Лекционный курс по частной вирусологии Часть третья (стр. 19 )

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ.

Голландским ученым Wensvoort и Terpstra (Центральный ветеринарного института г Лелистад) удалось установить истинную этиологическую природу этой болезни, выделив вирус, названный ими "агент Лелистад", в культурах легочных макрофагов свиней. В на­стоящее время установлено, что возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, ко­торый входит в род артеривирусов.

Морфология и химический состав. Возбудитель болезни - РНК-содержащий вирус раз­мером 45-65 нм. Он имеет наружную оболочку и чувствителен к липидным растворителям. По физико-химическим свойствам напоминает представителей семейства тогавирусов, рода артеривирусов (вирус артериита лошадей). Вирусы РРСС, выделенные в Европе (агент Лелистад) и в США (VR-2332), несколько от­личаются по биологическим свойствам, хотя и имеют перекрестные серологические связи.

В культурах легочных макрофагов вирус РРСС вызывает ЦПИ в виде округления клеток с последующим пикнозом и отделением от монослоя в течение 2-4 сут. Вирус содержит РНК и оболочку, способен реплицироваться в макрофагах и проходить через плаценту, зара­жая плод, может длительно персистировать в организме животного и вызывать повторно им-муносупрессию. Передается при прямом контакте и респираторно. Быстро распространялся на фермах. Вирус РРСС проникает трансплацентарно, на что указывает обнаружение возбудителя и специфических AT у мертворожденных плодов и живых ослабленных поросят до первого приема молозива. Plagemann (1992) предполагает, что вирус РРСС относится к новой груп­пе вирусов, напоминающих тоговирусы, но имеющую положительно закрученную РНК и по структуре сходных с корона - и торовирусами.

Устойчивость. Вирус чувствителен к изменению рН среды. Оптимум рН от 5 до 7. Benfield et Welson (1992) сообщали, что вирус SIRS, выделенный в США, сохраняет инфекционность в гомогенатах пораженных легких при -70°С в течение 1,5 лет, при +4°С - 1 мес, при 37°С - 2-х сут. При температуре 55°С он инактивируется в течение 45 мин. Friey et.al. (1992) выделили вирус из патматериала, хранившегося в течение 3-х лет в замороженном состоянии.

AT свойства. Обследовано 4 свиноводческие фермы на наличие AT к вирусу РРСС с по­мощью ИФА в течение 12 нед после опороса. Титр AT у свиноматок сопоставляли с титром материнских AT у поросят в возрасте 2 нед. Материнские AT, выявляли у поросят в течение 4-10 нед. ВНА обнаружили через 12 дней после заражения или 18 дней после контакта с больны­ми животными. Максимальных титров они достигали на 40-50-е сутки после заражения и сохранялись до 120 дней (срок наблюдений).

Культивирование. Вирус РРСС успешно репродуцируется в легочных альвеолярных макрофагах (АМФ) поросят. Для получения АМФ используют 4-6-нед поросят, свободных от патогенной микрофлоры ферм. АМФ выделяли 2-кратным промыванием отпрепарированных и изолированных легких забуференным физраствором, содержащим антибиотики (пеницил­лин, стрептомицин, неомицин и амфотерицин), который нагнетали через трахею с помощью автоматического шприца с иглой (около 500 мл). Выбор жидкости из легких, содержащей АМФ, проводят обычно шприцами через то же отверстие. Суспензию клеток из легких цен­трифугировали при 1500 обор. - 15 мин. При наличии эритроцитов к осадку добавляли 0,83%-ный р-р хлорида аммония и после 5-мин инкубации при комнатной температуре клетки вновь центрифугируют при тех же условиях. Заражение вирусом РРСС проводили через 2-24 ч по­сле 2-кратной отмывки питательной средой и антибиотиками. Учет цитотоксического дейст­вия вируса проводят через 24, 48, 72, 96 и 120 ч. Культуральную жидкость используют в ка­честве AT ELISA. Титр макрофагального вируса составлял 1:8-1:16. Таким образом, АМФ могут быть использованы для препаративной наработки вируса в исследовательских целях, изготовления диагностикумов и обнаружения вируса в патологических материалах. Чувствительными к вирусу РРСС являются первичная культура АМФ свиней и клон клеток MARC-145 (клоновый вариант, полученный из переви­ваемой культуры клеток МА-104 почки африканской зеленой мартышки). Максимальное на­копление вируса отмечали при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток/1 мл с использо­ванием фетальной сыворотки и снятия мо­нослоя не позднее 3-4-х сут.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У свиноматок болезнь начинается с временного отказа от корма или худшей его поедаемости. В период абортов от­мечают как повышенную до 41,5°С, так и пониженную температуру тела. У отдельных жи­вотных наблюдают респираторные нарушения и у 1-5% - голубовато-красное окрашивание кожи ушей, пятачка и вульвы. Существенным признаком заболевания супоросных свиноматок периода, близкого к опоросу, являются аборты и преждевременные опоросы, возникающие через 2-3 нед после обнаружения первых симптомов болезни. По данным английских ученых, пораженные свиньи на первой стадии болезни проявляют признаки инфлюэнцы, в частности, высокую температуру тела и тяжелое дыхание. Позднее ярко-красные пятна появляются по всему телу свиньи. Спустя некоторое время окраска пятен изменяется, и они приобретают си­ний цвет. В первые 2 нед болезни аборты могут составлять 60-70%, через 3 нед - 50 и через 18 нед - 10%. В естественных условиях клиника может значительно варьировать от стада к стаду и не коррелировать с основной тяжестью репродуктивных нарушений. В от­дельных хозяйствах количество абортировавших свиней на последней стадии супоросности достигает 100%.

