Руководство по лабораторной диагностике туберкулеза (стр. 1 )

РУКОВОДСТВО

ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ

ТУБЕРКУЛЕЗА

Авторы: , ,

Рецензенты: Г. Шкендерс, С. Хоффнер

МИНСК, 2013

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.. 4

ВВЕДЕНИЕ.. 5

1. ОБОРУДОВАНИЕ ЛАБОРАТОРИИ.. 6

1.1. Общие положения. 6

1.2 Основное лабораторное оборудование. 6

2. БИОЛОГИЧЕСКАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ РАБОТЫ В ЛАБОРАТОРИЯХ, ПРОВОДЯЩИХ ДИАГНОСТИКУ ТУБЕРКУЛЕЗА.. 20

2.1. Общие положения. 20

2.2. Риск инфицирования при выполнении исследований на туберкулез. 20

2.3. Оценка риска. 21

2.4. Классификация лабораторий, проводящих диагностику туберкулеза. 22

2.5. Основные меры биобезопасности в лабораториях с умеренным и высоким риском ТБ.. 25

2.6. Мероприятия, проводимые при авариях во время работы с инфекционным материалом.. 35

2.7. Транспортировка инфекционных и потенциально инфекционных материалов. 37

3. ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ НА ТУБЕРКУЛЕЗ. 38

3.1. Общие положения. 38

3.2. Флаконы для сбора материала. 38

3.3. Виды диагностического материала. 38

3.4. Консервация диагностического материала. 40

3.5. Прием и распаковка диагностического материала. 41

4. МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫХ БАКТЕРИЙ 42

4.1. Общие положения. 42

4.2. Приготовление мазков. 42

4.3. Фиксация мазков. 43

4.4. Окраска мазков по методу Циля-Нильсена. 44

4.5. Окраска мазков флуорохромными красителями. 48

4.6. Внутренний контроль качества микроскопического исследования на КУБ.. 50

5. СТАНДАРТНЫЕ МЕТОДЫ РАЗЖИЖЕНИЯ И ДЕКОНТАМИНАЦИИ.. 53

5.1. Общие положения. 53

5.2. Обработка мокроты.. 54

5.3. Обработка других видов диагностического материала. 56

5.4. Внутренний контроль качества деконтаминации. 58

6. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ... 62

6.1. Общие положения. 62

6.2. Приготовление яичных сред. 62

6.3. Внутренний контроль качества при приготовлении питательных сред. 65

7. ПОСЕВ И ИНКУБАЦИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА, ОЦЕНКА И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ 68

7.1. Общие положения. 68

7.2. Процедура посева. 68

7.3. Инкубация посевов. 68

7.4. Оценка и учет результата посева. 69

7.5. Внутренний контроль качества посева. 70

8. ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ.. 72

8.1. Общие положения. 72

8.2. Характеристика комплекса Mycobaсterium tuberculosis. 72

8.3. Продукция пигмента. 73

8.4. Биохимические методы идентификации микобактерий. 74

8.5. Культуральные методы идентификации микобактерий. 79

8.6. Идентификация микобактерий комплекса M. tuberculosis с использованием культуральных и биохимических методов. 80

8.7. Иммунохроматографическая идентификация комплекса M. tuberculosis. 80

8.8. Молекулярно-генетическая идентификация микобактерий. 82

8.9. Хранение выделенных штаммов микобактерий. 82

9. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА 84

9.1. Общие положения. 84

9.2. Выбор ПТЛС для определения лекарственной чувствительности МБТ.. 85

9.3. Критические концентрации ПТЛС.. 85

9.4. Расчет навески ПТЛС.. 86

9.5. Приготовление рабочих растворов ПТЛС.. 87

9.6. Приготовление и хранение среды Левенштейна-Йенсена с ПТЛС.. 91

9.7. Приготовление суспензии микобактерий, её стандартизация, инокуляция, инкубирование посевов. 91

9.8. Приготовление стандартов мутности по McFarland. 92

9.9. Учет, интерпретация и регистрация результатов. 92

9.10. Внутренний контроль качества при определении лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза. 93

10. АВТОМАТИЗИРОВАННЫЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА, ОСНОВАННЫЕ НА ИСПОЛЬЗОВАНИИ ЖИДКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД.. 94

10.1. Детекция микобактерий. 94

10.2. Внутренний контроль качества питательной среды для детекции микобактерий с использованием автоматизированной системы.. 95

10.3. Определение лекарственной чувствительности микобактерий с использованием автоматизированной системы 95

