Дифференциально-диагностические свойства и чувствительность к антибактериальным препаратам бактерий Pseudomonas aeruginosa (стр. 12 )

Таблица 11

Результаты изучения антагонистических свойств P. аeruginosa

Вид бактерий	Зоны задержки роста, мм
1	2	3	M±m	t	td
S. enteritidis	11,0	12,0	11,0	11,3±0,1	10,68	2,4
K. pneumonia	10,0	11,0	12,0	11,0±0,3	10,29	0,82
C. freundii	12,0	9,0	10,0	10,3±0,2	12,87	1,9
Y. enterocolitica	11,0	10,0	9,0	10,0±0,2	10,39	3,7

  Примечание: t - доверительный коэффициент; td –коэффициент достоверности различий средних величин

На основе результатов собственных исследований сделано заключение, что из числа апробированных методов изучения антагонистической активности на плотных питательных средах наиболее результативным являлась методика с применением мембранных фильтров,  для исследования антагонистической активности в жидкости  –  метод «агаровой пленки», позволяющие определять антагонистическую активность микроорганизмов, относящихся к разным систематическим группам, сократить расход питательных сред, стерильной бактериологической посуды и времени проведения анализа. 

3.5. Результаты изучения чувствительности бактерий

Pseudomonas aeruginosa к антибактериальным препаратам

3.5.1. Результаты изучения чувствительности  к антибиотикам

При изучении чувствительности к антибактериальным препаратам (АБП) микроорганизмов, выделенных из сырья и пищевых продуктов,  применяли методы диффузии в агар;  экспресс-тест «Гексадиски Pseudo 6»  («HexaDisc», HiMedia–HX050, Индия); серийные разведения. Бактериальную суспензию из 18-часовой культуры, выращенной на МПА, готовили  в  3-5 мл изотонического раствора  0,9 % NaCl по оптическому стандарту мутности "McFarland" 0,5.  Непосредственно после аппликации дисков чашки Петри помещали в термостат вверх дном и культивировали в течение 24 ч при  37  °С. Диаметр зон задержки роста измеряли с точностью до 1,0 мм. Для учета чувствительности к антибактериальным препаратам учитывали диаметр зон задержки роста бактерий.  Учет результатов определения чувствительности P. aeruginosa к АБП проводили, определяя пограничные значения диаметров зон задержки роста и минимальную подавляющую концентрацию – МПК. При изучении чувствительности  микроорганизмов к АБП методом диффузии в агар установлено, что Pseudomonas aeruginosa были чувствительными к группе в-лактамных АБП (цефоперазон, цефотаксим, цефепим, азтреонам, имипенем, меропенем); аминогликозидам (тобрамицин, гентамицин, нетилмицин); хинолонам (норфлоксацин, пефлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин); устойчивыми к хлорамфениколу, тетрациклину,  доксициклин (табл.12).

Таблица 12

Результаты изучения чувствительности Pseudomonas aeruginosa к антибиотикам методом  диффузии в агар

Антибиотики	Зона задержки роста микроорганизмов, мм
P. aeruginosa	Е. сoli	S. aureus
в-лактамы
Цефоперазон	21,10±0,8	22,20±0,9	18,20±0,9
Цефотаксим	24,20±0,9	22,15±1,1	17,10±1,1
Цефтриаксон	10,20±0,8	22,13±0,8	17,15±0,7
Цефтазидим	16,40±0,7	20,21±0,9	19,20±0,6
Цефепим	22,25±0,8	16,18±1,2	17,18±1,3
Азтреонам	23,18±1,3	24,24±1,3	22,14±1,2
Имипенем	21,26±1,0	18,13±0,9	17,23±0,7
Меропенем	22,14±0,5	17,25±0,5	18,21±0,4
Аминогликозиды
Гентамицин	18,25±0,6	20,14±0,8	19,10±0,7
Тобрамицин	23,18±1,3	19,00±0,5	18,22±0,5
Нетилмицин	22,14±0,5	15,00±0,4	15,00±0,4
Амикацин	15,26±1,0	22,20±0,4	12,17±0,2
Хинолоны
Норфлоксацин	20,00±0,4	18,00±0,4	19,10±0,3
Пефлоксацин	22,00± 0,5	22,00±0,3	23,20±0,2
Офлоксацин	10,00±0,8	20,10±0,4	18,40±0,2
Ципрофлоксацин	22,00±1,1	33,30±0,3	24,20±0,3
Левофлоксацин	19,00±0,6	25,20±0,4	11,20±0,5
Ломефлоксацин	23,00±1,3	26,00±0,5	20,10±0,5
Другиепрепараты
Хлорамфеникол	10,20±0,8	21,20±0,3	20,24±0,3
Тетрациклин	10,23±0,9	11,00±0,4	21,00±0,4
Доксициклин	12,0±0,6	19,00±0,3	17,20±0,3

При изучении чувствительности к антибиотикам Pseudomonas aeruginosa применяли  экспресс-тест «HexaDisc» – набор из 6 одиночных дисков, радиально прикрепленных к центру  (табл. 13).

