Лекционный курс по частной вирусологии Часть третья (стр. 12 )

Патизменения у поросят-сосунов, павших в первые 3 дня жизни, наблюдают, главным образом, в желудке и тонком кишечнике. В желудке небольшое количество свернувшегося молозива, слизистая его набухшая, покрасневшая, местами ослизневшая. Аналогичные из­менения и в тонком кишечнике. У поросят 2-нед возраста картина вскрытия более выраже­на. Труп истощен, конъюнктива, слизистые носовой и ротовой полостей бледные, с синюш­ным оттенком, скелетные мышцы вялые, суховатые. На ушах, брюхе, шее часто появляются красно-фиолетовые пятна. Слизистая оболочка дна желудка резко гиперемирована, набух­шая, покрыта слизью, иногда усеяна точечными кровоизлияниями, местами эрозирована и изъязвлена. Тонкий кишечник растянут газами, заполнен жидким содержимым, в состоянии катарального или катарально-геморрагического воспаления. Слизистая тонкого кишечника полнокровна или в состоянии катарально-геморрагического воспаления. Брыжеечные, пор­тальные, почечные и желудочные лимфоузлы набухшие, сочные, селезенка полнокровна. Печень бледная или пятнисто окрашена, дрябловатой консистенции. Почки бледные, иногда с мелкими кровоизлияниями под капсулой. Слизистая мочевого пузыря набухшая, усеяна кровоизлияниями. Сердце увеличено, миокард серого цвета, дрябловатый, под эпи - и эндо­кардом по ходу сосудов мелкие кровоизлияния. Легкие без особых изменений или несколько полнокровные. Оболочки головного мозга гиперемированы, вещество мозга иногда размяг­чено, отечно, с мелкими кровоизлияниями. У подсвинков и взрослых свиней картина вскры­тия сходна с таковой у 2-нед поросят, но слабее выражена.

У поросят, погибших через 1-3 дня после рождения, в желудке и тонком кишечнике ус­танавливают слизистую дистрофию и некроз эпителиальных клеток, полнокровие и отек со­единительно тканной пластинки и подслизистого слоя кишечника. У поросят 2-нед возраста обнаруживают более глубокие изменения. В желудке - полнокровие и кровоизлияния, дис­трофия покровных клеток, обширные эрозии и некрозы, окруженные клеточными инфильт­ратами из лейкоцитов. Часто отмечают серозный или фибринозный гастрит. В тонком ки­шечнике гиперемия, гиперсекреция, вакуолизация, некроз и десквамация эпителия ворсинок вплоть до полного их оголения. Большая часть ворсинок атрофирована и деформирована. Собственный и подслизистый слои гиперемированы, отечны, часто с кровоизлияниями, ин­фильтрированы лимфоидными, эозинофильными и плазматическими клетками. В толстом кишечнике гиперемия, иногда дистрофия и некроз клеток эпителия крипт. Селезенка и лим­фоузлы инфильтрированы эритроцитами, строма их отечна. В печени гиперемия, зернистая дистрофия гепатоцитов и нарушение балочного строения, в почках зернистая дистрофия канальцевого эпителия, в сердце изменения тинкгориальных свойств саркоплазмы мышечных волокон, отек межмышечной соединительной ткани. В головном мозге находят пёриваску-лярные лимфоцитарные "муфты", очаги пролиферации глии.

Патогенез. Попадая в организм через ЖКТ или органы дыхания, вирус проникает в эпителий тонкого кишечника. Размножаясь в цитоплазме клеток ворсинок слизистой обо­лочки, он вызывает дегенерацию и некроз их. Под влиянием продуктов распада этих клеток и токсинов происходит нарушение гемодинамики и усиливается проницаемость стенок мик­роциркулярного русла, что способствует проникновению части вируса в кровь. Однако ос­новная масса вируса локализуется в эпителии кишечника, вызывая дистрофию, некроз и де-сквамацию клеток ворсинок, из-за чего последние укорачиваются (атрофируются). Наиболее выраженный некроз клеток и атрофию ворсинок отмечают в каудальной части 12-перстной, тощей и подвздошной кишок. Названные изменения эпителиальных клеток являются при­чиной острого нарушения процессов пищеварения, диспепсии, диареи и обезвоживания, на­рушения обмена веществ. Отмечают ацидоз, общую интоксикацию и гибель животных.

Распространение вируса ИГС по эпителию кишечника происходит путем выделения ви­руса из инфицированных клеток в просвет кишечника, а затем заражаются близлежащие клетки через апикальный домен. При инфекции РКВС атрофии сосочков тонкого ки­шечника не наблюдается. Однако в легких развивается интерстициальная пневмония у большинства инокулированных животных.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни и резуль­татов лабораторных исследований. Лабораторная диагностика включает изоляцию вируса из органов погибших, идентификацию его в РН и РИФ в культуре клеток и выявление специфических AT у больных и переболевших животных. В качестве экс­пресс-диагностики используют РИФ для обнаружения вирусного АГ в органах животных.

