Руководство к практическим занятиям по биохимии (стр. 10 )

Цель работы

Определить чистоту коммерческого препарата НАДН(Н+) восстановленного, учитывая, что при хранении восстановленная форма частично превращается в окисленную.

Принцип метода

В основе метода лежит существенное отличие спектров оптического поглощения окисленной и восстановленной форм кофермента. Измеряя в ходе окислительно-восстановительной реакции оптическую плотность при 340 нм можно установить (зная коэффициент молярной экстинкции e и толщину кюветы) количество динуклеотида в пробе, а соответственно и количество прореагировавшего субстрата.

Спектры поглощения окисленной (сплошная линия) и восстановленной (пунктирная линия) форм никотинадениндинуклеотида в концентрации 10-4 М, рН 7,6

В расчетах исходят из величины коэффициента молярной экстинкции НАДН(Н+) при 340 нм в кювете толщиной 1 см e340 = 6220 М-1.см-1, измеряемой на специальных приборах – спектрофотометрах. ФЭК, к сожалению, не позволяет полностью воссоздать условия, необходимые для определения НАДН(Н+) описанным методом, так как не обеспечивает измерения при этой длине волны. Кроме того, студенческий практикум не оснащен кварцевыми кюветами, а стеклянные кюветы имеют значительное оптическое поглощение в ультрафиолетовой области спектра. Поэтому измерения проводят в более длинноволновой области при λ=366 нм, используя другую величину коэффициента молярной экстинкции НАДН(Н+)

(e366 = 3300 М-1.см-1).

Выполение работы

Навеску динатриевой соли НАДН(Н+) (М = 710 г. моль-1) 35,5 мг растворяют в 5 мл Н2О. Исходный раствор разводят в 50 раз (0,06 мл раствора довести в мерной пробирке дистиллированной водой до 3 мл), рассчитывают молярную концентрацию (с) полученного раствора НАДН(Н+) и измеряют оптическую плотность (D) при l=366 нм против дистиллированной воды в кюветах с длиной оптического пути l = 0,5 см.

Необходимо рассчитать чистоту препарата (т. е. содержание НАДН(Н+) в растворе), учитывая, что концентрация чистого вещества в растворе прямо пропорциональна оптической плотности этого раствора, и зная, что e366 = 3300 М-1.см-1.

Расчеты

Оптическая плотность полученного раствора НАДН(Н+) равна Dпракт.. Теоретически оптическая плотность данного раствора должна быть равной Dтеор = e. с. l. Зная коэффициент молярной экстинкции (e) и, зная молярную концентрацию разведенного раствора, находим Dтеор. Тогда чистота препарата Х, пропорциональная отношению величин оптической плотности, равна:

X =

Выводы

Тестовые задания по теме по теме: «Липиды»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1.  Липиды - гидрофильные соединения.

2.  Пальмитиновая и олеиновая жирные кислоты содержат одинаковое число атомов углерода.

3.  Холестериды - это сложные эфиры холестерина и высших жирных кислот.

4.  В состав цереброзидов входит гексоза.

5.  Кардиолипин относится к глицеролипидам.

6.  Липиды в комплексе с белками выполняют транспортную функцию в организме.

7.  Содержит ли арахидоновая кислота четыре двойные связи?

8.  Является ли линоленовая кислота незаменимой для человека?

9.  Содержат ли фосфатидилхолины атом азота?

10. Могут ли липиды выполнять каталитические функции?

11. Являются ли глицерофосфолипиды основными компонентами клеточных мембран?

12. Регулируют ли сфингенины и церамиды рост и дифференцировку клеток?

2) Выбрать один правильный ответ

К глицерофосфолипидам не относятся: 1.  лецитины 2.  плазмалогены 3.  кардиолипины 4.  ганглиозиды 5.  все вышеперечисленные соединения

Незаменимая жирная кислота: 1.  олеопальмитиновая 2.  стеариновая 3.  олеиновая 4.  линолевая 5.  пальмитиновая

3) Найти соответствие

Транспортные формы липидов	% содержание белка
1.  хиломикроны 2.  ЛПОНП 3.  ЛПНП 4.  ЛПВП 5.  аполипопротеины	А. 100 Б. 45 В. 25 Г. 10 Д. 2

3.3. Влияние гормонов на содержание глюкозы в крови

Адреналин опосредованно, через рецепторы, усиливает в клетках печени распад гликогена, замедляя его синтез, в результате чего свободная глюкоза поступает из клеток в кровь. Концентрация глюкозы в крови повышается.

Инсулин в печени оказывает прямо противоположное действие на обмен глюкозы, но в первую очередь, он опосредованно, через рецепторы способствует быстрому поглощению глюкозы из крови жировой тканью и мышцами. Концентрация глюкозы в крови снижается.

