Лабораторная работа №1. Тема: «Методика по идентификации вирусов и лабораторной диагностике вирусных болезней рыб (стр. 10 )

спинного мозга перерезают ножницами позвоночник возле хвостового плавника и небольшим пинцетом вытягивают спинной мозг из спинномозгового канала. Можно разрезать позвоночник на части и выделять спинной мозг по частям. В мозгу могут быть обнаружены цисты миксоспоридии, личинки трематод.

Чешую (100 шт.) для исследования снимают с разных частей тела и просматривают под лупой или МБС в капле воды. На поверхности чешуи, а также под ней могут быть обнаружены личинки трематод рода Metagonimus, некоторые нематоды и другие паразиты, опасные для человека. Мускулатуру просматривают после снятия кожи с обеих сторон тела рыбы. Кожу также обследуют: на внутренней стороне ее могут встретиться личинки различных трематод. На мускулатуре, освобожденной от кожи, острым скальпелем делают надрезы поперек тела так, чтобы разрезать всю ее на тонкие лепестки. Раздвигая лепестки иглой, просматривают их невооруженным глазом. Часть мускулатуры (1 см ) исследуют компрессионным способом. Кроме того, небольшие участки мускулатуры, взятые в разных частях тела, предварительно измельчив скальпелем, просматривают под микроскопом. В мускулатуре можно заметить цисты трематод, цестод и других паразитов.

После мускулатуры идет головной мозг. Исследование головного мозга проводится для обнаружения миксоспоридии и других паразитов.

Если обследуют форель или других лососевых рыб, то специально обследуют головы для выявления миксоспоридии Myxo-soma cerebralis — возбудителя вертежа, который локализуется в хряще слуховых капсул. Для обнаружения этого паразита голову рыбы измельчают ножницами, растирают в ступке, образовавшуюся массу хорошо смачивают водой и просматривают под большим увеличением микроскопа, помещая частями на предметное стекло.

Существуют и другие способы обнаружения и выделения возбудителей вертежа. Так, в США измельченную скелегную массу обрабатывают раствором ферментов (трипсина, пепсина и др.), которые способствуют освобождению спор, а затем центрифугируют. В полученной надосадочной жидкости, исследуя ее под микроскопом, легко обнаруживают споры миксозом.

Аргулёз

Аргулёз — инвазионная болезнь пресноводных рыб, вызываемая паразитическими рачками из отряда Жаброхвостые (Branchiura), семейства Argulidae. Рачки паразитируют на коже.

Распространение и экономический ущерб. Аргулез распространен довольно широко в прудах, садках, особенно в южных регионах России и многих других стран. Он наносит ущерб за счет гибели молоди рыб, снижения их роста и упитанности, а также затрат на лечебно-профилактические обработки рыб.

Возбудители. В нашей стране встречаются три основных вида аргулюсов: Argulus foliaceus — паразитирует преимущественно у кар­повых и других рыб; A. сoregoni — паразитирует у лососевых и сиго­вых рыб Сибири и Дальнего Востока; A. japonicus — обнаруживается у карпов и других видов рыб в разных водоемах. A. foliaceus — до­вольно крупный рачок, длиной 6—7 мм. Тело рачка овальное, округлой формы, состоит из слитой голово­груди и маленького брюшка; спинная часть покрыта щитком. Име­ются глаза, стилет, сосательный хоботок, четыре пары плаватель­ных ножек.

Псевдотрахелиостоз

Заболевание вызывает рачок Pseudotracheliastes stellatus, обнаруженный у белуги, осетра и бестера в рыбоводных хозяйствах Азовского бассейна.

У больных рыб наблюдается устойчивая анемия, указывающая на ухудшение их физиологического состояния. Общее количество лейкоцитов увеличивается. В лейкоцитарной формуле отмечается сдвиг клеточных элементов: % нейтрофилов и эозинофилов падает, а лимфоцитов повышается. Установленный лимфоцитоз указывает на хроническое течение патологического процесса. При высокой интенсивности инвазии рачки значительно разрушают кожные покровы и портят товарный вид рыбы.

Эргазилез

Возбудители эргазилеза, паразитирующие на жабрах пре­сноводных рыб, относятся к сем. Ergasilidae и широко распро­странены в водоемах. Наиболее часто встречаются Ergasilus sieboldi и Е. briani. Однако заболевание вызывают в основном Е. sieboldi.

Возбудители. Половозрелая самка Е. sieboldi имеет грушевидное тело длиной 1,0—1,5 мм с расширенным передним и суженным задним концом. Первый грудной сегмент слит с головным; имеет­ся 5 пар плавательных ножек. Коготь у Е. sieboldi более длинный, чем у Е. briani; на половом сегменте Е. sieboldi есть мелкие шипики, а у Е. briani их нет.

Эпизоотология. Оба вида рачков характеризуются слабо выражен­ной специфичностью и паразитируют у большинства видов пресно­водных рыб, представителей семейств карповых, окуневых, лососе-

Рис. 1. Развитие Lernaea cyprinacea:

а — яйцо; б — науплиус I; в — науплиус II; г — науплиус III; д — копеподит I; e — копе-подит II; ж— копеподит IV; э — циклопоидная самка; и — циклопоидный самец

вых, шуковых и др. Особенно подвержены заражению сиговые рыбы, в частности пелядь, чудс­кой сиг, затем линь, лещ, щука.

Эргазилюсы распространены повсеместно, особенно в озерах и водохранилищах. Известны случаи гибели линя в озерах Литвы, а также в нерестово-выростных и прудовых хозяйствах Украины.