10.4. Внутренний контроль качества определения лекарственной чувствительности микобактерий с использованием автоматизированной системы.. 99

11. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА.. 101

11.1. Общие положения. 101

11.2. Принцип ПЦР. 101

11.3. Детекция МБТ.. 102

11.4. Определение лекарственной чувствительности МБТ.. 102

11.5. Xpert MTB/RIF. 103

11.6. Алгоритм диагностики лекарственной устойчивости МБТ с использованием молекулярно-генетических методов. 104

12. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА, ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА И ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ ТЕСТИРОВАНИЕ 106

12.1. Общие положения. 106

12.2. Внешняя оценка качества микроскопического исследования на КУБ.. 107

12.3. Внешняя оценка качества культуральных исследований, идентификации микобактерий и детекции МБТ с использованием амплификационных методов. 114

12.4. Внешняя оценка качества тестирования лекарственной чувствительности МБТ.. 114

13. ИНДИКАТОРЫ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ЛАБОРАТОРИЙ, ПРОВОДЯЩИХ ДИАГНОСТИКУ ТУБЕРКУЛЕЗА 116

13.1. Общие положения. 116

13.2. Микроскопическое исследование на КУБ.. 116

13.3. Культуральное исследование на туберкулез. 117

13.4. Основные индикаторы, используемые для выявления существенных проблем в лаборатории. 118

Приложение 1. 120

Формы протоколов для внешней оценки качества микроскопического исследования на КУБ.. 120

Приложение 2. 124

Протокол мониторингового визита в бактериологическую лабораторию.. 124

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

БАЛЖ	–	бронхоальвеолярная лаважная жидкость
БББ	–	бокс биологической безопасности
ВЛО	–	высоко ложноотрицательная ошибка
ВЛП	–	высоко ложноположительная ошибка
ВОК	–	внешняя оценка качества
ДМСО	–	диметилсульфоксид
ДНК	–	дезоксирибонуклеиновая кислота
ИП	–	истинно положительный результат
КУБ	–	кислотоустойчивые бактерии
КОЕ	–	колониеобразующая единица
МБТ	–	микобактерии туберкулеза
МЛУ	–	множественная лекарственная устойчивость
НЕРА	–	High Efficiency Particulate Air - высокоэффективная задержка частиц
НЛО	–	низко ложноотрицательная ошибка
НЛП	–	низко ложноположительная ошибка
НТМ	–	нетуберкулезные микобактерии
ООК	–	ошибка определения количества
ОР	–	объем растворителя
ОСЦ	–	относительная сила центрифугирования
ПК	–	поправочный коэффициент
ПНБ	–	пара-нитробензойная кислота
ПТЛС	–	противотуберкулезное лекарственное средство
ПЦР	–	полимеразная цепная реакция
РРЛ	–	республиканская референс-лаборатория
СИЗ	–	средства индивидуальной защиты
СРЛ	–	супранациональная референс-лаборатория
ТБ	–	туберкулез
ТВИ	–	термовременной индикатор
ТЛЧ	–	тестирование лекарственной чувствительности
УФ	–	ультрафиолет
ШЛУ	–	широкая лекарственная устойчивость
Am	–	амикацин
Cm	–	капреомицин
Cs	–	циклосерин
E	–	этамбутол
Eto	–	этионамид
Fq	–	фторхинолоны
H	–	изониазид
HEPA	–	High Efficiency Particulate Air - высокоэффективная задержка частиц
HD РР	–	полипропилен высокой плотности
Km	–	канамицин
Lfx	–	левофлоксацин
LPA	–	Line Probe Assay, методы, основанные на гибридизации с линейными зондами
MGIT	–	Mycobacteria Growth Indicator Tube
Mfx	–	моксифлоксацин
NALC	–	N-ацетил-l-цистеин
Ofx	–	офлоксацин
PAS	–	ПАСК
Pto	–	протионамид
PZA	–	пиразинамид
R	–	рифампицин
S	–	стрептомицин
ULPA	–	Ultra Low Penetration Air - задержка сверхлегких частиц

ВВЕДЕНИЕ

Эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в Республике Беларусь в последние годы характеризуется нарастанием распространенности туберкулеза с множественной и широкой лекарственной устойчивостью (М/ШЛУ-ТБ), что является серьезной угрозой для борьбы с туберкулезом в связи с трудностями в диагностике и лечении М/ШЛУ-ТБ и высокой стоимостью химиотерапии.