Исследование маркеров других вирусов герпеса обнаружило ряд достоверных отличий между обследуемыми группами. Выявление ДНК ВЗ с повышенной частотой (р=0,001) обнаруживается в МПК пациентов с СК и составляет 81,8% что гораздо выше, чем у пациентов с КП (27,3%) и у здоровых лиц (50%). Возможно, это объясняется тем, что в группе СК пациенты более пожилые ( 51-82 года). Ранее было отмечено, что с возрастом снижается клеточный иммунитет по отношению к сверхраннему белку IE 63 вируса Varicella Zoster, что приводит к усилению репликации данного вируса (Beutner et al., 2007). Помимо этого, была обнаружена повышенная частота выявления ДНК ВГ-6 (р=0,039) у пациентов с СК в 63,6% случаев по-сравнению с пациентами с КП (50%) и здоровыми лицами (36%). Не исключено, что имеет место взаимное усиление репликации вирусов ВГ-6 и ВГ-8, т. к. в экспериментальных работах in vitro показано, что совместное культивирование вирусов ВГ-6 и ВГ-8 приводит к усилению репликации ВГ-8 (Chun et al., 2005).
Также была выявлена достоверно низкая (р=0,02) частота детекции ДНК ВПГ1,2 в МПК пациентов с СК и КП в 18,2 % случаев по-сравнению со здоровыми людьми (46%).
Исследование IgG к ВГ-6 обнаружило достоверное (р=0,0002) снижение частоты детекции в группе КП (63,6%), по-сравнению с пациентами с СК (95,45%) и здоровыми лицами (96%). Наиболее выражено это оказалось у пациентов с псориазом: у 7 человек из 10 антитела к ВГ-6 не были обнаружены. Это явление, возможно, объясняется тем, что большинство пациентов с КП получают иммуносупрессивную и гипосенсебилизирующую терапию и в первую очередь в сыворотке крови исчезают антитела с менее высоким титром, что характерно для IgG к ВГ-6.
В отношении маркеров ЦМВ и ВЭБ достоверных отличий между обследуемыми гуппами выявлено не было (р>0, 05).
Исследование цитокинового статуса у пациентов и здровых лиц.
Далее мы исследовали особенности иммунитета и, в частности, изменение цитокинового статуса у обследуемых. Мы изучали экспрессию генов цитокинов по уровню их мРНК и продукцию цитокинов в сыворотке крови (см. Табл. 2, 3).
Исследование синтеза ИЛ-1β показало достоверное (р=0,0016) повышение его продукции у пациентов с СК. Несмотря на то, что медианные значения (МЗ) в группах СК, КП и здоровых составили 0,096 пг/мл, 0,085 пг/мл и 0,107 пг/мл, соответственно, наибольший диапазон Q3-Q1=0,856 пг/мл оказался в группе СК, в группах КП и здоровых лиц Q3-Q1 составил, соответственно, 0,018 пг/мл и 0,013 пг/мл. Отмечалось также повышение, хотя и статистически недостоверное (р=0,07), частоты экспрессии гена ИЛ-1β у пациентов с СК (81,8%) по-сравнению с пациентами с КП (50%) и здоровыми лицами (58%), т. е. у больных СК показана активация ИЛ-1β на уровне транскрипции, приводящая к усилению его продукции.
Таблица 2. Частота экспрессии генов цитокинов у пациентов с кожной патологией, СК и у здоровых лиц (в %).
ИФН-α | ИФН-β | ИФН-γ | ИЛ-1β | ИЛ-2 | ИЛ-4 | ИЛ-6 | ИЛ-8 | ИЛ-10 | ИЛ-12 | ИЛ-18 | ФНО-α | |
СК (%) | 54,5 | 86,4 | 40,9 | 81,8 | 81,8 | 40,9 | 27,3 | 86,4 | 95,5 | 86,4 | 100 | 27,3 |
КП (%) | 72,7 | 77,3 | 36,4 | 50 | 77,3 | 50 | 22,7 | 72,7 | 95,5 | 40,9 | 100 | 27,3 |
Здоровые (%) | 42 | 76 | 34 | 58 | 66 | 54 | 22 | 50 | 88 | 58 | 96 | 22 |
Таблица 3. Изменение продукции итокинов на разных этапах их синтеза.
ЦИТОКИНЫ | |||||||||||||
Диагноз | Метод | Ифн-α | Ифн-β | Ифн-γ | ИЛ-1 | ИЛ-2 | ИЛ-4 | ИЛ-6 | ИЛ-8 | ИЛ-10 | ИЛ-12 | ИЛ-18 | Фно-α |
Саркома Капоши | ОТ-ПЦР (мРНК) | - | - | - | - | - | - | - | ↑ | - | ↑ | - | - |
ИФА (белок) | - | н/и | - | ↑ | ↓ | ↑ | ↑ | ↑ | - | н/и | н/и | - | |
Кожная патология | ОТ-ПЦР (мРНК) | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
ИФА (белок) | - | н/и | - | - | - | ↓ | н/и | - | ↓ | н/и | н/и | - | |
Примечание: «-» - отличие от группы здоровых людей недостоверно; ↑ - повышение частоты экспрессии гена по сравнению со здоровыми людьми; ↓ - снижение частоты экспрессии гена по сравнению со здоровыми людьми; н/и – показатель не исследовался.
