Оценка влияния высокогорной гипоксии на клиническую картину, иммунологические и феррокинетические показатели крови больных с депрессиями кроветворения (стр. 8 )

Так, в 1994 году было завершено научное исследование, проведенное Оно связано, с изучением влияния высокогорной гипоксии и лечебного плазмафереза на больных апластической анемией и тромбоцито - пенической пурпурой. Автор показал, что комбинированное применение  сеансов лечебного плазмафереза и высокогорной климатотерапией привело к увеличению количества эритроцитов и содержания гемоглобина на 65% от исходного уровня; ретикулоцитов – в 2,1 раза; тромбоцитов – в 2,2 раза и гранулоцитов – на 88% при АА. При ИТП прирост количества тромбоцитов составил 11,6 раза. А иммунологические показатели выражались  увеличением Т-лимфоцитов на 11,2% при АА, 43% – при ИТП, снижением В - лимфоцитов на 66,2% и 25,2%, соответственно.

(2000) изучены морфофункциональные изменения эритрона у больных депрессией кроветворения в условиях высокогорья. По его данным, высокогорье влияет на гемопоэз у больных с АА, что проявляется улучшением параметров периферической крови и эритрона,  уменьшением проявлений анемического и геморрагического синдромов, но эти изменения носили кратковременный характер. Также изученная в условиях предгорья компьютерная морфометрия лимфоцитов и сканирующая электронная микроскопия выявила дегенеративно-измененные эритроциты и нарушение сегрегации лимфоцитов. На фоне высокогорной климатотерапии отмечалось значительное улучшение данных показателей, что свидетельствует о благоприятном влиянии гипоксии на морфологическое состояние лимфоцитов и эритроцитов.

  (2002) изучен геморрагический синдром и гемостаз у больных с апластической анемией в процессе горноклиматического лечения. Им  установлено, что в условиях высокогорья у больных АА происходят фазные изменения в свертывающей системе, имеется взаимосвязь между количеством тромбоцитов и тяжестью течения геморрагического синдрома. В фазе острой адаптации под воздействием гипоксического стресса при исходной анемии и тромбоцитопении, усиливается функция первичного гемостаза. Постепенно в процессе горноклиматического лечения ослабевает напряжение гиперкоагуляции в  сосудисто-тромбоцитарном гемостазе, а в коагуляционном гемостазе происходит усиление признаков гипокоагуляции. К концу пребывания в горах уменьшаются явления геморрагического синдрома, улучшаются гематологические показатели и стабилизируются выявленные нарушения в системе гемостаза. 

(2004) изучала  обмен железа и эритропоэтина у женщин, живущих на различных высотах Кыргызской  Республики. Ею выявлено, что у жителей высокогорья (Сары – Таш, 3100 м)  уровень гемо - глобина повышен, запасы железа снижены в 40 раз, но, несмотря на не - выраженную степень анемии, значения трансферриновых  рецепторов и эритропоэтина  остаются в пределах нормы.

По данным исследования (2012), у больных ИТП при адаптации к высокогорью улучшается агрегационная функция кровяных пластинок, повышается % светопропускания с индукторами агрегации (коллагеном, ристомицином, АДФ), увеличивается размер агрегатов тромбоцитов, снижается содержание фактора Виллебранда и становится больше 3 раза пластиночного фактора тромбоцитов. Стабилизация количественного и качественного состояния тромбоцитов у этих пациентов сохраняется в течение 3-6  месяцев после высокогорной климатотерапии.

Суммируя приведенные литературные данные, можно отметить, что вопрос влияния высокогорья на организм больных с депрессиями кроветворения уже много лет находится в поле зрения ученых-гематологов Кыргызстана, которые направляют весь свой потенциал на изучение разносторонних механизмов этого феноменального явления.

Данная работа является еще одним «кирпичиком», который расшифровывает изменения в иммунологических составляющих и феррокинетике АА и ИТП, так как цитокины и регуляторы эритропоэза, такие как гепсидин и гипоксией индуцируемый фактор, достаточно широко изучены у здоровых людей и при некоторых заболеваниях крови в условиях равнины, но вовсе нет литературных данных об исследованиях цитокинов, гепсидина и HIF в условиях высокогорья.

ГЛАВА 2

МАТЕРИАЛ  И  МЕТОДЫ  ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1  Материал исследования

Объектом исследования явились 60 человек, из них 26 больных с апластической анемией и 24 с идиопатической тромбоцитопенической пурпурой. Контрольную группу составили 10 условно здоровых людей.

Больные АА были разделены на 2 группы: в I-ю группу вошли 10 пациентов, находившиеся в частичной ремиссии,  во II-ю группу – 16 больных, у которых к моменту подъёма на высокогорье ремиссия достигнута не была. Больные с ИТП, также были распределены на 2 группы:  1-ая группа – 14 больных в стадии ремиссии, которые получили только высокогорную климатотерапию (ВГКТ); 2-ая группа – 10 больных ИТП, получавших  гормональную терапию в условиях предгорья и продолжившие ее получение на высокогорье.