Выделение вируса. Взятие и подготовка материала. Для исследования в лабораторию направляют тонкий кишечник (тощую и подвздошную кишки с содержимым) и мезентериальные лимфоузлы от поросят в начальной стадии проявления клинических признаков болезни (первые часы диа­реи). Кроме того, целесообразен отбор органов и тканей (кусочков лёгкого, печени, селезён­ки, почек, головного мозга). Патологический материал от трупов, пролежавших более 2 ч после гибели, для исследования не пригоден. Материал необходимо брать от 8-9 больных поросят 3-5 поражённых помётов (по 2-3 поросёнка из помёта). От каждого поросёнка берут пробы массой 10 г. Отрезок кишки длиной 10-12 см перевязывают и берут с содержимым. Пробы патматериала доставляют в лабораторию в плотно закрытых стеклянных флаконах, помещенных в сосуд Дъюара с жидким азотом или в термос с сухим льдом. Для серологи­ческих исследований направляют парные сыворотки крови от свиноматок, в помётах кото­рых болеют новорождённые поросята, взятые с интервалом в 21 день. Вируссодержащий материал сохраняют в активном состоянии в течение нескольких лет при температурах ми­нус 20:-70°С. При -28°С вирус остаётся активным около 3,5 лет. При 4°С он может сохра­ниться в течение 1-го мес. В связи с фоточувствительностью вируса все вируссодержащие материалы следует защищать от действия света. С целью длительного сохранения патологи­ческий материал (фрагменты кишечника) можно замораживать до -30:-70°С и использовать по мере надобности в течение 2-3,5 лет. Для вирусологических исследований оттаиванию подвергают лишь необходимую часть патологического материала. Исходный материал ста­раются постоянно держать в глубоко замороженном состоянии. Упаковка должна надёжно предохранять материал от какого-либо воздействия на него жидкого азота. Для выделения вируса из органов поросят (отдельно паренхиматозных органов и кишечника) готовят 10%-ную суспензию на р-ре Хенкса по общепринятой методике и после проверки её на стериль­ность используют для заражения чувствительной системы (культура клеток, поросята).

Заражение культуры клеток. Выделение вируса проводят на первичных и перевивае­мых линиях клеток поросят (почек, щитовидн. ой и слюнных желез, тестикул). Материалом пробы инокулируют не менее 4-8 пробирок с куль-й клеток. Для исследования методом ИФ заражают культуру клеток, выращенную на стеклышках. Её просматривают в течение 5-7 сут. При отсутствии ЦПД в первом пассаже проводят 5-7 последо­вательных пассажей. Обычно ЦПД вируса наступает через 2-7 пассажей и характеризуется набуханием, утолщением с последующим укорочением и округлением клеток до полного разрушения монослоя. Идентификацию выделенного вируса проводят в РИФ и РН.

Заражение восприимчивых животных. В связи с наличием большого количества штаммов ВИГС, не обладающих ЦПД, биопроба на восприимчивых поросятах - надежный метод выделения вируса. У зараженных животных вирус сравнительно легко удается выде­лить из фекалий, одн. ако в наивысших концентрациях он содержится в слизистых оболочках тонкого кишечника, особенно двенадцатиперстной и тощей кишок. Уже через 24-72 ч после клинического проявления болезни титры вируса в этих тканях достигают 106 -107 ИД50 /г. По­этому, если необходимо выделить вирус, поросят убивают через 24 ч после появления диа­реи и полученные от них материалы (содержимое и соскобы слизистой тонкого кишечника) подвергают вирусологическому исследованию. В крови и почках поросят вирус об­наруживают через 24-48 ч после заражения, но титры его низкие–101 -102 ИДдо/г, изредка концентрация вируса в почечной ткани может достигать 105 -106 ИД50/г.

У новорожденных поросят, зараженных интраназально, через 2 ч после заражения вирус может быть обнаружен в ткани легких (титры до 104 ИД50/г), а у поросят, зараженных ин­траназально в 6-дн. возрасте, вирус может быть обнаружен в слизистой оболочке носа (титры до 104 ИД50/г). Для подтверждения диагноза важно также исследование в РН парных сывороток, 1-ую из них берут на 3-5-й день после начала болезни, а 2-ую (от выживших жи­вотных) - через 1-2 нед..

Для биопробы можно использовать супоросных свиноматок за 3-5 дн. до опороса. Сви­номатку заражают 10%-ной суспензией, приготовленной из пораженных стенок тонкого ки­шечника вынужденно убитых больных поросят, или вируссодержащей культуральной жид­костью. Исследуемый материал вводят per os в количестве 10 мл. Контролем служит 2-я су­поросная свиноматка. Биопробу считают положительной, если через 24 ч (реже через 48 ч) поросята, родившиеся от зараженной свиноматки, заболевают с клиникой ИГС. В сомни­тельных случаях проводят исследования органов от вынужденно убитых в агональном со­стоянии поросят подопытной группы методами РИФ и РН.

Индикация и идентификация вируса

ИФ. Её используют для быстрой индикации и идентификации АГ ВИГС в культуре кле­ток, инфицированных вирусным материалом, а также мазках-отпечатках, гистологических срезах патологического материла (фрагментов тонкого кишечника) от животных, естествен­но-больных или заболевших после экспериментального заражения. РИФ применяют в пря­мом и непрямом вариантах по общепринятым методикам. ИФ считается положительной при наличии в препаратах ярко-зеленого свечения клеток или цитоплазмы с ярко светящимися гранулами разного размера при отсутствии флюоресценции в контрольных препаратах. Свечение лейкоцитов и дегенеративно измененных клеток не учитывается. Выявление виру­са может быть успешным, если исследования проводятся на поросятах не поздн. ее чем через 24 ч после их заболевания. Наибольшее количество флюоресцирующих эритроцитов обнаруживают до и с наступлением диареи, позже число их невелико. Наиболее эффективным методом диагностики болезни оказалось исследование в РИФ замороженных срезов тощей кишки животных, убитых в период острой фазы заболевания. Одн. ако, по мнению других исследователей, метод мазков-отпечатков миндалин с помощью прямой РИФ превосходит исследования тощей кишки.