Лекционный курс по частной вирусологии Часть третья (стр. 20 )

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ.

С эпизоотической точки зрения важен путь распространения инфекции. В частности, в де­кабре 1990 г. болезнь зарегистрирована в Нидерландах. Свиноводство в этой стране - одно из наиболее концентрированных в мире, и естественно, болезнь очень быстро распространилась респираторным путём, весьма возможно, в потоках воздуха. Предположительно, факторами передачи возбудителя могли быть и птицы, а также люди и автомобили (если эти объекты были в контакте с инфекционным агентом).

Большинство сельскохозяйственных выставок и ярмарок по продаже свинопоголовья в 1991 г в Великобритании были запрещены. По данным госветслужбы этой страны в настоя­щее время нет доказательств распространения болезни воздушным путём, и все случаи заноса возбудителя связаны с передвижением поросят. Вирус может персистировать в заражённых стадах свиней до полугода. Это может быть связано с отсутствием сероконверсии у отдельных явно инфицированных животных. Отдельные заражённые свиноматки могут быть источником заражения для здоровых животных в течение 99 дней. Английские исследо­ватели считают, что стада свиней остаются заражёнными в течение 2-х мес после прекраще­ния появления явных клинических признаков болезни. Отмеченное прямо связанно с производственными показателями поражённых РРСС пле­менных ферм свиней. На небольших фермах на 50-200 свиноматок в период острого течения болезни недополучают более 50% поросят.

В нашей стране в 1991-1993 гг. в ряде хозяйств обнаружены массовые случаи абортов, рождение мёртвых и слабых поросят, респираторные расстройства. В 1993 г. в Голландию были направлены 40 проб сывороток крови от свиноматок с нарушениями репродуктивной функции из 10 хозяйств для исследования на наличие AT к вирусу репродуктивного и респи­раторного синдрома. Во всех 10 обследованных хозяйствах обнаружены положительно реаги­рующие свиноматки. Из 40 исследованных проб сывороток крови 38 оказались положитель­ными, причем большая часть сывороток (72,5%) содержала специфические AT в высоких титрах (1:640 и выше). Высокий процент положительных сывороток свидетельствует о широ­кой циркуляции вируса в исследуемых свиноводческих хозяйствах. Вирус РРСС, вероятно, обладает иммунодепрессивными свойствами. Американскими ис­следователями установлено уменьшение числа альвеолярных макрофагов и нарушение их функции у инфицированных поросят. Макрофаги играют важную роль в индукции AT обра­зования - они передают агент Т - и В-лимфоцитам. Развитие респираторного синдрома, по-видимому, обусловлено вторичными бактериальными инфекциями после размножения вируса в альвеолярных макрофагах и нарушения иммунной системы лёгких.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз на РРСС ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований. Для выделения вируса используют сыворотку или плазму крови больных и павших поросят, пробы лёгких, селезёнки, плевральной и перикардиальной жидко­сти. Выделение вируса проводят в культурах альвеолярных макрофагов, полученных от мо­лодых (6-8 недель) СПФ-поросят. Успех голландских учёных и объясняется прежде всего тем, что они использовали эту культуру, в то время как культуры клеток РК-2, РК-15 и К-6 оказа­лись не чувствительными для выделения возбудителя. Идентификацию возбудителя проводят по физико-химическим и серологическим свойствам. Из серологических методов используют вначале непрямой метод ИФ и прямой метод ИФА В США для идентификации возбудителя использовали РН, разработанную с этим вирусом в университете штата Миннесота, а также ИФ и ИФА, разработанные в национальной лаборатории Ames в шт. Айова. Во Франции разработан непрямой метод ИФА для обнаружения специфических AT. Сероконверсия в ди­агностических титрах (1:20 и выше) развивается к 14-му да после экспериментального инфицирования, а к 28-му дн титры антител накапливаются до 1:1280. Разработана методика очистки и концентрирования культурального вируса РРСС, репродуцированного в культуре клеток МАРС-145 и FL. Предварительно вируссодержащая суспензия очищается от балласт­ных белков низкоскоростным центрифугированием, затем концентрируется 2-кратным осаж­дением ПЭГ мол м. 6000 и очищается высокоскоростным центрифугированием (7000 мин-1 в течение 6 ч). В градиенте плотности CsCl-сахарозы материал концентрировали в 100 раз. Очистка составляла 96,5%. Все этапы подготовки препаратов контролировали по активности в ИФА. Высокоспецифичные активные препараты АГ вируса РРСС используют для изготов­ления AT диагностикумов для ИФА. Метод непрямой ИФА более простой и его можно использовать в полевых условиях. Достаточно исследовать из стада 10 проб сывороток, (лучше парных), чтобы с уверенностью поставить лабораторный диагноз.

