Лекционный курс по частной вирусологии Часть третья (стр. 17 )

Различают острое, подострое и субклиническое течение болезни. Везикулы, появляю­щиеся при остром течении болезни, трудно отличить от таковых при ящуре. Подострое те­чение сопровождается широкой диссиминацией вируса во внешней среде. Инкубационный период при остром течении продолжается 3-7 дн., иногда дольше. В это время у животных ухудшается аппетит, заметна вялость. С развитием везикул температура тела повышается до 40-41° и за 1-2 дня снижается до нормальной. Для болезни характерно появление везикул на ногах в области венчика копыт и реже на морде и языке. Чаше поражаются обе конечности, вследствие чего появляется хромота, которая через 3-4 дня исчезает. В это время может на­чаться отделяться копытный рог, а у отдельных животных - спадение рогового башмака. Иногда болезнь протекает легко, охватывает большое число животных и характеризуется слабозаметной хромотой. На месте лопнувших везикул остаются неглубокие, с геморрагиче­ским дном язвы, содержащие экссудат соломенного цвета. Область межкопытной щели по­ражается редко. У 5-10% свиней везикулы появляются на пятачке и в ротовой полости.

Подострое течение болезни характеризуется медленным распространением. Заболевают несколько свиней, у них обнаруживают единичные везикулы. Все заболевшие довольно бы­стро выздоравливают.

Хроническое течение болезни слабо выражено. Можно наблюдать хромоту, обусловлен­ную развитием отдельных везикул, появлением трещин копытного рога и отслоением баш­мака. Имеются данные, что по мере распространения болезни усиливается тяжесть переболевания. Болезнь, казавшаяся в очагах появления безобидной, становится опасной.

В местах образования везикул и эрозий гистологически различают изменение двух ти­пов. Изменение первого типа характеризуется вакуолизацией клеток шиловидного слоя, пикнозом ядер, разобщением клетки формированием мелких везикул, которые, сливаясь, образуют крупные везикулы. Их края плотно соединены с непоражённьм эпителием. Базальный слой вначале сохраняется, а затем инфильтрируется нейтрофильными гранулоцитами, эозинофильньми и мононуклеарньгми клетками. Изменения второго типа состоят в дегенерации клеток шиловидного слоя. Распавшиеся участки эпителия сильно инфильтрованы нейтрофильными гранулоцитами с примесью большого количества остатков ядер и детритных масс. Везикулы не образуются. На основании морфологических изменений разли­чить везикулярную болезнь свиней и ящур не удаётся. При везикулярной болезни микроско­пические изменения обнаружены в ЦНС. Поражения головного мозга обнаруживались на 2-й день после инокуляции вируса; на 6-й день они были более тяжёлыми, а на 12-й имели резко выраженный характер и проявлялись образованием периваскулярных муфт, состоя­щих из лимфоцитов и фокусов нейроглиальных клеток.

Патогенез.Поражения развиваются через 3-11дн после поедания контаминированного корма и через 2-4 дня после экспериментального заражения. Лихорадка продолжает­ся 5 дн. Пик виремии на 2-4 день после заражения. Гиперемия продолжается 6 дн. Вирус персистирует по крайней мере 10 дн. в тканях рыльца, языка, венчика копыт, заглоточных лимфоузлов, мышце сердца, в ЦНС.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз основан на использовании серологических реакций (РСК, РДСК, РДП, РН) и биопробы на свиньях. Для выделения вируса эпителий промывают, измельчают и центри­фугируют. Надосадочной жидкостью заражают перевиваемую линию клеток почек свиней (IB-RS-2) и клетки щитовидной железы теленка. Появление ЦПИ только в клетках теленка свидетельствует о ящурной инфекции. Для серологической дифференциации в РСК исполь­зуют специфическую сыворотку крови свиней и АГ из стенок везикул или везикулярную жидкость. Параллельно ставят реакцию непрямой ИФА (через 12, 24 и 48 ч после инокуля­ции клеточного монослоя 1 IB-RS-2). Чаще используют РН (микрометод) и ИФА. Применя­ют также двойную и радиальную ИД и РСК. Техника постановки ее предусматривает ис­пользование радиоактивного меченого АГ, который более чувствителен, чем АГ для РН. Предложена непрямая ИФ для выявления специфических AT к вирусам ящура, ВС, ВБС и ВЭС в сыворотке крови от разных видов животных. Однако, для дифференциации поствакцинальных и постин­фекционных AT в НИФ практически неприемлема. В то же время для выяснения эпизооти­ческой ситуации, особенно при подозрении на ящур, часто возникает необходимость опера­тивно вьывить наличие переболевших животных в стаде. Многолетнее использование НИФ показало, что она позволяет выявлять постинфекционные AT не только у явно переболев­ших животных, но и у тех, которые не имели клинических признаков болезни. Для дифференциальной диагностики ВЕС от ящура необходимо учитывать следующие данные - вирусы, вызывающие везикулярную болезнь, растут в тканевых культурах только свиного происхождения (RS-клеточной линии почки свиньи); - вирусы везикулярной болез­ни устойчивы при рН 5,0 и стабилизируются MgCl2 при нагревании до 50°С; - наличие об­щего КСА или ВНА у вновь выделенных штаммов с референс-штаммами вируса ВЕС. До­полнительными критериями являются: невозможность экспериментально инфицировать КРС, меньшая плотность вирусных частиц везикулярной болезни (1,32-1,34) по сравнению с таковой у вируса ящура (1,43-1,44). Заражение однодневных мышат позволяет отличить ВЕС от вируса ВЭС, но не от ящура.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

