Лекционный курс по частной вирусологии Часть третья (стр. 10 )

Значительное N-гликозилирование и протеолитическое разрезание предшественника являются частью посттрансляционного процессинга торовирусного протеина S. Протеин М EqTV аккумулируется во внутриклеточных мембранах и, как считается, играет роль в почковании через внутриклеточные мембраны.

Антигенные свойства. Протеин S распознается нейтрализующими и ингибирующими гемагглютинацию моноклональными антителами.

Биологические особенности. BoTV идентифицирован как патоген, вызывающий гастроэнтериты у телят и, возможно, пневмонии у взрослого КРС. BoTV-инфекция обычно ограничена кишечником, хотя иногда может вовлекаться и респираторная система. EqTV с болезнью не ассоциируется. Серологические данные свидетельствуют, что данный вирус способен инфицировать копытных (лошадей, КРС, овец, коз, свиней), крыс, кроликов и некоторые виды полевых (feral) мышей. Методом электронной микроскопии торовирусы идентифицированы у человека, собак и кошек. Обнаруженные у человека торовирусоподобные частцы антигенно родственны BoTV и имеют сходство по сиквенсу. В сыворотке крови кошек антител к торовирусам не обнаружено. Инфекция, обусловленная BoTV обычно широко распространена среди молочного поголовья КРС. Наличие у телят материнских антител не предотвращаяет развитие инфекции, но может влиять на исход болезни. Инфекция, вызываемая BoTV встречается повсеместно (где проводились соответствующие исследования): Западная Европа, Северная Америка, Индия, Южная Африка и Новая Зеландия.

Торовирусы инфицируют эпителиальные клетки тонкого и толстого кишечника, особенно в области тощей, подвздошной и ободочной кишек. В тонком кишечнике инфицируются эпителиальные клетки, расположенные в верхней трети крипт и над Пейеровыми бляшками, включая М-клетки. Торовирусные инфекции могут протекать хронически.

Критерии подразделения на виды внутри рода. EqTV, BoTV, PoTV и HuTV близкородственны как антигенно, так и генетически, но могут различаться по сиквенсу, спектру восприимчивых хозяев и патогенезу. У EqTV и BoTV гомология по сиквенсу в области 3-конца (3 kb) составляет 84%. PoTV более отдален, что было показано по анализу сиквенса нуклеокапсидного протеина, который только на 68% идентичен таковым EqTV и BoTV. РoTV может быть также дифференцирован от EqTV и BoTV на основе наличия у двух последних небольшой ORF, расположенной полностью внутри гена N. Эта ORF, кодирующая полипептид с приблизительной Mr 10х103, нарушается у РoTV терминирующим кодоном. Сиквенс ПЦР-продуктов С-концевой области гена N и 3’-нетранслируемой области показал более чем 93% идентичности между HuTV, BoTV и EqTV. Тем не менее, незначительные, но четкие различия по сиквенсу были обнаружены между пятью изолятами HuTV и EqTV. BoTV, PoTV и HuTV вызывают гатсроэнтериты, а BoTV, в редких случаях, вызывает инфекцию респираторного тракта. Об ассоцияции EqTV с какой-либо болезнью пока не известно.

Виды (4 вида):

Название вида вируса	Название на русском языке	№ генома	Аббревиатура
Bovine torovirus Breda virus	Бычий торовирус Вирус Бреда	Y10866	BoTV BRV
Equine torovirus Berne virus	Торовирус лошадей Вирус Берн	--	EqTV BEV
Human torovirus	Торовирус человека	--	HuTV
Porcine torovirus	Торовирус свиней	--	PoTV

Отличительные признаки между корона - и торовирусами. Коронавирусные мРНК содержат 5’-лидерный сиквенс, который не обнаружен у торовирусов. Коронавирусы имеют спиральный нуклеокапсид, окруженный коровым чехлом, тогда как торовирусы имеют трубчатый (тубулярный) нуклеокапсид. Вирусы обоих родов имеют хорошо различимые спайки (выступы), образованные крупными гликопротеинами, но протеины НЕ встречаются только у некоторых вирусов. Протеин N значительно крупнее у коронавирусов, чем у торовирусов; протеин М гликозилирован только у коронавирусов. Сиквенсы протеинов торо - и коронавирусов имеют незначительное сходство.

