Лабораторная работа №1. Тема: «Методика по идентификации вирусов и лабораторной диагностике вирусных болезней рыб (стр. 6 )

I - шизогония; 2 - образование макрогаметы; 3 - образование микрогаиетоцчтов и микрогамет; 4 - оплодотворение; 5 - образование ооцисты и спороцист; 6 - ооциста (с - спороцисты; о - остаточное тело; сп - спорозоиты).

1. Возбудитель кокцидиозного энтерита карпа - Eimeria carpelli (рис. 9)

Ооциста сферическая, тонкостенная без остаточного тела, диаметром 8,5-14 мкм. Спороцисты овальные, тонкостенные, они довольно плотно уложены в ооцисте. Внутри спороцисты 2 червеобразных спорозоита, слегка расширенных на одном конце, где находится крупное светопреломляющее тельце. Небольшое, зернистое, округлое остаточное тело лежит между спорозоитами. Шизонты - удлиненно—овальные мкм в диаметре. Паразитирует в стенках кишечника и иногда желчного пузыря карпа.

Рис. 9. Eimeria carpelli

2. Возбудители кокцидиозного энтерита толстолобиков Eimeria sinensis - ооциста сферическая, толстостенная с двухконтурной оболочкой без остаточного тела, но с хорошо выраженным микропиле (ультрацитостом) (рис. 10). Диаметр ооцисты 9,2 - 10,7 мкм. Спороцисты плотно уложены в ооцисте, овальные, лежат крест - накрест. Внутри спороцисты 2 колбасовидных спорозоита, с несколько суженным одним полюсом и сравнительно большое крупнозернистое остаточное тело. Паразитирует в эпителии кишечника.

Рис. 10. Eimeria sinensis (Goussia sinensis)

Eimeria client (рис. 11) — ооциста сферическая, диаметром 8,5-9,7 мкм, с оболочкой. Споры длиной 5,3-6,4 мкм овальные, расположены в виде веера. Внутри споры находятся 2 банановидных спорозоита и мелкое остаточное тело. Паразитирует в эпителии кишечника толстолобиков и белого амура.

Рис. 11. Eimeria cheni (Goussia cheni)

3. Возбудитель узелкового кокцидиоза карпа - Eimeria subepithelialis (рис. 12).

Ооциста сферическая, тонкостенная, без остаточного тела, диаметром 14,5 - 17 мкм. Спороцисты удлиненно - овальные. В спороцисте 2 узких червеобразных: спорозоита и небольшое мелко™ зернистое остаточное тело. Локализация: субэпителиальная соединительная ткань кишечника карпа, сазана и их гибридов.

Для изучения морфологии кокцидий необходимо исследовать соскобы со стенок кишечника карпа, среди эпителиальных клеток найти и рассмотреть ооцисты кокцидий.

Рис. 12. Eimeria subepitheliulis (Goussia subepithelialis)

III. ТИП МИКРОСПОРИДИИ - MICROSPORIDIA

Микроспоридии - внутриклеточные паразиты, развитие которых завершается образованием одноклеточных спор. Длина спор 3-8 мкм. Форма их овальная, яйцевидная или грушевидная. Спора покрыта толстой оболочкой, которая состоит из 3 слоев. Внешний слой (экзоспора) тонкий, слегка. волнистый. Средний слой (эндоспора) самый толстый, хитинизированный. Внутренний слой представлен плазматической мембраной. В центральной части споры лежит один одно— или двуядерный зародыш (спороплазма). Весь остальной объем споры занимает аппарат экструзии, состоящий из полярной трубки полярного якорного диска, поляропласта и задней вакуоли. Полярная трубка — длинное полое образование, покрытое двухслойной оболочкой, ее длина значительно превышает длину споры. Трубка в задней трети споры ложится спиральными витками а 1-3 слоя под самой оболочкой. Через трубку зародыш покидает спору. Якорный диск надет на основание трубки. Всю переднюю треть или половину споры занимает поляропласт, похожий на кипу плотно уложенных пластин и пронизанный в центре полярной трубкой. Задняя вакуоль заполнена жидкостью, внутри нее лежит тельце, названное постеросомой. Споры играют роль живого шприца, инъецирующего паразита в клетку хозяина. В клетках микроспоридии размножаются множественным делением, во время которого образуются многоядерные плазмодии округлой или лентовидной формы. Из них образуются споробласты, которые превращаются в споры (рис. 13). У морских и пресноводных рыб паразитируют в основном представители родов Glugea, Nosuna, Pleistophora.

Рис. 13. Схема строения споры микроспоридий:

1 - полярный якорный диск; 2 - шарнирное соединение полярной трубки с диском; 3 - сердцевина полярной трубки; 4 - пластины поляропласта; 5 - фибриллы поляропласта; 6 - поперечный срез полярной трубки; 7 - ядро; 8 -эндоплазматическая сеть; 9 - экзоспора; 10 — эндоспора; 11 — мембрана спороплазмы; 12— задняя вакуоль; 13 - постеросома.

Род Glugea (рис. 14).

Микроспоридии с большими, часто лентовидными многоядерными плазмодиями, которые распадаются на одноядерные клетки. Стадии спорогонии развиваются в панспоробласте. Споры удлиненные, овальные, длиной в несколько микронов. Задняя вакуоль занимает 1/3 объема спор. Длина полярной трубки достигает 150 мкм. Паразиты вызывают образование больших (до 5 мм) белых, преимущественно округлых цист в подкожной и межмышечной соединительной ткани, на внутренней стороне жаберных крышек и очень редко на поверхности различных внутренних органов.

