Разработка и стандартизация противовоспалительного лекарственного сбора для лечения и профилактики заболеваний пародонта (стр. 2 )

С помощью качественных реакций в водном извлечении из сбора было установлено наличие флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, гликозидов, аскорбиновой кислоты, аминокислот и полисахаридов.

Методом бумажной хроматографии в присутствие свидетелей РСО и хроматографически чистых образцов подтверждено наличие: на уровне РСО ликуразида (Rf~0,11); на уровне ГСО лютеолин-7-гликозида (Rf~0,53); на уровне РСО танина (Rf~0,61).

При длине волны 254 нм видны 11 флуоресцирующих пятен: на уровне РСО ликуразида (Rf~0,11); на уровне РСО лютеолин-7-гликозида (Rf~0,53); на уровне РСО танина – пятно коричневатого цвета (Rf~0,61); на уровне РСО галловой кислоты – пятно сине-фиолетового цвета (Rf~0,93).

Полученные данные подтверждены методом ВЭЖХ. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты исследования фенольных соединений сбора методом ВЭЖХ.

Номер пика	Идентифицировано	% Содержание в выделенной смеси (метод внутренней нормализации)
1	Галловая кислота	11,58
2	Катехин	5,88
3	Хлорогеновая кислота	6,22
4	Кофейная кислота	28,03
5	Лютеолин-7-гликозид	13,70
6	Ликуразид	1,79
7	Кверцетин	15,31
8	Дигидрокверцетин	2,43
9	Апигенин	2,06

Общий вид хроматографического профиля фенольных соединений представлен на рисунке 1.

Рис. 1. Идентификация фенольных соединений в сборе методом ВЭЖХ

1 - галловая кислота; 2 - катехин; 3 - хлорогеновая кислота; 4 - кофейная кислота; 5 - лютеолин-7-гликозид; 6 - ликуразид; 7 - кверцетин; 8 - дигидрокверцетин; 9 - апигенин

Методом ВЭЖХ осуществлено определение содержания органических кислот, в ходе которого в составе сбора идентифицированы: щавелевая, винная, маликовая, янтарная, бензойная, салициловая кислоты.

Результаты идентификации органических кислот в анализируемом сборе представлены в таблице 4.

Таблица 4

Результаты идентификации органических кислот в сборе методом ВЭЖХ.

Номер пика	Идентифицировано	Времена удерживания, мин	Содержание в выделенной смеси, % (метод внутренней нормализации)
1	Щавелевая кислота	4,99	59,01
2	Винная кислота	5,89	11,27
3	Маликовая кислота	6,63	24,63
4	Янтарная кислота	10,23	0,31
5	Бензойная кислота	14,93	0,21
6	Салициловая кислота	15,84	4,57

Общий вид хроматографического профиля органических кислот представлен на рисунке 2 .

Рис.2. Идентификация органических кислот в сборе методом ВЭЖХ

1 - щавелевая кислота; 2 - винная кислота; 3 - маликовая кислота; 4 - янтарная кислота; 5 - бензойная кислота; 6 - салициловая кислота.

Поскольку в разработанном сборе содержится трава душицы и тысячелистника, основным компонентом которых является эфирное масло, нами был изучен состав эфирного масла выделяемый из анализируемого сбора.

Анализ проводили в стандартных условиях с использованием РСО гераниола, L-пинена, β - пинена, борнилацетата и тимола. Детектирование проводили с использованием анисового альдегида. В данных условиях в испытуемом образце было обнаружено 11 пятен. Из них идентифицировано 5 пятен на уровне пятен РСО, 6 пятен не идентифицировано.

Результаты идентификации эфирного масла в анализируемом сборе представлены в таблице 5.

Таблица 5

Результаты идентификации компонентов эфирного масла методом ТСХ.

Rf	Rf РСО	Идентифицировано
Гераниол	Тимол	L-пинен	β-пинен	борнилацетат
0,05 0,11 0,16 0,20 0,25 0,33 0,45 0,67 0,73 0,75 0,98	0,25	0,75	0,45	0,33	0,73	Гераниол β-пинен L-пинен Борнилацетат Тимол

Для определения содержания эфирных масел в сборах использовали метод перегонки с водяным паром с подбором оптимальных условий количественного определения. Результаты исследований представлены в таблице 6.

Таблица 6

Влияние условий перегонки на выход эфирного масла из сборов.

Навеска сырья, г	Выход эфирного масла, %
Степень измельченности и время перегонки и время перегонки
1 мм	2 мм	3 мм
1ч	2ч	Зч	1ч	2ч	Зч	1 ч	2ч	Зч
Сбор
10,0	0,10± 0,003%	0,15± 0,005%	0,15± 0,005%	0,08± 0,002%	0,12± 0,004%	0,12± 0,004%	0,09± 0,003%	0,11± 0,004%	0,12± 0,004%

С помощью метода ВЭЖХ установлен качественный и количественный состав аминокислот. В результате идентифицировано наличие 16 аминокислот: лизин (5,3%), метионин (0,08%), гистидин (2,8%), аргинин (8,5%), треонин (4,9%), серин (6,6%) пролин (6,2%), глицин (10,5%) валин (6,6%), изолейцин (3,2%), лейцин (8,0%), тирозин (2,8%), фенилаланин (2,9%) аланин (10,0%) глутаминовая кислота (12,0%), аспарагиновая кислота (8,7%).

Учитывая литературные данные, подтверждающие широкий спектр фармакологического действия фенольных соединений, а также принимая во внимание результаты предыдущих исследований, подтвердившие присутствие фенольной фракции в анализируемом сборе, мы сочли целесообразным привести количественную оценку суммы флавоноидов в пересчете на рутин и фенолкарбоновых кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту.

Для разработки методики количественной оценки суммы действующих веществ нами были подобраны оптимальные условия проведения анализа: выбор экстрагента, его соотношение с сырьем, размер частиц сырья и время экстракций. Результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7

Выбор оптимальных условий экстракции флавоноидов

Изучаемый параметр	Содержание флавоноидов, %
Концентрация этилового спирта
Н2О	0,086 ± 0,004
25%	0,124 ± 0,005
50%	0,284 ± 0,011
70%	0,455 ± 0,018
96%	0,138 ± 0,005

Продолжение таблицы 7