При помощи IBM-совместимого компьютера и специализированной MS-Windows-cовместимой программы «Aggr» производилась запись кривых, отражающих процесс агрегации, индуцируемый различными лектинами, - агрегатограммы, которые и подвергались последующему анализу.
За начальный уровень агрегации (0%) принималось светопропускание обедненной тромбоцитами плазмы. Калибровка прибора проводилась заново для каждого образца крови.
Специализированная MS-Windows-cовместимая программа «Aggr» (НПФ «Биола», Россия) позволяла определять две группы показателей: а) характеризующие изменение светопропускания ОТП (собственно агрегацию); б) характеризующие изменение среднего размера тромбоцитарных агрегатов.
При объяснении результатов, полученных при анализе агрегатограммы, принимались во внимание их общепринятые трактовки (, , 1998; , , 1999; , , 2000; Kirichuk V., Voskoboy I., 1997).
Методы математического анализа полученных данных
Анализ полученных результатов клинических исследований проводился методами математической статистики с помощью пакета прикладных программ «STATGRAPHICS Plus 5.1.», разработанных Statistical Graphics Corp. в 1994-2001 гг.
Тест Колмогорова-Смирнова и критерий согласия χ2 показали, что все предложенные случайные величины в основном распределены по нормальному закону, с достоверностью не менее 95%. Для данных, закон распределения которых имеет отклонения от нормального, были использованы методы, не чувствительные к виду распределения. При статистической обработке были вычислены основные вероятные характеристики случайных величин (среднее значение, среднее квадратичное отклонение, доверительный интервал), которые, согласно функции распределения погрешностей Стьюдента, имели достоверность не менее 95% (Р-значение ≤ 0,05). Для анализа данных были использованы следующие методы математической статистики: t-критерий Стьюдента, критерий Фишера, метод контрастов множественного сравнения с процедурой H. Schtffe, дисперсионный анализ, множественный пошаговый регрессионный анализ, выборочная регрессия, дискриминантный анализ («STATGRAPHICS Plus 5.1.», 2001).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Особенности состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов практически здоровых людей
Процессы адгезии и агрегации кровяных пластинок определяются функциональным состоянием их рецепторного аппарата – гликопротеиновых рецепторов (, , 1994; и др., 1999; , 1999, 2002, 2004; , 2000; , 2004; Fitzgerald L. А., Phillips D. R., 1987), которое обусловлено биохимическим составом их О - и N-гликанов (, , 2000).
Исследование действия лектинов на тромбоциты показало, что некоторые из них способны индуцировать агрегацию тромбоцитов и секрецию тромбоцитарных гранул, а также агрегацию эритроцитов и нейтрофильных лейкоцитов (, , 2000, 2004). Предполагается, что действие лектинов может моделировать эффекты классических агонистов тромбоцитов, таких как тромбин, АДФ и др. (, , 2000; Ganguly P. et al., 1979; 1980; 1985; Torti et al., 1995). Подобные свойства лектинов позволяют использовать их не только для анализа структуры углеводных цепей тромбоцитарных гликопротеидов, но и для изучения участия этих белков в процессах активации и агрегации тромбоцитов ( и соавт., 1998).
Как видно их данных, представленных в таблицах 1, 2, 3 и на рис.1 фитогемагглютинин Р (РНА-Р), лектин зародышей пшеницы (WGA) и конканавалин А (Con A) в дозе 32 мкг/мл индуцируют агрегацию тромбоцитов практически здоровых людей, о чем свидетельствует наличие в агрегатограмме таких показателей агрегации тромбоцитов, как максимальная степень их агрегации, время достижения максимальной степени агрегации, максимальная скорость агрегации тромбоцитов, время достижения максимальной скорости образования тромбоцитарных агрегатов, причем наибольшее значение эти показатели имеют при использовании в качестве индуктора агрегации фитогемагглютинина Р, меньшее – лектина зародышей пшеницы WGA. Наименьшее значение указанных показателей агрегатограмм наблюдается при использовании как агрегата - конканавалина А [Con A] (рис.1).
