Разработка и стандартизация противовоспалительного лекарственного сбора для лечения и профилактики заболеваний пародонта (стр. 3 )

Измельченность сырья
1 мм	0,464 ± 0,018
2 мм	0,471 ± 0,018
3 мм	0,394 ± 0,015
5 мм	0,159 ± 0,006
Соотношение сырье — экстрагент
1:50	0,439 ± 0,017
1,5:50	0,421 ± 0,016
2:50	0,417 ± 0,016
Время экстракции при температуре кипения
15 мин	0,315 ± 0,013
30 мин	0,395 ± 0,016
45 мин	0,471 ± 0,019
60 мин	0,475 ± 0,019

Было установлено, что максимальный выход суммы флавоноидов (%) наблюдается при использовании в качестве экстрагента 70% этилового спирта; измельченность сырья 2 мм; оптимальное соотношение сырья и экстрагента составило 1:50 и время нагревания на кипящей водяной бане -45 минут.

Количественное определение суммы фенолкарбоновых кислот проводили спектрофотометрическим методом в пересчете на хлорогеновую кислоту, результаты представлены в таблице 8.

Таблица 8

Содержание суммы фенолкарбоновых кислот в сборе

Дата контроля	Содержание фенолкарбоновых кислот, %
Проба 1	Проба 2	Проба 3	Проба 4	Проба 5
15.05.10	1,82	1,84	1,86	1,82	1,83

Метрологические характеристики анализа приведены в таблице 9

Таблица 9

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фенолкарбоновых кислот

n	f	P%	t(P, f)	_ X%	S2	S	Sx	_ DX	_ E%
5	4	95	2,78	1,834	0,00028	0,0167	0,0074	0,0208	1,13

Учитывая присутствие в сборе корней солодки, в состав которой входит фракция сапонинов, содержащая глицирризиновую кислоту - вещество, которое может быть рассмотрено в качестве приоритетного маркера, мы сочли целесообразным провести количественную оценку сбора по показателю содержания суммы сапонинов.

Анализ содержания суммы тритерпеновых сапонинов проводили после кислотного гидролиза спектрофотометрическим методом в пересчете на олеаноловую кислоту при длине волны 490 нм. Результаты представлены в таблице 10.

Таблица 10

Содержание сапонинов в сборах

Дата контроля	Содержание сапонинов в сборах, %
Проба 1	Проба 2	Проба 3	Проба 4	Проба 5
06.05.09	0,68	0,72	0,73	0,67	0,72
14.05.10	0,66	0,71	0,71	0,66	0,68

Подтверждена сохранность биологически активных веществ - сапонинов при хранении.

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы сапонинов представлены в таблице 11

Таблица 11

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы сапонинов

n	f	P%	t(P, f)	_ X%	S2	S	Sx	_ DX	_ E%
5	4	95	2,78	0,704	0,00073	0,027	0,0121	0,0335	4,77
5	4	95	2,78	0,684	0,00063	0,025	0,012	0,0312	4,56

Анализ глицирризиновой кислоты осуществляли методом ВЭЖХ на приборе «Watera» (США) со спектрофотометрическим детектором Lambda-Max модель 481 в стандартных условиях, которые используются для определения веществ сапониновой природы.

Расчет количественного содержания глицирризиновой кислоты проводили методом абсолютной калибровки с помощью компьютерной программы Мульти Хром для «Windows». Полученные результаты представлены в таблице 12 .

Таблица 12

Содержание глицирризиновой кислоты в сборе

Дата контроля	Содержание глицирризиновой кислоты, %
В сборе	В корнях солодки
4.03.08	0,54 ± 0,008	6,52 ± 0,097
9.03.09	0,52 ± 0,008	6,48 ± 0,097
8.03.10	0,49 ± 0,007	6,34 ± 0,095

Полученные показатели качества и нормы содержания действующих веществ включены в проект нормативной документации.

Изучение возможности выявления специфических веществ, используемых при стандартизации в качестве маркеров.

В работе проводилось изучение компонентного состава растений, входящих в состав растительного лекарственного сбора с целью нахождения специфических веществ-маркеров, обеспечивающих надежность идентификации всех заявленных компонентов сбора.

Пробоподготовка включала в себя следующее: устанавливали флакон с полученным экстрактом в ультразвуковую ванну-мешалку «Сапфир» без нагрева на 10 минут. Затем осуществляли отбор 10 мл экстракта в пластиковую колбу для центрифугирования и центрифугировали на центрифуге Ohaus Split 16000 rpm при 16000 об/мин 2 минуты. По окончанию центрифугирования осуществляли отбор микродозатором 1 мл экстракта с поверхности для предотвращения попадания частиц сырья. Помещали в барабан инжектора хромато-масс-спектрометра.

Компонентный состав летучих фракций экстрактов компонентов представлен в таблице 13

Таблица 13.

Компонентный состав летучих фракций экстратов растительного лекарственного сырья, входящего в состав сбора для лечения и профилактики воспалительного заболевания пародонта.

Анализируемое сырье	Соединение	Время удерживания, мин	Степень совпадения с библиотечным масс-спектром, %
Цветки календулы	Трипропиламин	15,947	83
	Уксусная кислота	21,063	90
	α-Кубебен	21, 529	96
	Копфен	21,529	91
	D-Гермакрен	23, 287	92
	β-Кубебен	23, 291	92
	γ-Селинен	24, 706	91
	δ-Аморфен	25,281	92
	(+)-Эпи-бициклосесквифелландрен	26, 062	97
	γ-Кадинен	26, 391	99
	Виридифлорен	26, 539	99
	α-Элемен	26, 836	98
	α-Аморфен	27,067	99
	Нонадекан	30, 197	95
Корневища и корни кровохлебки	о-Ксилен	17, 073	83
Уксусная кислота	21, 075	86
З-Фуральдегид	21, 494	87
Карвон	27, 169	92
Корни солодки	Туйен	15,534	93
2,3-Бутандиол	23, 796	91
1,3-Циклогексадиен, 5-(1,5-диметил-4-гексенил) -2-метил-,	26, 934	93
α-Аморфен	27,751	98
Циклогексен, 3-(1,5-диметил-4-гексенил)-6-метилен-,	27, 880	95
Анетол	28, 881	98

Продолжение таблицы 13