Таблица 13

Чувствительность к антибиотикам «Гексадиски Pseudo 6»

№ культуры микроорганизмов	Аk	C	Ca	Cf	G	I
1. P. аeruginosa(КГ)	15,3±0,6	21,3±0,8	14,3±0,3	22,8±0,9	15,3±0,3	22,0±0,8
2. P. аeruginosa(ФП)	12,2±0,6	14,2±0,8	15,1±0,3	22,6±0,9	13,1±0,3	15,8±0,8
3. P. аeruginosa(ФП)	15,0±0,6	13,5±0,7	13,9±0,2	15,7±0,8	12,9±0,2	21,0±0,7
4. P. аeruginosa(ФП)	18,2±0,5	20,9±0,7	14,2±0,2	20,5±0,7	15,2±0,2	20,8±0,7
5. P. аeruginosa(СП)	16,9±0,6	19,8±0,6	13,6±0,1	21,3±0,8	10,6±0,1	15,5±0,8
6. P. аeruginosa(СП)	18,6±0,5	20,6±0,7	12,1±0,1	15,9±0,7	13,1±0,1	20,7±0,7
7. P. аeruginosa(ФС)	16,5±0,6	16,5±0,8	13,6±0,3	22,9±0,9	15,6±0,3	22,5±0,9
8. P. аeruginosa(ФС)	15,3±0,6	21,3±0,8	17,1±0,4	23,1±0,9	17,1±0,4	22,2±0,8
9. P. аeruginosa(ФС)	16,1±0,7	11,7±0,8	16,2±0,3	23,3±0,9	16,2±0,3	23,1±0,9
10. P. аeruginosa(ФГ)	16,9±0,7	22,9±0,9	16,9±0,4	24,4±0,4	13,9±0,4	23,9±1,0
11. P. аeruginosa(ФГ)	16,7±0,6	21,9±0,8	15,8±0,3	23,4±0,9	15,8±0,3	22.7±0,9
12. P. аeruginosa(ФГ)	16,1±0,7	20,6±0,8	11,0±0,3	23,1±0,9	16,0±0,3	15,5±0,9
13. P. аeruginosa(ФГ)	16,7±0,6	21,9±0,8	15,8±0,3	23,4±0,9	13,8±0,3	22.7±0,9
14. P. аeruginosa(ФГ)	21,3±0,8	17,7±0,9	16,7±0,4	12,5±0,8	16,7±0,4	22,3±0,5
15. P. аeruginosa(Р)	15.6±0,6	21,7±0,8	15,9±0,3	23,3±0,9	10,9±0,3	22,7±0,9
16. P. аeruginosa(Р)	16,4±0,7	22,1±0,8	13,3±0,4	10,1±1,0	16,3±0,4	23,1±0,9
17. P. аeruginosa(Р)	20,1±0,8	22,5±0,9	16,8±0,4	23,8±1,0	14,8±0,4	22,4±0,9
18. P. аeruginosa(К)	16,6±0,6	22,3±0,9	14,1±0,3	23,7±1,0	16,1±0,3	23,1±0,7
19. P. аeruginosa(К)	15,4±0,7	22,6±0,9	16,7±0,4	23,5±1,0	14,7±0,4	14,4±0,9

Аk – амикацин;  C –цефепим; Ca – цефтазидим; Cf – ципрофлоксацин; G – гентамцин; I –  имипенем

При изучении чувствительности микроорганизмов P. aeruginosa к АБП методом серийных разведений  0,7% МПА разливали в пробирки по 0,5 мл. Рабочий раствор АБП в количестве 0,5 мл при помощи микропипетки со стерильным наконечником вносили в 1-ю пробирку, содержащую  0,5 мл 0,7% МПА, тщательно перемешивали, переносили 0,5 мл раствора АБП в 0,7% МПА во 2-ю пробирку. Процедуру повторяли для приготовления ряда необходимых разведений. Из последней пробирки 0,5 мл раствора удаляли.  Для инокуляции использовали взвесь микроорганизмов, содержащую 106  КОЕ/мл.  В каждую пробирку, содержащую  0,5 мл соответствующего разведения АБП, вносили  0,5 мл взвеси микроорганизмов, затем производили посев каплями на поверхность  МПА, в одну чашку Петри наносили  до 6 капель различных десятичных разведений АБП. Чашки культивировали при 37єС в течение 24 ч. Антибиотикорезистентность микроорганизмов определяли с помощью методики «Оценка минимальной ингибирующей концентрации ("МИК")». При отсутствии роста в минимальной и максимальной концентрациях антибиотика микроорганизмы считали чувствительными к препарату. При наличии роста при минимальной концентрации антибиотика чувствительность микроорганизма к препарату считали умеренно чувствительными. Если рост наблюдался при минимальной и максимальной концентрациях антибиотика, микроорганизмы считали устойчивыми к препарату. Минимальной ингибирующей концентрацией считали минимальную концентрацию антибиотика, которая ингибирует рост микроорганизмов. При изучении чувствительности к АБП методом серийных разведений установлено, что наибольшую чувствительность P. аeruginosa выделенных из фарша птицы к  цефтазидиму (МИК 4,0 – мг/г), цефепиму (МИК 4,0 – мг/г), меропенем (МИК 1,0 – мг/г), гентамицину (МИК 8,0 – мг/г); ципрофлоксацину (МИК 0,125 – мг/г); умеренно чувствительные к амикацину (МИК 32,0 – мг/г) (табл. 14).