Массовое поражение пеляди Е. sieboldi отмечено в озерах Псковской области, специально зарыбленных этой рыбой, а также в некоторых озерах Ленинград­ской и Новгородской областей.

Вспышки заболевания про­исходят главным образом ле­том, в июле — августе, но иног­да и осенью. Поздно прикре­пившиеся самки размножаются только весной следующего года.

Клинические признаки и пато­генез. Оба вида рачков в основ-

Рис. 2. Возбудители эргазилеза: а — Ergasilus sieboldi; б — Е. briani

ном локализуются на жаберных лепестках рыб: Ь. sieboldi на их внешней стороне, Е. briani между лепестками. Иногда оба вида па­разитируют совместно. У пеляди при высокой интенсивности зара­жения паразиты прикрепляются также у основания парных плавни­ков, вокруг ануса и глаз. Прикрепляясь к жаберным лепесткам, па­разит деформирует и разрывает их, сдавливает сосуды, вызывая закупорку. У зараженных рыб отмечают повышенное слизеотделение, разрушение и некроз жаберной ткани. Поврежденный участок бледнеет, на нем вскоре может развиться сапролегния.

Даже при высоких уровнях заражения гибели пеляди в оз. Себеж обнаружено не было, однако отмечается отрицательное воздействие рачков на рыбу. У заболевшей рыбы снижается темп роста, а масса уменьшается примерно в 2 раза. Ухудшается качество мяса за счет снижения количества жира с 15 до 3,8 %. Некоторые самки после болезни становятся яловыми и не нерестятся. Таким образом, эргазилез представляет серьезную угрозу для пеляжьих хозяйств.

При паразитировании Е. sieboldi у линя и орфы в крови обнару­жено значительное увеличение количества нейтрофилов.

Диагноз. Его ставят на основании клинических, эпизоотологических данных и микроскопического исследования рыбы.

Лернеоз

Возбудители. Тело половозрелой самки длинное, нерасчленен­ное, слегка расширяющееся к заднему концу. Голова имеет ветви­стые выросты, при помощи которых рачок закрепляется в теле рыбы. Имеется 5 пар двуветвистых плавательных ножек, каждая ветвь которой состоит из трех члеников. Шестая пара ножек руди­ментарна. Яйцевые мешки у самок парные, яйца в них расположе­ны в несколько рядов (300—700 шт. в каждом мешке). Самцы ве­дут свободный образ жизни, они похожи на самок в копеподитной стадии, но отличаются более коротким и тонким телом. Длина половозрелой самки L. cyprinacea без яйцевых мешков 10—16 мм. Головной конец ее снабжен двумя парами выростов. Длина дорзальных выростов 4,0—5,6 мм, вентральных — 2,0—2,8 мм.

Длина тела L. elegans 8—10 мм. Значительной разницы в раз­мерах дорзальных и вентральных выростов не наблюдается (рис. 3).

Лерней развиваются без участия промежуточного хозяина. Сво­бодноплавающие личинки временно живут на коже или жабрах различных видов рыб, не проявляя специфичности. Развитие рачка сопровождается сложным метаморфозом, который вклю­чает 3 науплиальных и 5 копеподитных стадий. Оптимальная тем­пература развития 23—30 °С. Развитие эмбрионов в яйцах проис­ходит в течение 3 дней. На 4-й день начинается вылупление науп-лиусов. Науплиус I овальной формы, прозрачный, зеленоватого цвета, длиной 0,15 мм (см. рис. 2), имеет блестящий крестооб­разный глазок красного цвета.

Науплиус снабжен тремя па­рами конечностей. Науплиу-сы II и III имеют большие размеры тела и соответствен­но большее количество пла­вательных ножек и щетинок, расположенных на них. На-уплиусы ведут непаразити­ческий образ жизни, питают­ся за счет запаса желтка. В те­чение 4—5 дней метаморфоз науплиальных стадий закан­чивается. Далее в течение 9—10 дней следует 5 копепо­дитных стадий, продолжи­тельность каждой их которых от 1 до 2 дней.

Рис. 3. Возбудители лернеоза: а — Lernaea cyprinacea; б — L. elegans; в — L. elegans morfa ctenopharyngodonis

Копеподит I (см. рис.3) состоит из головогруди, четырех сегментов и фурки, снабженной двумя длинными щетинками. Плавательных ножек 2 пары. На переднем конце головогруди расположены 3 пары конечностей. Тело копеподита прозрач­ное, оранжево-красный глаз отчетливо виден. На этой стадии личинка должна обязательно попасть на рыбу и поселиться в жаберной полости или на коже, иначе дальнейший метаморфоз не произойдет.

Копеподиты II, III и IV различаются все увеличивающимися размерами тела, количеством сегментов и плавательных ножек. Самцы становятся половозрелыми и продуцируют сперматофоры на IV стадии, а на V стадии все рачки дифференцируются по полу (рис. 3). После копуляции, которая происходит на этой ста­дии, самцы вскоре погибают, а самки, проникая сквозь кожу рыбы, закрепляются в мышцах и остаются постоянно прикреплен­ными к хозяину. У самок при переходе от свободного плавания к прикрепленному образу жизни происходят значительные измене­ния в строении тела. Сегментация становится менее заметной. Вследствие сильного развития яйцевода расширяется задняя часть тела. Головная часть самки четко отделяется от тела и разветвляет­ся в виде якоря, при помощи которого паразит закрепляется на теле рыбы. Дальнейший рост самки происходит за счет увеличе­ния и расширения тела. Прикрепительный аппарат развивается слабо. Плавательные ножки редуцируются, так как потеряли свою двигательную функцию.