Рис. 14. Glugea

Хорошо изучена биология Glugea lucioperca (рис. 15), паразитирующие в стенках кишечника судака. Споры удлиненно-овальной формы, с суженным передним концом и большой задней вакуолью. После фиксации в формалине размер спор составляет 4,6 (4,0-5,1) х 2,3 (2,0-2,5) мкм, а после окраски по Романовскому - Гимза или железным гематоксилином 3,8x2,4 мкм. Цисты, образующиеся под слизистой кишечника, имеют округлую, несколько вытянутую (по касательной) форму и достигают 200—300 мкм. В начале развития циста окружена соединительнотканной стенкой толщиной около 1 - 2 мкм и слоем видоизмененных клеток хозяина. Впоследствии оболочка цисты достигает толщины 10 мкм. У молодых рыб (1 - 2 года), как правило, имеет место генерализованное поражение кишечника. С увеличением возраста интенсивность и экстенсивность инвазии снижается.

Рис. 15. Glugea lucioperca:

А - живые споры, Б - спора, окрашенная гематоксилином.

IV. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОРФОЛОГИИ И БИОЛОГИИ МИКСОСПОРИДИЙ - ПАРАЗИТОВ РЫБ

Класс миксоспоридиий (MYXOSPORIDIA), или слизистых споровиков, относится к типу Myxozoa. Они чрезвычайно широко распространены среди пресноводных и морских рыб, локализуются в любых органах и тканях. Некоторые миксоспоридии патогенны и при определенных условиях вызывают заболевания рыб (миксозомоз, сфероспороз и др.). У рыб встречаются вегетативные стадии и споры миксоспоридии. Вегетативные формы полостных миксоспоридии представляют собой разнообразной величины и формы подвижные амебоиды. Тканевидные миксоспоридии чаще встречаются в виде овальных неподвижных образований, окруженных оболочкой цист, достигающих величины горошины или даже ореха, хотя обычный их размер 1 -2 мм.

Размножаются миксоспоридии чаще всего бесполым путем. Сначала увеличивается число ядер, затем происходит деление цитоплазмы ее отпочкование, в дальнейшем формируются споры. У мелких полостных миксоспоридии образуются 2-4 споры. В крупных тканевых плазмодиях число спор достигает сотен и даже тысяч.

Зрелые споры миксоспоридии построены по единому плану, но каждый вид имеет отличающие его особенности (рис. 15). Снаружи они имеют плотную оболочку, состоящую из двух или нескольких створок, соединенных друг с другом швом и шовным валиком. Форма створок различна. Кроме того, створки снаружи могут иметь отростки разной длины и конфигурации. Внутри створок и задней части споры расположены амебоидный зародыш с ядрами и йодофильная вакуоль. В переднем или противоположном концах споры помещены два и более полярные капсулы, в которых расположена спиралью стрекательная нить, впереди полярных капсул находится интеркапсулярный отросток. Споры попадают в воду после разрыва цист, находящихся на коже, жабрах, через кишечник, желчный и мочевой пузыри, а в некоторых случаях только после смерти хозяина, например споры (Myxosoma cerebralis) -возбудителя вертежа, локализующегося, в хрящевой ткани рыб. После заглатывания споры рыбой стрекательные нити с силой выбрасываются и внедряются в стенки кишечника, где спора закрепляется. Затем створки споры раскладываются по линии шва. Амебоидный зародыш выходит из споры и внедряется в ткани хозяина, далее он попадает в кровеносную или лимфатическую системы и заносится током крови или лимфы в тот орган, в котором данный вид миксоспоридий паразитирует.

Миксоспоридии с двустворчатыми спорами объединены в отряд Bivalvulea, с многостворчатыми спорами - в отряд Multivalvulea.

У пресноводных рыб, как правило, паразитируют двустворчатые, среди котрых наиболее распространены роды Myxidium, Sphaerospora, Cloromyxum, Myxobolus, Myxosoma и др. У морских рыб часто отмечают многостворчатых миксоспоридий рода Kudoa. Строение спор и их размеры являются систематическим признаком при определении вида миксоспоридий.

Рис. 15. Схема строения спор Myxosponaia:

A3 - амебоидный зародыш. ИВ - йодофшьная вакуоль; ИО -интеркапсулярный отросток; КЯ - капсулогенные ядра: ПК - полярные капсулы: С - створки; СН - стрекательная нить; Ш - шов; ШB - шовный валик; ЯA3 ядра амебоидного зародыша

1. Возбудитель миксозомоза (вертежа) лососевых - Myxosoma cerebralis (рис. 16).

Поражает хрящи внутреннего уха, черепа, позвоночника, плавников радужной форели, а также у ручьевой форели, палии, дальневосточных лососей и т. д. В плазмоидальной стадии представляет собой тело неправильной формы с лапчатыми выростами, с помощью которых внедряется в рыхлую .хрящевую ткань молоди лососевых и растет. При окостенении скелета переходит в стадию спорообразования. Споры диаметром 8 мкм. Спора имеет почти шаровидную форму, слегка сплющенную с боков, состоит из двух створок, в месте соприкосновения которых образуется шов. Внутри споры находится амебоидный зародыш и две округлые стрекательные полярные капсулы. Имеется точка зрения (Wolf и др.), что у миксоспоридии Myxosoma cerebralis есть промежуточный хозяин - олигохеты, в которых происходит дальнейшее развитие при заглатывании спор. В результате из олигохет выделяются актиноспоры, которые могут активно проникать в рыбу и заглатываются рыбами в течении 14 дней.