Лекционный курс по частной вирусологии Часть третья (стр. 26 )

Испытуемые материалы, суспензии из проб органов (20%) от павших, вынужденно убитых или подозреваемых в заражении АЧС и вакцинированных животных; сыворотки крови хронически больных, переболевших и вакцинированных животных.

ИФА. ИФА (ELISA) используют для обнаружения специфических AT в сыворотках крови больных АЧС. Набор препаратов для непрямого метода ИФА вклю­чает, антивидовой (антисвиной) пероксидазный конъюгат (антисвиные Ig сыворотки осла, меченые пероксидазой); специфическая сыворотка свиньи, содержащая AT к вирусу АЧС, контрольная (нормальная) сыворотка свиньи; специфический культуральный АГ для серо­логической диагностики АЧС; контрольный АГ из незараженной культуры клеток. Поли­стироловые пластины для ИФА сенсибилизируют специфическим и нормальным АГ, взя­тыми в рабочих разведениях, в течение ночи при комнатной температуре во влажной камере в 0,5 М карбонатно-бикарбонатном буферном р-ре. Учет результатов проводят через 20 мин после проявления окраски на сканирующем спектрофотометре при длине волн 492 нм или визуально. Для визуального учета необходимо остановить реакцию, внося в лунки по 25 мкл 2,5 М H2SO4 Реакцию учитывают по разности поглощения сыворотки в испытуемых разве­дениях против специфического и контрольного АГ Результат считают положительным, если разница поглощения при разведении сыворотки 1:125 превышает 0,1

Метод ингибирования твердофазного ИФА. Предназначен для выявления специфи­ческих к вирусу АЧС антител в сыворотке крови или суспензиях проб органов животных с низким их уровнем (1:5-1.25) в ранние сроки после вакцинации или заражения (3-5 сут). Преимущество его заключается в том, что он позволяет выявлять AT в цельной пробе и проще в техническом исполнении, не уступая по чувствительности непрямому методу

Инструментальный учет проводят после внесения субстрата и инкубирования пластин в темноте при комнатной температуре аналогично непрямому ИФА Если интенсивность (оптическая плотность) окрашивания в лунках с испытуемыми пробами снижается на 50% и более по отношению к оптической плотности содержимого лунок с нормальной сывороткой, т е оптическая плотность содержимого лунок с исследуемой сывороткой в 2 раза и более ниже, то данная сыворотка считается положительной

ВИЭОФ. Используют для выявления специфических AT в сыворотках крови больных свиней при хроническом и латентном течении АЧС. В РФ предложен порядок и схема лабораторных исследований при первичном диагностировании АЧС. Патматериал из первичного эпизоотического очага направляют во ВНИИВВиМ Предварительно диагноз ставят на основании экспресс-анализа поступившего материала при выявлении специфиче­ского АГ и AT в прямой ИФ и непрямой ИФ с ответом через 3 ч с момента получения проб Диагноз подтверждают выделением возбудителя в КЛС или КМС и биопробой на подсвин­ках Затем вирус идентифицируют и типируют в РГА, ИФ и РЗГА, при положительных ре­зультатах ставят окончательный диагноз АЧС исключают на основании отрицательных данных выявления АГ и AT в ИФ, твердофазного ИФА и ВИЭОФ, выделения и идентифи­кации вируса в культуре клеток в течение трех последовательных пассажей (15 сут) проб патматериала и сыворотки крови животных, подозреваемых в заражении. Патологический материал из вторичных эпизоотических очагов АЧС исследуют в зо­нальных специализированных лабораториях по особо опасным заразным болезням живот­ных и во ВНИИВВиМ Зональные специализированные лаборатории при наличии специфи­ческих АГ или AT в исходных пробах через 2-3 ч ставят предварительный диагноз на АЧС и направляют материал во ВНИИВВиМ Ретроспективную диагностику проводят выявлени­ем антител в сыворотке крови свиней ВИЭОФ и твердофазным ИФА Отсутствие их дает основание дать отрицательный результат на АЧС Положительные данные ВИЭОФ или твердофазного ИФА подтверждает непрямой ИФ, после чего ставится диагноз на АЧС Во ВНИИВВиМ на основании выделения, идентификации и типирования возбудителя в культу­рах КЛС или ККМС в РГА, ИФ и РЗХГА через 1-15 сут устанавливают окончательный ди­агноз на АЧС, вызванную ГАд штаммами Низковирулентный негемадсорбирующий вирус АЧС (летальность 30-50%) выявляют обнаружением специфических AT в ИФ, выделением возбудителя в течение 1-3 пассажей (5-15 сут) в клетках КЛС и КМС и идентификацией АГ в ИФ При необходимости проводят биопробу Отрицательное заключение на АЧС во вто­ричных эпизоотических очагах дают по тем же критериям, что и в первичном

