Руководство по лабораторной диагностике туберкулеза (стр. 4 )

1.2.4. Микроскоп

Для исследования мазков, окрашенных по методу Циля-Нильсена, следует использовать световой бинокулярный микроскоп с объективом (100х) с масляной иммерсией и окуляром (10х) (общее увеличение 1000х).

Для флуоресцентной микроскопии применяются специальные оптические устройства и микроскопы, частью которых является источник ультрафиолетовых лучей (светодиоды (LED), галогеновая или ртутная лампа), система фильтров к нему и специальные объективы.

Обслуживание микроскопа

Ежедневное обслуживание

Современные микроскопы не нуждаются в специальном обслуживании, но при их использовании требуется тщательный уход, регулярная чистка, защита от пыли и грибов.

Каждый день перед использованием следует проверять микроскоп на наличие сломанных или поврежденных частей и убедиться, что линзы, зеркала и другие светопроводящие поверхности чистые.

Проверяют линзы на присутствие грязи или песчинок; они могут легко поцарапаться, если их протирать, не сдув предварительно пыль и песчинки. Сначала сдувают или смахивают кисточкой песчинки с поверхности линзы, затем протирают линзы чистой сухой салфеткой для линз. Если после этого не удается получить ясное изображение, моют линзы салфеткой для линз, смоченной моющей жидкостью, предоставляемой изготовителем, или смесью этилового эфира и спирта в соотношении 80/20, или 70% спиртом.

Лучше не снимать окуляры или объективы, а чистить только их внешние поверхности. Для надлежащей очистки нижних линз конденсор следует снимать. Устанавливая конденсор, следует убедиться, что предметные стекла при перемещении не царапают его верхнюю поверхность, когда конденсор поднят в максимальное положение.

В конце каждого дня удаляют иммерсионное масло с объектива 100x, используя салфетку для линз.

Если микроскоп не хранится в коробке, накрывают его полностью пластиковым чехлом.

Ежемесячное обслуживание

Сначала сдувают или смахивают кисточкой песчинки с линз перед чисткой микроскопа. Затем моют линзы салфеткой для линз, смоченной в чистящей жидкости (не ксилол). Снимают держатель стекол с механического столика и моют его таким же образом. Протирают корпус микроскопа мягкой салфеткой, смоченной водой.

Делают отметку об обслуживании микроскопа в журнале.

Ежеквартальное обслуживание

В условиях повышенной влажности (более 60%) микроскоп может повредить рост грибов, который появляется почти исключительно на призмах в бинокулярной трубке, приводя к мутности и затемнению поля зрения. Следует проверять микроскоп на наличие роста грибов периодически и каждый раз, когда поле зрения становится мутным. Для этого следует включить источник света микроскопа, установить объектив 10x, снять окуляры и посмотреть в бинокулярную трубку.

Удалять рост грибов должен обученный специалист. Бинокулярная трубка должна быть открыта, но призмы должны оставаться на месте, как установлено производителем, поскольку их снятие испортит микроскоп.

Ежегодное обслуживание

Полный осмотр и обслуживание компетентным сервисным инженером.

Обнаружение неисправностей

Можно починить неисправный микроскоп, заменяя сменные части (объективы, окуляры, лампы, предохранители). Если таким образом устранить неисправность не получается, следует привлечь к ремонту компетентного специалиста. Никогда не следует пытаться демонтировать любую часть микроскопа для ремонта.

Регистрируют обнаруженные неисправности и корректирующие действия в журнале.

Важно убедиться, что гнезда окуляров и объективов никогда не остаются открытыми в течение более нескольких минут. Если линза неисправна, закрывают гнездо предоставленной производителем заглушкой или липкой лентой, иначе в него может попасть пыль, что приведет к помутнению остальных объективов.

В таблице 1.1 приводятся часто встречающиеся неисправности световых микроскопов и пути их устранения.

Таблица 1.1 - Неисправности микроскопов и пути их устранения

Проблема	Причина	Пути устранения
Поле зрения слишком тусклое	Слишком низко опущен конденсор	Поднять конденсор
Ирисовая диафрагма конденсора закрыта	Открыть диафрагму
Темные пятна в поле зрения, которые перемещаются при повороте окуляра	Поверхность окуляра поцарапана	Заменить окуляр
Окуляр грязный	Почистить окуляр
При работе с объективом высокого разрешения изображение нечеткое	Предметное стекло расположено мазком вниз	Перевернуть предметное стекло
Пузырек воздуха в иммерсионном масле	Быстро сдвинуть линзу 100х из стороны в сторону
Грязь на объективе	Почистить объектив
Иммерсионное масло слишком вязкое	Использовать более жидкое иммерсионное масло
При работе с объективом низкого разрешения изображение нечеткое	Иммерсионное масло на линзе	Почистить объектив
Слой пыли на верхней поверхности объектива	Почистить объектив

Если поле зрения остается мутным и нечетким, следует рассмотреть следующие возможные причины:

- массивный рост гриба на линзах или призмах из-за хранения в условиях высокой влажности;

- попадание иммерсионного масла между линзами объектива (результат использования низкокачественного масла, например, кедрового, или неправильного употребления ксилола). В этом случае объектив следует заменить;

- повреждение объектива в результате небрежной фокусировки и опускания объектива, грубой смены предметных стекол.