Филогенетическое родство внутри семейтсва.Сравнительный анализ сиквенсов протеинов S, N и М коррелирует с антигенными различиями. Вирусы, относящиеся к 1 группе, составляют один генетический кластер. Однако эти вирусы менее родственны между собой, чем вирусы 2 группы; и, особенно хорошо эволюционная дивергенция просматривается между HCoV-229E и PEDV. Близкое родство между вирусами 2 группы (MHV, HCoV-OC43, BСoV, TCoV), формирующими генетический кластер, показано в отношении всех трех протеинов. На данный момент информации по сиквенсам недостаточно для оценки филогенеза торовирусов, но, тем не менее, показано, что торовирусы генетически и серологически близкородственны. Ограниченное, но, в то же время, убедительное сходство сиквенсов некоторых продуктов генов между торо - и коронавирусами подкрепляют заключение, что оба рода относятся к одному семейству. Иммунологические данные свидетельствуют, что торовирусы лошадей и КРС антигенно родственны друг другу и торовирусоподобным частицам, обнаруженным в пробах, полученных от человека, но не другим вирусам животных, включая коронавирусов.

ИНФЕКЦИОННЫЙ ГАСТРОЭНТЕРИТ СВИНЕЙ

Transmissible Gastroenteritis (TGE) (англ.); Gastroenteritis infectiosa suum (лат.);

Transmissible Gastroenteritis des Schweines, Virusdiarrhea der Schweine (нем.)

Инфекционный гастроэнтерит свиней (ИГС) (трансмиссивный гастроэнтерит свиней - ТГС, болезнь Дойла и Хитчингса) - остро протекающая высококонтагиозная болезнь, глав­ным образом поросят до 3-мес возраста, проявляющаяся рвотой, тяжелой диареей и высокой смертностью (часто до 100%) среди поросят до 2-нед возраста.

ИГС первыми описали Дойл и Хитчингс (США) в 1946 г. Вспышки его отмечены в Японии (1956), Великобритании (1957), Канаде (1964) и во многих странах Европы, в т. ч. в странах СНГ. Показано, что 19-54% свиноферм Европы и Северной Америки серопозитивны по ТГС (46). Распространенность в большинстве европейских стран составляет около 100%. Эта ситуация обусловлена респираторным вариантом вируса ИГС, названным респи­раторным коронавирусом свиней (РКВС), который быстро распространился с 1986 г

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Вирусную этиологию подтвердил Doyle и Hutchings, когда они описали фильтруемость этиологического агента. Вирус относится к семейству Coronaviridae роду Coronavirus. Вирус инфекционного гастроэнтерита свиней (ВИГС) впервые выделил и описал японский исследователь Тайима (1970). Помимо ВИГС, к коронавирусам сви­ней также относятся ГА-вирус энцефаломиелита и вирус эпизоотической вирусной диареи. Последняя протекает несколько легче. Видимо, к группе эпизоотической вирусной диареи следует отнести вирус КВ-777, вызывающий массовые вспышки диареи у свиней разных возрастов и индуцирующий образование АГ в цитоплазме тонкого и толстого кишечника. Его обнаруживают в содержимом кишечника и фекалиях больных поросят.

Морфология и химический состав. ВИГС оболочечный, плеоморфный, диаметром 60-160 нм, имеет один слой булавообразных отростков на поверхности проек­ции длиной 12-25 нм. РНК, экстрагированная из вирионов, обладает инфекционностью. Плавучая плотность ви­рионов в градиенте сахарозы составляет 1,18-1,20 г/см3. Фосфо - и гликолипиды, ин­корпорированные в оболочку, имеют клеточное происхождение, таким образом, оболочка вириона клеточнозависимая. ВИГС содержит 3 главных структурных белка: нуклеокапсидный белок (N), мелкий оболочечный гликопротеин (М) и большой гликопротеин пепломеров (S). В зрелом вирионе N-протеин "вплетен" в вирусную РНК, образуя рибонуклеопротеидный комплекс.

Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу и дезоксихолату натрия, ус­тойчив к трипсину. Не подавляется ДНК-ингибиторами. Инактивируется 0,03%-ным р-ром формалина, 1%-ным Lysovet (смесь фенола и альдегида), 0,01%-ным р-ром р-пропио лактона, гипохлорита натрия, едкого натрия, йода. Изучена сравнительная термическая инак-тивация 2-х штаммов вируса инфекционного гастроэнтерита Perdue и ДОЗ. Возбудитель ус­тойчив к замораживанию. В замороженном виде вируссодержащий материал сохраняется 5-8 нед, при -18°С - до 18 мес, при -20, -40 или -80°С - 365 дн; при нагревании до 56°С инактивируется за 30 мин и до 50°С в присутствии 1М MgCLz - за 1 ч, при 37°С полная потеря инфекционности наступала через 4 дн. Устойчив к рН (4-9). В жидком кале на солнце инактивируется за 6 ч, в тени - за 3 дня. Амантадин и пуромицин тормозят репродукцию вируса. ВИГС стабилен в желчи поросят при рН 3,0, сохраняющую его инфекционность в тонком кишечнике.

Антигенная структура. В виру­се ТГС выявлены 4 АГ-сайта (А, В, С и D) и идентифицировано 11 эпитопов, 8 из которых вируснейтрализующие.

У коронавирусов свиней и собак в протективном белке обнаружено, по крайней мере, одна общая АГ-детерминанта, обеспечивающая практически одинаковую защиту поросят при иммунизации матерей гомо - и гетерологичным вирусом.

Антигенная вариабельность. Штаммы вируса, выделенные от животных в разных странах, серологически идентичны, хотя в последние годы появились варианты. Существует иммунологическое различие между кишечным и культуральным ВИГС. Кишечный вирус содержит АГ А. В 1977 г. установлено АГ-родство ВИГС с ВИПК, а также коронавирусом собак (КВС). Вирус ИГС имеет 1 серотип, не имеет связей с вирусом энзоотической диареи свиней и ГА-вирусом свиней. Выделенный недавно респираторный коронавирус свиней (RSCV/PKBC), получивший широкое распространение в ряде западноевропейских стран, оказался в АГ-отношении тесно родственным ВИГС. Главным отличием его является ис­ключительный пневмотропизм при отсутствии энтеропатогенности. В АГ-огношении оба вируса сходны между собой и имеют одинаковые нейтрализующие эпитопы во всех ви-рионных белках (N, S, М). Однако монАТ, специфичные к белку S ВИГС, распознают РКВС. Вирус эпизоотической диареи свиней по всем свойствам является типичным короновирусом, хотя и не обладает АГ родством с другими представителями семейства коронавирусов. Исследована степень родства ВИГС и РКВС по уровню индукции специ­фических реакций клеточного иммунитета и защиты против контрольного заражения поро­сят. ВИГС не имеет АГ родства с 2-мя другими коронавирусами свиней: ГА-вирусом энцефаломиелита (PEDV) и вирусом эпидемической диареи поросят (CV777). Энцефалит, обусловленный ГА-вирусом, регистрируется в Европе и на Тайване, AT выявлены на огра­ниченном поголовье взрослых свиней в США. ВИГС, КВС и ВИПК АГ связаны. Подтверждено, что эти 3 вируса могут представлять ряд мутантов исходного вирусного штамма. Перекрестная реакция имеет место также на уровне структурных белков S, N и М в реакциях радиоиммунопреципитации, иммуноблотинга, ИФА. Аналогичные пере­крестные реакции со структурными белками ВИГС и РКВС наблюдали с использованием поликлональной сыворотки в иммуноблотинге.