В Англии применяют культуральную инактивированную вакцину. Вирус (шт. ИК-27) выращивают в монослое или в суспензионных культурах клеток IB-RS-2, концентрируют, инактивируют ацетилэтиленимином, добавляют масляный адъювант. Во Франции приме­няют инактивированную масляную вакцину, которая сообщает иммунитет 73-100% живот­ным. Вирус накапливается в высоком титре (8,0-9,0 lg ТЦД50/ мл), что дает возможность получать эффективные вакцинные препараты без предварительного концентрирования ви­русного АГ. Технологии изготовления достаточно эффективных вакцин, разработанных в различных странах, во Франции (лаборатория Роне Ееллон) - эмульгированная формолвакцина, в Англии (Пирбрайт) - ацетилэтилениминовая ГОА вакцина; в Румынии - эмульгированная вакцина типа "масло в воде" с использованием суспензионной культуры клеток IBRS - 2 , в Германии (о. Римс) - формолвакцина с использованием первичной куль­туры клеток почки поросят и ГОА. Иммунизация свиней инактивированными препаратами создает достаточно высокий уровень защиты поголовья, обеспечивающий ограничение в распространении ВБС. Эмульгированная формолвакцина, которую применяют однократно внутримышечно в дозе 2 мл, обеспечивает иммунитет продолжительностью 8 мес. Вакцина сохраняет иммуногенность не менее года в условиях хранения при 2-6 °С.

Ветеринарно –санитарная оценка. Туши и продукты убоя от больных и подозрительных по заболеванию выпускать в сыром виде запрещается. При отсутствии паталогиеских изменений направляют образцы на бактериологическое исследование на сальмонеллёз. В случае обнаружения сальмонелл внутренние органы утилизируют, а тушу направляют на проварку. При отсутствие сальмонелл разрешается перерабатывать на варёные, варёно –копчёные колбасы, консервы или проварку.

Семейство: Artеriviridae.

Таксономическая структура семейства.

Порядок: Nidovirales Семейство: Arteriviridae Род: Arterivirus.

Характеристика вириона. Морфология. Вирионы сферические; диаметр 45-60 нм; состоит из изометрического нуклеокапсида диаметром 25-35 нм, окруженного липидной оболочкой. Спайков (выступов) на поверхности вириона не обнаружено, однако наблюдается определенный поверхностный профиль.

Плавучая плотность в сахарозе 1,13-1,17 г/см3, S20w 214-230S. Активность вирусов снижается при повышении температуры. Вирионы стабильны при хранении при температуре минус 70 оС. Вирус стабилен при значениях рН 6,0-7,5. Артеривирусы инактивируются под воздействием жирорастворителей (эфир, бутанол, хлороформ) и детергентов. Непродолжительное инкубирование в присутствии неионных детергентов, например, 0,01% NP40 или Triton X-100, приводит к эффективному разрушению вирусной оболочки (показано в отношении LDV).

Геном.РНК:1молекула, односпиральная, линейная, позитивная; размер 12,7-15,7 kb. Геномная РНК имеет по 5’-концу кэп-структуру типа I(SHFV)и поли(А)-тракт по 3’-концу.

Протеины.Вирусный нуклеокапсид сформирован одним основным нуклеокапсидным протеином (N, Mr 12-15 х 103). Этот протеин у всех артеривирусов кодируется 3’-концевой ORF. К оболочечным протеинам вириона относятся: негликозилированный, пронизывающий мембрану трижды, интегративный мембранный протеин (М) и мажерный вирусный гликопротеин, кодируемый ORF5 (ORF7 у SHFV), и также имеющий три потенциальных участка пронизывающих мембрану. Протеин М и протеин с ORF5 формируют гетеродимеры за счет дисульфидных связей. Минорный гликопротеин, кодируемый ORF2 относится к интегративным мембранным протеинам I класса. В вирионах также обнаруживаются гомодимеры из протеинов с ORF2. Гликопротеины, кодируемые ORF3 и 4, идентифицированы как минорные вирусные гликопротеины только у PRRSV. Клетки, инфицированные LDV или PRRSV, экспрессируют растворимый, неассоциированный с вирионом ORF3 гликопротеин. SHFV кодирует три дополнительных 3’-ORFs, которые могут быть дубликатами ORFs 2-4.

Артеривирусы кодируют 2 крупных неструктурных полипротеина: протеин ORF1a (Mr 187-260 х 103) и ORF1b (Mr 345-421 х 103), которые разрезаются вирусными протеазами до зрелых протеинов nsp1a, nsp1b (nsp у EAV) и nsp 2-12. Папаино-подобная цистеиновая протеаза (РСР) локализована в nsp1. Полипротеин ORF1а SHFV содержит 3 копии РСР, PRRSV и LDV – по 2 копии, а EAV – одну. Цистеиновая протеаза (СР) с уникальными свойствами локализована в nsp2. Сериновая протеаза (SP), родственная членам семейства 3С-подобных цистеиновых протеаз, локализована в nsp4. Протеаза SP ответственна за разрезание 10 неструктурных протеинов. Nsp9 содержит мотив РНК-зависимой РНК полимеразы, а nsp10 содержит металл-свзывающий мотив и нуклеозид-трифосат-связывающий/РНК-хеликазный мотив.

Другие компоненты вириона.Вирион имеет липидную оболочку клеточного происхождения. Протеины, кодируемые ORFs 2-4 у EAV, LDV и PRRSV, также как ORFs 2-7 у SHFV, содержат предполагаемые сайты N-гликозилирования. Гликозилирование протеина ORF5 (EAV и, вероятно, LDV) может происходить при добавлении различного количества лактозаминных повторов.