Современная дифференциальная диагностика АЧС и КЧС обеспечивает проведение со­ответствующих противоэпизоотических мероприятий по локализации, ликвидации и преду­преждению распространения в наиболее сжатые сроки Разработка наборов препаратов для выявления АЧС и КЧС, оценка их эффективности на большом полевом материале позволи­ли предложить схему лабораторной дифференциальной диагностики этих болезней ИФ мазков-отпечатков, несмотря на низкую чувствительность широко применяют в зональных специализированных лабораториях при предварительной оценке материала для последую­щего направления в региональный центр Исследуемым материалом для выделения вирусов АЧС и КЧС сразу же инокулируют культуры ККМС (КЛС) и РК-15 В течение 1-5 сут инку-бирования культуры клеток 1-го пассажа контролируют РГА и ИФ на наличие вируса АЧС, исключая возможную неспецифическую ГАд или наличие негемадсорбирующего вируса Для обнаружения вируса КЧС в культуре клеток РК-15 ИФ проводят ежедневно в течение 4 сут При отрицательных результатах делают 3 пассажа с обязательной ИФ

В случае выделения вируса АЧС его типируют в РЗГА Одновременно пробы исследуют на наличие специфических AT в сыворотке и органах (20%-ная суспензия) унифицирован­ной ИФ на оба вируса, методом ингибирования твердофазного ИФА возбудителя АЧС и РН флюоресцирующих микробляшек (РНФБ) вируса КЧС Положительные результаты ИФ и РНФБ на КЧС оценивают в зависимости от сроков проведения вакцинации, а на АЧС - да­ют основание поставить окончательный диагноз

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

В патогенезе и иммуногенезе АЧС аллергические или аутоаллергические реакции игра­ют существенную роль. При действии аттенуированных штаммов вируса на лимфоид-ные клетки происходит синтез неполноценных AT, неспособных нейтрализовать вирус Об­разуются комплексы антиген-антитело, которые концентрируются в тканях органов-мишеней, приводя к нарушению их функций и развитию аллергических и аутоиммунных процессов, наблюдают стимуляцию клеточного иммунитета - лизис инфицированных клеток сенсибилизированными лимфоцитами, выделение медиаторов клеточного иммунитета лимфотоксина, фактора угнетения миграции бласпрансформации и др Развитие этих про­цессов зависит от биологических свойств используемых штаммов и индивидуальных осо­бенностей организма (состояние иммунной системы)

Определенную роль в патогенезе болезни играют взаимодействие вируса с эритроцита­ми и нарушение механизма свертывания крови. Влияние вируса на клетки лимфоидной системы и эритроциты характеризуется их разрушением или изменением функции, а также развитием аллергического и аутоиммунного процессов

Переболевшие или привитые (инактивированным материалом или аттенуированным вирусом) животные имеют определенную степень устойчивости к гомологичному изоляту вируса (задержка гибели свиней), изменение выраженности клинических признаков болез­ни, выздоровление и полное отсутствие реакции на контрольное заражение) Отсутствие специфической защиты против изолятов, выделенных в других зонах, свидетельствует об их АГ и иммунологических различиях.

С Anderson наблюдал длительное носительство вируса и его приживление при по­вторном заражении у переболевших и привитых животных Пассивный и колостральный иммунитет выражен слабо AT недостаточно нейтрализуют вирус. Причины слабой на­пряженности иммунитета, а также нейтрализующей активности AT связывают с особенно­стями АГ структуры вируса (блокирование АГ липидами, конкуренция или маскировка про-тективных АГ видовыми АГ вируса или хозяина), а также с изменением функции лимфоид-ных клеток - нарушение взаимодействия вируса и АГ с макрофагами и кооперации послед­них с Т - и В-лифоцитами (28, 29) В пользу первого предположения свидетельствует слабый или измененный ответ на инактивированные АГ препараты как у чувствительных, так и у других видов животных В условиях низкой активности AT усиливаются реакции клеточно­го иммунитета, которые имеют существенное значение в блокировании инфекции, а также являются причиной развития гиперчувствительности замедленного типа, аллергических и аутоиммунных осложнений.