Цель работы

Убедиться, что введение гормонов изменяет концентрацию глюкозы в крови животных.

Принцип метода

Моделирование биологического эксперимента с использованием лабораторных животных – кроликов.

Выполнение работы

Оцените свои наклонности и выберите для себя роль “хирурга”, “терапевта” или “аналитика”. Хирурги будут брать кровь из ушной вены кроликов в стерильных условиях. Терапевты – рассчитывать и вводить (стерильно) кроликам под кожу живота гормональные препараты. Аналитики – определять концентрацию глюкозы в крови животных до и после введения гормонов. Оценивать результаты будут все, занося полученные аналитиками экспериментальные данные в таблицу.

Следует отметить, что эксперимент не причиняет вреда кроликам при внимательном выполнении всех описанных ниже манипуляций, однако лучше использовать «виртуального» кролика или ограничиться демонстрацией (моделированием) всех ниже перечисленных процедур.

Двух кроликов (натощак) взвешивают, и пока “хирурги” в стерильных условиях берут кровь (1 каплю) из ушной вены кроликов, “терапевты” рассчитывают дозы гормональных препаратов: 1,5 МЕ инсулина и 0,35 мл 0,1% раствора адреналина на 1 кг массы кроликов. Результаты расчетов записываются на доске и проверяются преподавателем. При необходимости коммерческие препараты гормонов разводят стерильным физиологическим раствором. В это время “аналитики” определяют исходные концентрации глюкозы в крови каждого кролика с помощью глюкометра (см. раздел 4.2.Б), а “терапевты” вводят (в стерильных условиях) под кожу живота рассчитанную дозу инсулина одному кролику и адреналина - другому.

Через 30 минут после введения гормонов вновь берется кровь из другой ушной вены кроликов и повторно определяется концентрация глюкозы. Кролику, которому вводили инсулин, дают пить 40% раствор глюкозы.

	Концентрация глюкозы, ммоль/л
Кролик И (инсулин)	Кролик А (адреналин)
До введения гормонов
Через 30 мин после введения гормонов
Разница

Выводы

Тестовые задания по теме: «Гормоны»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1.  К группе эйкозаноидов относятся: простагландины, простациклины, тромбоксаны и лейкотриены.

2.  Гормоны способны регулировать деятельность отдельных ферментов или ферментных систем.

3.  Биологическая активность гормонов проявляется при очень низких концентрациях в крови.

4.  Альдостерон относится к глюкокортикоидам.

5.  Вазопрессин - гормон передней доли гипофиза.

6.  Тироксин может синтезироваться из тирозина.

7.  Влияет ли деятельность гипофиза на функцию других желез внутренней секреции?

8.  Известны ли гормоны циклопептидной структуры?

9.  Можно ли синтезировать гормоны искусственным путем?

10. Эффективно ли пероральное применение инсулина?

11. Проникает ли адреналин в цитоплазму клеток?

12. Является ли арахидоновая кислота предшественником простагландинов?

13. Либерины и статины регулируют секрецию тропных гормонов гипофиза.

14. цАМФ и цГМФ - вторичные посредники пептидных гормонов.

15. Аденилатциклазная и протеинкиназная системы обеспечивают многократное усиление гормонального сигнала.

16. Фосфодиэстераза расщепляет циклические нуклеотиды.

17. Кальмодулин - это внутриклеточный Са-связывающий белок.

18. Стероидные гормоны проникают через плазматические мембраны и связываются с внутриклеточными рецепторами.

19. Обладают ли производные витамина D гормональной активностью?

20. Изменяет ли инсулин проницаемость клеточных мембран для глюкозы, аминокислот, ионов К+ и Са2+?

21. Связываются ли мембранные G-белки с ГТФ?

22. Эффективно ли применение инсулина как анаболитического средства при истощении организма?

23. Усиливают ли глюкокортикоиды глюконеогенез?

24. Относится ли инозитол-1,4,5-трифосфат к вторичным посредникам?

2) Выбрать один правильный ответ

К гормонам пептидного строения нельзя отнести: 1.  кальцитонин 2.  окситоцин 3.  тиролиберин 4.  прогестерон 5.  глюкагон	В регуляции липидного обмена не участвует: 1.  адреналин 2.  кортикотропин 3.  инсулин 4.  гидрокортизон 5.  вазопрессин
Вторичные посредники гормонального сигнала: 1.  диацилглицеролы 2.  триацилглицеролы 3.  лейкотриены 4.  тромбоксаны 5.  все вышеперечисленные соединения	К стероидным гормонам нельзя отнести: 1.  кортизол 2.  альдостерон 3.  эстрадиол 4.  тестостерон 5.  кортикотропин

3) Найти соответствие, установив последовательность участников передачи гормонального сигнала в клетку