|
|
|
|
|
Рис.1. Агрегатограммы здоровых лиц, вызванные лектинами
РНА – Р, WGA, Соn A в дозах 32 мкг/мл
Представленные данные свидетельствуют о том, что процесс агрегации тромбоцитов в основном обеспечивается наличием в их гликопротеиновых рецепторах b-D-галактозы. Меньшее значение в механизме агрегации кровяных пластинок имеет наличие в углеводной детерминанте гликопротеидов тромбоцитов N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. Роль маннозы в N-гликанах тромбоцитов как индуктора их агрегации незначительна. Аналогичные данные получены другими авторами (, , 2000, 2004).
2. Изменения состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов у больных гингивитом
Результаты проведенных нами исследований свидетельствуют о том, что нарушение агрегационной способности тромбоцитов у больных с воспалительными заболеваниями пародонта обусловлены изменением состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок.
Так, в фазе обострения острого катарального локализованного гингивита в гликопротеиновых рецепторах тромбоцитов больных увеличено содержание b-D-галактозы (табл. 1), N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты (табл.2), маннозы (табл.3) по сравнению с данными практически здоровых лиц из группы контроля. Степень возрастания различных углеводных детерминант в гликопротеиновых рецепторах мембран тромбоцитов неодинакова: возрастание агрегационной активности тромбоцитов у данной категории пациентов обусловлено в большей степени за счет увеличения в гликопротеиновых рецепторах N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, меньше – за счет маннозы; в меньшей мере это относится к b-D-галактозе.
В фазе ремиссии острого катарального локализованного гингивита в гликопротеиновых рецепторах тромбоцитов восстанавливается физиологическое содержание b-D-галактозы, N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы, характерного для практически здоровых лиц контрольной группы. Это приводит к нормализации функционального состояния рецепторного аппарата кровяных пластинок и их агрегационной способности (табл. 1, 2, 3).
Таблица 1
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной РНА-Р, у больных острым катаральным локализованным гингивитом (М±m)
Показатели Больные | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 33,5±1,22 | 254,2±11,8 | 28,2±1,19 | 50,8±2,1 |
В фазе обострения (n=22) | 36,7±1,07 Р1<0,05 | 232,6±9,4 Р1<0,05 | 31,8±1,01 Р1<0,05 | 44,4±1,6 Р1<0,05 |
В фазе ремиссии (n=19) | 32,7±1,04 Р1>0,05 Р2<0,02 | 249,9±10,7 Р1>0,05 Р2<0,05 | 27,4±1,31 Р1>0,05 Р2<0,02 | 51,7±1,9 Р1>0,05 Р2<0,01 |
Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными в
фазе обострения.
Таблица 2
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной WGA, у больных острым катаральным локализованным гингивитом (М±m)
Показатели Больные | Максимальная степень агрегации, % | Время достижения максимальной степени агрегации, с | Максимальная скорость агрегации, % мин | Время достижения максимальной скорости агрегации, с |
Контроль (n=30) | 12,26±1,15 | 130,4±11,4 | 7,02±0,65 | 46,6±1,2 |
В фазе обострения (n=22) | 14,98±1,12 Р1<0,05 | 109,0±8,7 Р1<0,05 | 8,47±0,58 Р1<0,02 | 41,7±0,98 Р1<0,01 |
В фазе ремиссии (n=19) | 12,47±1,19 Р1>0,05 Р2<0,05 | 127,7±9,7 Р1>0,05 Р2<0,05 | 6,98±0,72 Р1>0,05 Р2<0,02 | 45,9±1,2 Р1>0,05 Р2<0,02 |
Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными в
фазе обострения.
Таблица 3
Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной ConA, у больных острым катаральным локализованным гингивитом (М±m)
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 |