Флуоресцентный микроскоп требует осторожного обращения с точек зрения оптики и механики. Сотрудники лаборатории должны быть знакомы с общими механическими и оптическими принципами его устройства.

При использовании микроскопов, в которых источником УФ лучей является галогеновая или ртутная лампа, следует иметь в виду, что лампы разных производителей имеют различные сроки эксплуатации. Важно проверять срок эксплуатации каждой лампы, чтобы не превышать его, и своевременно заменять лампу. Замена ламп должна проводиться компетентным специалистом.

1.2.5. Автоматический свертыватель

При приготовлении яичных сред используется специальное оборудование, позволяющее точно дозировать количество тепла для обеспечения коагуляции белка.

Аппарат для свертывания питательных сред должен обеспечивать нагревание до температуры 80–85°С и поддержание такой температуры в течение 45 минут. Современные свертыватели имеют автоматическую регулировку температуры и оснащены внутренним вентилятором. Внутренние полки, на которых в наклонном положении размещаются пробирки, должны быть изготовлены из решетчатого материала, чтобы не препятствовать циркуляции горячего воздуха. Свертыватель должен иметь плотно закрывающуюся дверцу, которая обеспечивает поддержание внутри необходимой температуры. В качестве свертывателей возможно использование сухожаровых шкафов с принудительной вентиляцией, а также инсписсаторов.

1.2.6. Весы

Для лабораторий, проводящих бактериологическое исследование на туберкулез, необходимы лабораторные весы (желательно электронные) с точностью взвешивания не менее 0,01 г и возможностью взвешивания не менее 100 г для взвешивания реактивов при приготовлении солевых растворов питательных сред.

Лаборатории, проводящие исследования на лекарственную чувствительность МБТ (лаборатории III уровня), дополнительно должны быть оснащены электронными весами с точностью взвешивания не менее 0,0001 г (аналитического класса точности) для взвешивания химически чистых веществ противотуберкулезных лекарственных средств (ПТЛС).

Весы должны быть установлены на устойчивой горизонтальной поверхности вдали от возможных источников вибрации и движения воздуха. Весы следует оберегать от пыли, загрязнений и влаги, для чего после работы их следует закрывать чехлами. Весы должны проходить ежегодную поверку.

Правила взвешивания:

– взвешивайте навески с учетом чувствительности весов;

– взвешивайте навески на специальном контейнере (на бумаге или фольге);

– для каждого взвешивания используйте индивидуальный контейнер (или отдельный кусочек бумаги, фольги);

– шпатель после взвешивания каждого реагента следует протирать, чтобы не допустить загрязнения реактивов, предпочтительно использовать индивидуальные шпатели для каждого реагента;

– учтите вес контейнера (бумаги для взвешивания) до начала взвешивания вещества;

– обеспечьте полный перенос взвешенного вещества в сосуд для приготовления растворов;

– не переносите вещество из контейнера (бумаги) обратно в банку с веществом. В случае избыточного количества взвешенного вещества сделайте перерасчет объема растворителя.

Обслуживание весов

Ежедневное обслуживание

Взвешивая груз известной массы (калибровочные гири), ежемесячно проверяют его соответствие весу, определяемому по данным взвешивания.

Ежегодное обслуживание

Калибровка весов должна проводиться ежегодно или после любого ремонта или повторного размещения квалифицированным специалистом по обслуживанию.

Ремонт весов должен проводиться квалифицированным специалистом.

1.2.7. Автоматизированная система для детекции микобактерий туберкулеза и определения их лекарственной чувствительности

Лаборатории III уровня оснащаются автоматизированной системой для детекции микобактерий туберкулеза и определения их лекарственной чувствительности, которая позволяет выявлять в клинических образцах большинство штаммов микобактерий туберкулёза в среднем в течение 14 дней и определять лекарственную чувствительность МБТ в течение 4-14 дней.

Применение автоматизированной системы (BАСТЕС MGIT 960) обеспечивает высокую воспроизводимость результатов и позволяет стандартизовать исследования.

Выполнять исследования с использованием автоматизированной системы следует в соответствии с инструкциями производителя.