Руководство по лабораторной диагностике туберкулеза (стр. 8 )

Необходимо пользоваться одноразовыми пластиковыми бактериологическими петлями или металлическими лопатками. Желательно иметь в лаборатории количество лопаток, соответствующее среднему количеству исследований за несколько рабочих дней, чтобы использовать индивидуальную лопатку для каждой пробы с последующим её обеззараживанием автоклавированием. Следует работать очень аккуратно, избегая энергичных и резких движений.

При работе с автоматизированной системой перед установкой пробирок в измерительный модуль следует убедиться в том, что пробирки целы, крышки пробирок плотно завинчены. Перед закрыванием измерительного модуля следует убедиться, что пробирки аккуратно и полностью вставлены в измерительные ячейки.

Рабочие поверхности должны быть подвергнуты деконтаминации после любого разлива потенциально инфекционного материала и в конце каждого сеанса работы.

Не следует хранить стекла с мазками мокроты и микропрепаратами МБТ завернутыми в бумагу или в картонных коробках. Контейнеры для хранения предметных стекол должны быть изготовлены из материала, устойчивого к действию дезинфектантов.

Нельзя брать в рот никакие материалы или инструменты, находящиеся в лаборатории. Все этикетки, используемые в лаборатории, должны быть самоклеящимися.

Письменные документы, которые могут выноситься за пределы контаминированной зоны лаборатории, должны быть защищены от контаминации.

Вынос оборудования, лабораторной и хозяйственной посуды, реактивов, инструментов и т. п. из контаминированной зоны лаборатории производят после дезинфекции.

2.5.3. Работа с лабораторным оборудованием

Бокс биологической безопасности

Сотрудники лаборатории должны быть обучены правилам работы в БББ.

Операторам необходимо тщательно следить за поддержанием постоянства поступающего через открытую переднюю часть бокса потока воздуха во время передвижения рук внутрь бокса и из него. БББ можно использовать, только если он находится в исправном состоянии.

Рабочие поверхности, внутренние стенки и внутреннюю поверхность окна БББ нужно обрабатывать дезинфицирующими растворами перед началом и в конце работы или при загрязнении. Перед началом работы контролируют интенсивность потока воздуха в БББ.

При работе в БББ следует использовать средства индивидуальной защиты. Бокс следует включать за 5-15 минут до начала работы, а после окончания работы необходимо оставить его включенным на 15 минут после обработки для удаления контаминированного воздуха.

Следует свести к минимуму перемещения позади оператора.

Передняя заборная решетка БББ класса II не должна перекрываться бумагой, оборудованием или иными предметами. Внутрь БББ никогда не следует помещать документы.

В БББ следует помещать только те материалы и оборудование, которые непосредственно нужны для работы; все запасные материалы и реагенты (например, дополнительное количество питательных сред) следует размещать вне БББ. Лишние предметы, находящиеся в БББ, могут вызывать нарушение правильного тока воздуха, что приведет к появлению турбулентности, перекрестному заражению и вдыханию зараженного аэрозоля лабораторным работником.

Прежде чем внести в БББ какие-либо материалы, следует обработать их наружные поверхности дезинфицирующим раствором.

Все материалы и оборудование, при работе с которым может образовываться аэрозоль (например, вортекс, миксеры, микроцентрифуги), размещают как можно дальше от фронтальной части, но не блокируя заднюю решетку. Все массивные предметы (автоклавируемые контейнеры для слива биоматериала, автоклавируемые пластиковые мешки и др.) располагают с одной стороны от оператора.

Оборудование и материалы размещают таким образом, чтобы предупредить перемещение загрязненного материала над чистым. Для этого рабочую поверхность БББ условно делят на три зоны (слева направо для правшей):

– чистую, где размещают стерильные расходные материалы;

– рабочую, где размещают диагностический материал или культуры микобактерий;

– контаминированную, где размещают контейнеры для отработанной лабораторной посуды (рис. 2.2).

Для исключения перекрестной контаминации чистые материалы всегда следует держать на расстоянии не менее 12 см от места образования аэрозолей.

На рабочую поверхность (но не на переднюю или заднюю решетку) помещают полотенце из абсорбирующего материала (целлюлозные салфетки) и заливают его дезинфектантом. Это упростит обработку БББ и предотвратит разбрызгивание пролитой жидкости и образование аэрозоля. После работы полотенце сворачивают и помещают в пластиковый мешок для последующего автоклавирования.

Перед началом работы после внесения рук в БББ делают небольшую паузу (60 секунд) для удаления контаминирующих микроорганизмов, находящихся внутри БББ на различных поверхностях, а также на руках, и восстановления воздушного потока.

Следует аккуратно проводить все микробиологические манипуляции, чтобы предупредить разбрызгивание материала и образование аэрозолей.