В Англии практикуется сбор из 12-15 пар сывороток от подозреваемого стада. Служба диагностики на РРСС в этой стране действует с апреля 1992 г. Исследовано уже 118 стад и было выявлено 31 стадо, положительно реагирующее на РРСС. При серологиче­ском исследовании ложноположительные реакции, как правило, отсутствуют, хотя ложноотрицательные являются обычными и достигают 25%. Benfield et. al. (1992) сообщали об ис­пользовании монАТ в ИФ при идентификации европейских, американских и канадских штаммов возбудителя РРСС. В РФ разработан твердофазный ИФА, для проведения диагно­стики РРСС, составлены наборы диагностикумов для выявления РРСС и специфических AT. МонАТ к вирусу РРСС могут быть использованы как для выявления АГ вируса РРСС в патологическом материале, так и для определения AT в сыворотках крови свиней, так как они дают более специфическую реакцию по сравнению с полиАТ.

При дифференциальной диагностике необходимо исключить вирусные и бактериальные болезни, протекающие с нарушениями в репродуктивных системах, а также отравления. Ис­ключают прежде всего АЧС, КЧС, БА, грипп свиней, ЭМК, парвовирусную болезнь, ТГЭ, лептоспироз и хламидиоз. Характерной особенностью этой болезни является обострение вто­ричных и хронически протекающих инфекций, возбудители которых могут скрытно циркули­ровать в пораженных стадах свиней. Это ещё более усложняет проведение лабораторной дифференциальной диагностики.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

После переболевания большая часть свиноматок оказываются иммунными к повторному инфицированию. AT к вирусу РРСС, выявляемые в ИФА, могут персистировать в течение го­да. При достаточно пессимистичном отношении к созданию средств специфической профилактики РРСС появляются предпосылки решения данного вопроса. Так выдан патент ЕРА 95200877.9 Akzo Nobel (Нидерланды) на европейские штаммы вируса репродуктивного рес­пираторного синдрома свиней, используемые для создания вакцин. О механизме разви­тия иммунитета известно крайне мало. В Англии также ведется разработка вакцин.

Меры борьбы. Специфических средств лечения при РРСС нет. Отсутствуют также сред­ства специфической профилактики. Лабораторная диагностика болезни затруднена преж­де всего из-за необходимости проведения большого спектра дифференциальных диагности­ческих исследований. Поэтому при возникновении болезни в ранее благополучной стране не­обходимо принятие решений проблемы в национальном масштабе: полностью запретить вы­воз свиней, туш и навоза из подозрительных ферм и свинохозяйств; наложить ограничения по передвижению свинопоголовья в течение 8 нед после последнего случая выздоровления. Свинопоголовье, предназначенное на экспорт, надо перевозить в специально оборудован­ных транспортных средствах. Подозрительный инфицированный материал (плаценту, плоды и мертворождённых поросят) необходимо уничтожать. Убирать, дезинфицировать помещения и места опороса свиноматок. Обязательно должны быть дезинфицированы коврики на входе свиноводческих помещений.

Ветеринарно – санитарная оценка продукции в нашей стране не разработана.

Семейство: Asfaviridae.

Таксономическая структура семейства.

Сeмейство: Asfaviridae Род: Asfavirus

Род: Asfavirus. Типовой вид: African swine fever virus (ASFV) (вирус АЧС).