При анализе 214 пораженных хозяйств в округе Мюнстерленд в Германии установлено, что 37% абортов произошло на 100-112 дни, 49% - на 113-11дни 14% - на 117-120 дни супорос­ности. Если рассматривать крайние пределы нормальной супоросности в 113-117 дней, то запоздалые опоросы до 120 дней могут свидетельствовать о гибели плодов в более раннем пе­риоде, обусловленных другими инфекциями свиней с репродуктивным синдромом, такими как парвовирусная или энтеровирусная. Однако, как правило, мумификации плодов при ост­ром течении РРСС не наблюдается. В отдельных случаях у свиноматок наблюдали залежива­ние, шаткую походку, паралич задних конечностей или косую постановку головы. Гибель свиноматок не превышает 2%. После абортов свиноматки довольно быстро выздоравливают и только у отдельных из них отмечали "послеродовые схватки". Свиноматки повторно приходят в охоту, однако сообщается об удлиненном сроке холостого периода. У свиноматок, опоро­сившихся в оптимальные сроки супоросности (114,7±1,7 дн) в остром периоде болезни до 100% поросят могут быть мертворожденными Немецкие авторы, обработав большое количество статистических показателей поражен­ных хозяйств, установили, что от больных свиноматок в пометах насчитывали 30-40% мер­творожденных, 30% слабых и 30% внешне здоровых поросят. У мертворожденных поросят наблюдали выпуклообразную форму головы, конъюнктивиты и поражение роговицы глаз, подкожные отеки. Слабые поросята массой до 1 кг издают ужасающий визг и стенания, задние конечности их часто вытянутые, и они не могут нормально встать на ноги. При хроническом течении наблюдают относительное благополучие супоросных маток. Спустя 1-1,5 месяца возможно рождение на неблагополучной ферме здоровых поросят, но через некото­рое время вновь отмечают аборты. В откормочных хозяйствах болезнь протекает с рядом особенностей: основные клинические признаки связаны с поражением органов дыхания.

При вскрытии наблюдают кровоизлияния и отеки подкожной клетчатки, увеличенное со­держание жидкости в перикардиальной и брюшной полостях, дистрофию печени и изменения в легких. Они кровенаполнены и чаще имеют мозаичную окраску. Слаборазвитые поросята, как правило, гибнут в первые недели жизни. Через 4-6 нед заболевание начинает приобретает хроническое течение; наблюдается задержка роста и развития, а также повышенная чувстви­тельность к секундарным инфекциям. У отдельных животных отмечали негнойные энцефали­ты и миокардиты. Правда, у большинства поросят их не обнаруживали. В целом патологоанатомические признаки не характерны и напоминают таковые при бактериальных инфекциях. У маток с поражением ушей признаков миокардита не отмечали. У больных животных в США процент поражения сердечной мышцы значительно выше, чем в Германии. Нередко болезнь протекала в смешанной форме, одновременно с гриппом, БА, парвовирусной инфекцией.

Экспериментальная инфекция. Terpstra и др.. (1991) проводили опыты по заражению культуральным вирусом РРСС 8-ми свиноматок на 84-й дн супоросности. Только у 2-х свиноматок наблюдали 1-дн повышение температуры тела до 39,6°С. У 2-х - покраснение ко­жи ушей и учащенное дыхание. Одна свиноматка абортировала на 10-й дней супоросности и принесла 7 мертвых и 4 живых слаборазвитых поросят. Две другие опоросились на 116-й и 117-й дн супоросности и в пометах обнаружили 10 живых и 19 мертворожденных поросят, из которых 5 были мумифицированными Оставшиеся 5 свиноматок опоросились на 113-115-и дн супоросности без репродуктивных нарушений. В пометах было 58 поросят, многие из ко­торых были слаборазвитыми и 26 из них (40%) пали в течение 1-й нед жизни Вирус РРСС был выделен от 31 поросенка (30% инфицированности). При интратрахеальном и внутримышечном заражениях на 2-5-е сут у инфицированных подсвинков отмечалось незначительное (на 0,5-1,5°С) повышение температуры тела. У 2-х животных на 10-12-й день после заражения отмечен кашель. Других клинических признаков болезни не выявлено. Повышение количества лейкоцитов в крови было установлено через су­тки после заражения животных и к 4-му дню их уровень достигал 28-30 тыс/мл и сохранялся в течение 2-3 нед. У подсвинка, находившегося в контакте с зараженными животными, по­вышение температуры тела отмечено на 18-19-е, а увеличение числа лейкоцитов на 6-е сутки после совместного содержания. На 5 и 14 день после заражения было убито по одному животному. При патологоанатомическом исследовании у них отмечали единичные очажки острой бронхопневмонии. В обоих случаях из легких и легочных альвеолярных макрофагов выделен вирус РРСС. В остальных внутренних органах подопытных животных видимых из­менений не обнаружено. При интраназальном заражении вируссодержащей суспензией поросят 4-нед возраста температура тела их повышалась до 40,5°С, удерживаясь на этом уровне 3 дн, отмечалось учащенное дыхание, отказ от корма и общее угнетение Подкожное и внутримышечное введе­ние вируссодержащего материала не вызывало у взрослых белых мышей никакой видимой реакции. Однако та же суспензия после внутримозгового введения белым мышам вызывала появление нервнопаралитических признаков и их гибель. С 3-го пассажа гибель мышей на­ступала через 24 ч Вирус № 9-181-93, адаптированный к белым мышам, вызывал специфи­ческое ЦПД. В 1995 г. в Курской области был выделен вирус РРСС, кото­рый не вызывал ГА эритроцитов и Гад. У животных, зараженных европейским стандартным шт "Лелистад" вируса РРСС клинических признаков не отмечалось.