Все манипуляции выполняют на расстоянии по крайней мере 10 см от передней решетки БББ. Во время работы слегка поднимают руки, чтобы воздух из комнаты мог свободно поступать в БББ через переднюю решетку. Руки следует передвигать медленно и перпендикулярно плоскости открытой передней части. Во время работы не следует выбрасывать материалы, требующие дезинфекции, за пределы БББ, располагать контейнер с использованными пипетками за пределами БББ. Подобная практика создает завихрения воздушного потока, подвергает риску инфицирования лаборанта и нарушает стерильность материала, с которым он работает. Количество передвижений через открытую переднюю часть следует свести к минимуму, для чего следует все необходимые предметы разместить в БББ до начала работы.

Не следует держать открытые пробирки или флаконы в вертикальном положении, их следует как можно быстрее закрывать крышками или пробками.

Рисунок 2.2 – Организация рабочей поверхности БББ

Не следует использовать в БББ большое открытое пламя. Это создает турбулентность, которая нарушает приток воздуха в рабочую зону БББ. Для работы в ламинарном шкафу рекомендуется применять специальные бунзеновские горелки с сенсорным или педальным управлением, их использование должно быть кратковременным (до 5-7 сек). Работу в БББ 2 класса можно проводить без использования горелок. Использование спиртовок в БББ запрещено.

Отработанный материал сразу помещают в специальные автоклавируемые мешки или контейнеры, находящиеся внутри БББ, которые следует автоклавировать сразу после завершения работы.

Прежде чем доставать из БББ какие-либо материалы, следует обработать все наружные поверхности дезинфицирующим раствором.

Лампы ультрафиолетового света в БББ не обязательны. Если же они используются, то их следует еженедельно обрабатывать тампоном, смоченным 70% этанолом.

Каждый раз перед заменой фильтра, при ремонте и техобслуживании БББ обязательно дезинфицируют. Для деконтаминации боксов биологической безопасности классов I и II существует специальное оборудование, которое автоматически производит, обеспечивает циркуляцию и нейтрализует газообразный формальдегид.

Деконтаминацию и замену фильтра осуществляет сертифицированный специалист. После замены фильтра проводится тестирование эффективности работы БББ с использованием специального оборудования.

Центрифуга

Во время процесса центрифугирования могут образовываться аэрозоли, поэтому при работе с центрифугой должны строго соблюдаться меры безопасности.

Во время работы центрифуги крышка должна быть плотно закрыта. Рекомендуется использование широкого непористого уплотнителя. Крышка не должна быть открыта, пока ротор полностью не остановился. Следует использовать роторы с защитными крышками для каждого центрифужного стакана. Крышки центрифужных пробирок и стаканов должны быть закрыты до начала центрифугирования. Загрузка и разгрузка центрифужных стаканов проводится только внутри БББ. Микроцентрифуга, используемая для экстракции ДНК, должна иметь ротор с закрывающейся крышкой. Загрузка и разгрузка микроцентрифуги проводится внутри БББ.

Стаканы центрифуги перед началом работы должны быть хорошо уравновешены. Если это не сделано, может возникнуть сильная вибрация, которая приведет к износу опор и разрушению ротора. Если проводится исследование одной пробы, то с диаметрально противоположной стороны ротора должна быть помещена аналогичная центрифужная пробирка с дистиллированной водой или 70% этанолом, имеющая такой же вес. Не следует применять для уравновешивания солевые или гипохлоритные растворы, так как они вызывают коррозию металлов. Недопустимо уравновешивать пробирки, добавляя воду в образцы диагностического материала.

Под воздействием центробежной силы стеклянные пробирки могут разрушаться. При этом происходит разбрызгивание жидкости и образование аэрозоля. Поэтому при обработке потенциально инфекционного материала необходимо использовать пластиковые пробирки с завинчивающимися крышками. При использовании центрифуги 3000g рекомендуется использовать центрифужные пробирки, изготовленные из полипропилена высокой плотности (PP HD). Нельзя центрифугировать или встряхивать открытые пробирки, а также пробирки, закрытые резиновыми, ватно-марлевыми пробками или пробками из прессованной целлюлозы.

После центрифугирования или встряхивания пробирки оставляют внутри БББ до открывания как минимум на 10 минут, чтобы дать возможность образовавшемуся аэрозолю осесть.

После работы поверхности центрифуги, ротор, центрифужные стаканы и адаптеры обрабатывают 70% этанолом или другим дезинфицирующим средством.

2.5.4. Средства индивидуальной защиты

Защитную одежду (рабочий костюм) необходимо носить в течение всего времени работы в лаборатории. Рабочая одежда и обувь должны быть индивидуальными, соответствовать размерам сотрудников. В лаборатории следует носить обувь с закрытым носком.