Определение продукции ИЛ-2 в сыворотке крови показало достоверно более низкие (р=0,0001) значения у больных СК (МЗ=2,095 пг/мл ), по-сравнению с пациентами с КП (МЗ=9,667 пг/мл ) и здоровыми лицами (МЗ=17,24 пг/мл). Различия в экспрессии гена ИЛ-2, определяемой методом ОТ-ПЦР в МПК, оказались недостоверными (р=0,32). Отмечено, что ИЛ-2 экспрессировался у 18 из 22 больных СК (81,8%), у пациентов с КП – у 17 из,3%), у здоровых лиц – в 33 случаях из%).
Анализ экспрессии гена ИЛ-4 показал достоверное отличие (р=0,0005) между группами: наименьшие значения определялись в группе КП (МЗ=0,0 пг/мл), наибольшие – у пациентов с СК (МЗ=5,24 пг/мл), в группе здоровых лиц МЗ составило 0,98 пг/мл. По частоте выявления мРНК различий меду группами не наблюдалось (р=0,59). У больных СК, КП и здоровых лиц отмечена экспрессия гена ИЛ-4 в 40,9%, 50%, 54% случаев, соответственно.
Исследование уровня синтеза ИЛ-6 проводилось в группах СК и здоровых лиц и показало достоверное (р=,000014) повышение продукции данного цитокина у пациентов с СК (МЗ=10,0 пг/мл) по-сравнению со здоровыми лицами (МЗ=0,0 пг/мл). Различий в частоте экспрессии гена ИЛ-6 не наблюдалось (р=0,88). Показана экспрессия гена ИЛ-6 у 27,3%, 22,7% и 22% больных СК, КП и здоровых лиц, соответственно.
Определение количества ИЛ-8 в сыворотке обследуемых показало достоверное (р=0,021) отличие между группами: отмечались повышенные уровни этого цитокина у больных СК (МЗ=9,52 пг/мл) и КП (МЗ=7,51 пг/мл) по-сравнению со здоровыми людьми (МЗ=5,28). Статистический анализ экспрессии гена ИЛ-8 выявил достоверное (р=0,0077) отличие по частоте выявления мРНК, а именно, усиление частоты определения экспрессии гена ИЛ-8 в группе СК (86,4%) и КП (72,7%) по-сравнению со здоровыми людьми (50%).
Анализ продукции ИЛ-10 в сыворотке крови обследуемых показал достоверные отличия по трем группам (р=0,01). Наименьшие значения наблюдались у больных с СК (МЗ=0,0 пг/мл). Хотя различия между пациентами с СК (МЗ=15,0 пг/мл) и здоровыми лицами (МЗ=14,56 пг/мл) оказались статистически недостоверными (р=1,0), но обращает внимание самый большой диапазон Q3-Q1=26,38 пг/мл в группе СК, по-сравнению с группой КП и здоровыми лицами, где он составил 11,2 пг/мл и 7,045 пг/мл, соответственно. Различий по частоте экспрессии гена ИЛ-10 не было выявлено (р=0,43). В группе больных с СК и КП ИЛ-10 экспрессировался в 95,5% случаев, у здоровых лиц в 88%.
Исследование методом ОТ-ПЦР уровня транскрипции ИЛ-12 показало достоверное (р=0,007) повышение экспрессии гена ИЛ-12 в группе СК (86,3%), по-сравнению с больными с КП (40,9%) и здоровыми лицами (58%).
Анализ продукции ИЛ-18, ФНО-α, ИФН-α, ИФН-γ и экспрессии генов ИЛ-18, ФНО-α, ИФН-α, ИФН-β, ИФН-γ, и маркеров апоптоза Fas, Fas Ligand, Caspasa 8, Caspasa 3, NF-kB не показал статистически значимых различий между группами (р>0,05).
Суммируя данные исследований цитокинового статуса пациентов с СК, можно отметить дисбаланс, заключающийся в преобладании Th-2-типа иммунного ответа (повышение ИЛ-4) в ущерб Th-1 (угнетение продукции ИЛ-2), обеспечивающему антивирусную защиту. Отмечена активация синтеза ИЛ-1β, ИЛ-12, продуцируемых В-лимфоцитами, а также ИЛ-6, участвующего в дифференцировке Th17-лимфоцитов, что может свидетельствоать об усилении воспалительных процессов в организме. Возможно, ВГ-8 способен переключать дифференцировку Т-лимфоцитов в сторону Th-2. Это предположение нуждается в дальнейшем изучении.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