Характеристика вириона. Морфология. Вирион состоит из нуклеопротеиновой коровой структуры, 70-100 нм в диаметре, окруженной внутренним липидным слоем, икосаэдральным капсидом, 172-191 нм в диаметре, и внешней липидосодержащей оболочкой. Икосаэдральный капсид (Т=189-217) состоит из 1892-2172 капсомеров, каждый из которых (13 нм в диаметре) имеет форму гексагональной призмы с центральным отверстием. Расстояние между капсомерами 7,4-8,1 нм. Внеклеточные оболочечные вирионы имеют диаметр 175-215 нм.

Плавучая плотность в Перколле 1,095 г/см3, в CsCl 1,19-1,24 г/см3, S20w 3500S.

Вирион чувствителен к хлороформу, эфиру, дезоксихолату, облучению, инактивирусется при 60 оС в течение 30 минут, при 20 оС или 4 оС сохраняется в течение нескольких лет. Инфекционность сохраняется при спектре рН 4-13. Инактивируется дезинфектантами (1%-ным формальдегидом – за 6 суток, 2%-ным NaOH – за 1 сутки), очень эффективны парафенилфенольные соединения.

Геном. ДНК, 170-190 kbp. 1 молекула, двуспиральная, линейная, с ковалентно закрытыми концами. Концевые последовательности инвертированы, комплементарны друг другу, имеют идентичные тандемные повторы длиной 2,1 kbp. Геном кодирует 150 ORFs.

Другие компоненты вириона.Вирион содержит более 50 протеинов, в том числе ферменты (РНК полимеразу, поли(А)-полимеразу, гуанилтрансферазу и протеинкиназу). Мажерные структурные вирусные протеины: р72, р30; структурные протеина р150, р37, р14 и р34 предшественником которых является протеин с Mr 220х103; р35 и р15, предшественником которых является протеин с Mr 62х103. Кроме этого, вирион содержит два ДНК-связывающих протеина р10 и р14,5; семь протеинов, содержащих трансмембранные регионы (р12, р17, р22, р54 или j13L, j18L, j5R и EP402R). Остальные протеины являются неструктурными и их количество и вид варьирует в зависимости от изолятов.

Оболочечные вирионы содержат липиды (гликолипиды). Углеводные соединения входят в состав протеина (EP402R) и гликолипидов. Вирус кодирует несколько трансмембранных протеинов, предположительно содержащих сайты N-гликозилирования.

Организация генома и репликация. 150 Открытых рамок считывания близко расположены (расстояние между генами не превышает 200 bp) и считываются с обоих цепей ДНК. Некоторые межгенные участки содержат повторяющиеся повторы. Репликация вириона происходит, в основном, в макрофагах свиней in vivo и in vitro хотя некоторе изоляты были адаптированы к культурам клеток. Вирус проникает в клетку путем рецептор-опосредованного эндоцитоза, после чего в цитоплазме сразу начинается ранний синтез мРНК с использованием ферментов и кофакторов, входящих в состав вирусного кора. Репликация вирусной ДНК и сборка происходят в перинуклеарных областях. Пик репликации ДНК приходится на 8-й час после заражения. Для продуктивной инфекции требуется ядро клетки. Транскрипты полиаденилированы по 3’-концам и кэпированы по 5’-концам. Экспрессия генов происходит по определенному каскадному типу. Ранние гены экспрессируются до репликации ДНК, после начала которой начинается экспрессия поздних. Некоторые структурные протеины экспрессируются как полипротеины с последующим разрезанием по сайтам GlyGlyX, остальные модифицируются фосфорилированием (р10, р32) и N-гликозилированием. Морфогенез вирионов происходит в определенных участках, богатых фибриллярным и мембранным материалом. Два слоя мембран имеют происхождение от эндоплазматического ретикулума и инкорпорируются как внутренние липидные мембраны, на которых, предположительно, происходит образование вирусного икосаэдрального капсида. Геном вируса и энзимы упаковываются внутрь нуклеопротеинового кора. Внеклеточный вирус имеет не плотно прилегающую липидную мембрану, образующуюся при почковании через плазматическую мембрану.