Процесс защиты при АЧС представляется в виде динамического равновесия между этиологическими факторами (вирусом) и механизмами иммунной защиты Он может быть преобладающим как в том, так и в другом направлении, это зависит от свойств применяе­мых шт и состояния иммунной системы животного Надежных профилактических препара­тов против АЧС - нет Получить инактивированные вакцины против АЧС классическими методами, используя современные методики, никому не удалось Большинство привитых животных при контрольном заражении погибали и только незначительная часть их выжива­ла после длительного переболевания Результаты испытания инактивированной вакцины на­водят на мысль, что основное значение в аномалии иммунитета при АЧС имеет структура АГ и их взаимодействие между собой, а не состояние иммунной системы макроорганизма. Препараты из живого аттенуированного вируса были более эффективными, вызывая слабую поствакцинальную реакцию, они защищали от заражения гомологичным вирусом 50-90% вакцинированных животных Однако, самые существенные недостатки живых вак­цин - длительное вирусоносительство после прививки, развитие осложнений у части иммун­ных животных, приживление у вакцинированных животных вирулентного вируса без про­явления клинических признаков болезни, что также опасно в практических условиях Учитывая эти недостатки поставлен под сомнение вопрос о применении живых аттенуирован-ных вакцин для ликвидации очагов болезни в сочетании с другими ветеринарно-санитарными мероприятиями Множественность иммунологических типов возбудителя и существование смешанных или измененных популяций вируса значительно ограничивают возможности использования таких препаратов Однако имеются сведения о подборе эффек­тивных средств для лечения больных свиней и снятия вирусоносительства, которые можно применять в сочетании с аттенуированными штаммами вируса. В материалах сове­щания экспертов по АЧС Европейского экономического сообщества (1978-1987) и других сообщениях намечено развитие научных исследований, направленных на создание компо­нентных, химических и генно-инженерных вакцин С этой целью изучают тонкую АГ струк­туру возбудителя АЧС и инфицированных клеток, структуру и функции генетического мате­риала проводят поиск протективных АГ с использованием современных методов молеку­лярной биологии генетики, монАТ Эти направления могут привести к выработке новых подходов к созданию эффективных и безвредных вакцин против АЧС

Ветеринарно – санитарная оценка продукции. На убой не допускают. В случае убоя всё уничтожают сжиганием.

СОДЕРЖАНИЕ.

Семейство: Flaviviridae…………………………..4

Coronaviridae……………………….25

Picornaviridae………………………45

Arteriviridae………………………...55

Asfaviridae…………………………..64

Список рекомендуемой для студентов монографической литературы по теме лекций.

1.  , , Семенихин с микробиологией. М. Колос. 1997.

2.  Частная эпизоотология. Под редакцией . М. ОГИЗ. 1948.

3.  астная патология и терапия домашних животных. М. ГИСЛ.1961.

4.  , Гайдамович и частная вирусология. М. Медицина.1982.

5.  , Васильев и номенклатура вирусов позвоночных. УГСХА. Ульяновск 2002.

6.  и др. Общая вирусология. М. Мир. 1981.

7.  Методы вирусологии и молекулярной биологии. М. Мир. 1972.

8.  Малоизвестные заразные болезни животных. М. Колос 1973.

9.  Николау. Ш.С. и др. Элементы общей инфрамикробиологии. Бухарест 1965.

10.  Эпизоотология. Под ред. 1984.

11.  Фомина. Н. Диагностика вирусных болезней животных. М. Агропромиздат 1991.

12.  Самуйленко А и др. Вирусные болезни животных. М. ВНИТИБП.1998.

13.  ирусные и бактериальные болезни у обезьян. Калуга. Контур.1998.

14.  и др. Биология вирусов животных. М. Мир.1977.

15.  Ющюк. Н., екции по инфекционным болезням. М. ВУНМЦ. 1999.

«Курс лекций по частной вирусологии»

учебное пособие

подготовлено: Васильевым В. Ю