Все больные в прошлом получали различные методы лечения. Например: пациенты с АА компонентную гемотерапию – 24 больных (92%), 6 больных (23%) были подвержены спленэктомии, 8 больных (30,8%) в момент подъема на высокогорье принимали циклоспорин А. 87% больных с ИТП ранее получали глюкокортикоидную терапию, 15%  из них подверглись спленэктомии,  4% впервые обратились к врачу и лечения не получали. Все эти больные находились на лечении в гематологических отделениях КНЦГ и Ошской областной клинической больницы с 2007 по 2009 годы (табл. 2.1 и табл. 2.2).

Таблица 2.1 - Распределение больных АА по полу и возрасту

Пол	16-29 лет	30-49 лет	50-60 лет	Всего
Мужчины	6	6	4	16
Женщины	5	3	2	10
Всего больных	11	9	6	26

Таблица 2.2.- Распределение больных ИТП по полу и возрасту

Пол	10-15 лет	16-29 лет	30-49 лет	50-60 лет	Всего
Мужчины	1	6	-	-	7
Женщины	1	7	7	2	17
Всего больных	2	13	7	2	24

Для сопоставления исследуемых параметров, была обследована контрольная группа, состоящая из 10 условно здоровых человек в возрасте от 20 до 40 лет, из которых 2 (20%) мужчин и 8 (80%) женщин находились в высокогорном стационаре КНЦГ параллельно с больными.

2.2 Методы исследования

Комплексное обследование больных проводилось с помощью общеклинических, инструментальных и лабораторных методов.

Верификация диагнозов проводилась на основании комплекса клинико-лабораторных и инструментальных данных в отделениях гематологии и лабораторной диагностики КНЦГ. Всем больным перед подъемом в горы выполнялся общий анализ крови с подсчетом тромбоцитов, стернальная пункция, трепанобиопсия из гребня подвздошной кости. Фоновые исследования были сделаны в лаборатории КНЦГ МЗ КР  г. Бишкек (760 м). Мониторинг показателей проводили по следующей схеме:  до подъема в горы, на 3-5, 20-й и 40-й дни пребывания в условиях высокогорного стационара.

При отсутствии противопоказаний для пребывания в условиях высокогорья, пациенты на специальном автотранспорте перевозились в высокогорный стационар (перевал Туя-Ашу, 3200 м).

После прибытия в высокогорный стационар, больным назначался полупостельный, а некоторым тяжелым – постельный режим в течение 3-5 дней для облегчения течения горной болезни. Начиная с 5-7 дня ндивидуально,  рекомендовали прогулки по территории больницы. С 8-10 дня в лечебный режим добавлялись дыхательная гимнастика, лечебная физкультура в виде терренкура (дозированные пешеходные прогулки). Затем с 20 дня разрешались поэтапное восхождения до высоты 3600 м по специально разработанному методу и маршруту, под контролем медработников (схема 2.1).

Схема проведения высокогорной климатотерапии

  Горные  прогулки

  Лечебная  физкультура

  Расширение двигательного  режима 

Постельный/полу постельный режим

Восхождение на высоту 3600 м

Дни  адаптации

  1  5  15  20  25  30  40 

  Перевал Туя - Ашу, 3200 м

  Подъем  г. Бишкек, 760 м  Спуск 

Схема 2.1. Схема проведения высокогорной климатотерапии.

Забор крови для исследований осуществлялся натощак из v. сubitalis одноразовой силиконированной иглой с широким просветом, самотеком. Лейкоциты выделялись в градиенте плотности растворов фикола и верографина с уд. массой 1,08 и 1,12. Кровь (3 мл) осторожно наслаивалась на градиентный раствор и центрифугировалась. Образующееся при центрифугировании кольцо, состоящее, в основном, из лимфоцитов, отбиралось, плазма промывалась трижды фосфатно-солевым буфером (ФСБ) и в дальнейшем использовалась для определения всех параметров.

Полученая сыворотка в замороженном виде транспортировалась в лабораторию отделения химиотерапии лейкозов Гематологического научного центра РАМН г. Москвы, где при моем участии были проведены все лабораторные исследования.

Количественное определение цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО) определялись методом иммуноферментного анализа с использованием наборов фирмы «Протеиновый контур» (С-Петербург, Россия).

До начала проведения анализа лунки планшета дважды промывались буферным раствором. Затем в лунки вносились по 10 мкл буфера В, при этом диапазон концентрации цитокинов составлял от 20 пкг до 0,3 МЕ/мл и добавлялось по 100 мкл исследуемой сыворотки. Инкубация продолжалась 60 минут при  +25°С при непрерывном встряхивании. После этого удалялась надосадочная жидкость и оставшийся концентрат трижды промывался буферным раствором. В оставшийся аспирации пипеткой вносилось по 200 мкл раствора вторых моноклональных антител в каждую лунку и инкубировалась при температуре +37°С в течение 60 минут. Раствор повторно аспирировался из лунок, они промывались дистиллированной водой, просушивались, и в каждую вносилось по 200 мкл субстрата с красителем. Стрипы инкубировались при температуре +22°С 5-15 минут.  Останавливалась реакция добавлением 50 мкл раствора серной кислоты. Учет результатов проводился с использованием спектрофотометра при длине волны 450 нм, устанавливая нулевое поглощение по лунке со стандартом.