой степени в стадии обострения и у больных быстропрогрессирующим пародонтитом в стадии обострения. Менее значимые сдвиги в рецепторном аппарате кровяных пластинок выявлены у пациентов с генерализованным пародонтитом легкой степени в стадии обострения заболевания.
Таким образом, проведенные нами исследования показали, что у больных с воспалительными заболеваниями пародонта усиление способности тромбоцитов к агрегации обусловлено изменением состава углеводного компонента их гликопротеиновых рецепторов. В отличие от практически здоровых лиц, у которых процесс агрегации тромбоцитов обеспечивается наличием в углеводном компоненте рецепторов b-D-галактозы, у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта он обусловлен не только b-D-галактозой, но прежде всего N-ацетил-D-глюкозамином, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислотой и в меньшей степени – маннозой.
ВЫВОДЫ
1. У практически здоровых лиц процесс агрегации тромбоцитов в основном обеспечивается содержанием в углеводном компоненте их гликопротеиновых рецепторов b-D-галактозы. Меньшее значение в механизме агрегации кровяных пластинок имеет наличие в углеводном остатке рецепторов N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. Роль маннозы в рецепторах тромбоцитов в процессе их агрегации незначительна.
2. У больных катаральным и язвенным гингивитом в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов увеличивается содержание преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы. После купирования воспалительного процесса происходит восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, характерного для практически здоровых лиц.
3. При обострении различной степени тяжести генерализованного пародонтита в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов больных увеличивается содержание N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы. Наиболее значимые изменения в углеводных компонентах наблюдаются при средней и тяжелой степенях заболевания.
4. В фазе ремиссии генерализованного пародонтита у больных с легкой степенью заболевания происходит полное восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, у пациентов со средней и тяжелой степенями – лишь частичное.
5. Наибольшие изменения в составе гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов за счет увеличения содержания N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и b-D-галактозы наблюдаются у пациентов с быстропрогрессирующим пародонтитом в стадии обострения. В стадии ремиссии указанного заболевания не происходит восстановления состава их гликопротеиновых рецепторов.
6. Усиление процесса агрегации тромбоцитов у больных с воспалительными заболеваниями пародонта обусловлено возрастанием содержания в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы в отличие от практически здоровых лиц, у которых он обеспечивается наличием в их рецепторах преимущественно b-D-галактозы.
Практические рекомендации
1. У больных с различными формами воспалительных заболеваний пародонта в качестве дополнительного критерия определения тяжести течения патологического процесса необходимо исследовать состав углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов с использованием современных гистохимических методов и применением различных лектинов как структурных и функциональных зондов клеточных мембран.
2. Для повышение эффективности лечения больных с воспалительными заболеваниями пародонта с целью восстановления нарушений в микроциркуляции целесообразно использовать лекарственные препараты, влияющие на процесс агрегации тромбоцитов за счет восстановления состава их гликопротеиновых рецепторов.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Парфенова, С. В. Значение рецепторного аппарата кровяных пластинок в нарушении их функций у больных агрессивными формами пародонтита /, , // Новые технологии в стоматологии и имплантологии: Материалы 8-й науч. конф. - Саратов, 2006. - С.158.
2. Парфенова, С. В. Роль гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов в нарушении микроциркуляторного звена системы гемостаза у больных гингивитом /, , // Здоровье и образование в ХХI веке: Материалы VII Международной науч.-практ. конф. – М.., 2006. - С. 237.
3. Парфенова, С. В. Особенности гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у больных хроническим пародонтитом /, , // Здоровье и образование в ХХI веке: Материалы VII Международной науч.-практ. конф. – М.., 2006. - С. 238.
4. Парфенова, С. В. Особенности гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов у больных агрессивными формами пародонтита /, , // Микроциркуляция в клинической практике: Материалы II Всерос. науч. конф. с международным участием. – М., 2006. - С. 41.
5. Парфенова, С. В. Роль рецепторов тромбоцитов в нарушении их функций у больных гингивитом /, , // Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям): Материалы VI международной конф. - Ярославль, 2007. - С. 127.
6. Парфенова, С. В. Роль изменений состава гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов в нарушении микроциркуляторного звена гемостаза у больных агрессивными формами пародонтита /, , // Актуальные проблемы стоматологии: Материалы ХVI Всерос. науч.-практ. конф. – М., 2007. - С. 314.
7. Парфенова, С. В. Значение гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов в нарушении микроциркуляторного звена гемостаза у больных хроническим генерализованным пародонтитом /, , // Российский стоматологический журнал. – 2007. - № 5. - С. 35-39.
Подписано в печать 30.08.07 г. | Объем – 1 печ. л. |
Тираж 100. | Заказ № |
Отпечатано в типографии: |
