Руководство к практическим занятиям по биохимии (стр. 23 )

Расчет по стандарту мочевины[***]

m(мочевины) = г (за сутки)

Зная массовую долю (w) азота в мочевине, w(N) = = 0,47

(где 60 – относительная молекулярная масса мочевины (Mr); 14 – относительная атомная масса азота), можно рассчитать массу азота мочевины за сутки:

m(N) = m(мочевины) ∙ 0,47 г (за сутки)

Норма: масса азота – 12-17 г/сутки

масса мочевины – 25-35 г/сутки

Выводы

Тестовые задания по теме: «Пути обезвреживания аммиака в организме человека и животных»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1.  Глутаминсинтетаза относится к классу лигаз.

2.  Выведение мочевины с мочой в количестве 20 - 35 мг/сутки является нормой.

3.  Образование карбамоилфосфата в синтезе мочевины требует затраты двух молекул АТФ.

4.  Креатин в норме выводится с мочой.

5.  Аргиназа катализирует образование оксида азота.

6.  Аминогруппа аспартата служит одним из источников азота в молекуле мочевины.

7.  Являются ли аминокислоты единственным источником аммиака в организме?

8.  Может ли азот амидной группы глутамина включаться в молекулу мочевины?

9.  Расходуется ли АТФ в глутаминсинтетазной реакции?

10. Нормально ли для человека выделение 1г креатинина за сутки?

11. Участвует ли метионин в синтезе креатина?

12. Выводится ли ион аммония с мочой?

2) Выбрать один правильный ответ

Аммиак в клетках мозга обезвреживается путем: 1.  синтеза мочевины 2.  образования солей аммония 3.  превращения глутамата в глутамин 4.  синтеза креатина 5.  всеми перечисленными способами

Цикл мочевинообразования происходит в: 1.  почках 2.  печени 3.  надпочечниках 4.  мочевом пузыре 5.  поджелудочной железе

3) Установить соответствие Х (цифра) и Y (буква)

Y
Х	мочевина + орнитин
1. цитруллин 2. аргинин 3. фумарат	А. уреаза Б. аргиназа В. фумараза

6.6. Количественное определение креатинина в моче

Креатинин является одним из конечных продуктов азотистого обмена (5% от общего азота мочи). Он образуется в мышечной ткани из креатинфосфата.

Креатинфосфат ® Креатинин + Фн

В свою очередь креатинфосфат синтезируется из креатина в реакции, катализируемой креатинкиназой (креатинфосфокиназой, КФК) с участием АТФ.

Креатин + АТФ Креатин~Р + АДФ

Эта реакция обратима и образование АТФ в обратной реакции является экстренным механизмом обеспечения энергией для мышечного сокращения.

В норме с мочой выделяется только креатинин. Появление креатина в моче (креатинурия) свидетельствует о заболеваниях печени, почек, сахарном диабете, эндокринных расстройствах (гипертиреоз, аддисонова болезнь, акромегалия и др.), инфекционных заболеваниях. Исключением является появление креатина в моче у подростков и у беременных женщин.

Гиперкреатининурия с одновременной креатинурией имеет место при патологии поперечно-полосатых мышц: миозит, миастения, дистрофия. Гипокреатининурия наблюдается при хроническом нефрите, мышечной атрофии после перенесенных инфекций, в старческом возрасте.

Цель работы

Определить содержание креатинина в суточной моче и сравнить с нормой.

Принцип метода

Метод количественного определения креатинина в моче (по Фолину) основан на цветной реакции с пикриновой кислотой. Интенсивность оранжевой окраски пикрата креатинина, измеряемой на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (540 нм), прямо пропорциональна концентрации креатинина, которую определяют по калибровочному графику.

Выполнение работы

Реактивы, этапы	Опыт	Контроль
NaOH, 10% раствор, мл	1,0	1,0
Пикриновая кислота (насыщ. р-р), мл	1,5	1,5
H2O дистиллированная, мл	—	1,0
Моча, мл	1,0	—
Инкубируют при 20°С 5 минут
Доводят дистиллированной водой до метки в мерной колбе на 50 мл
Перемешивают
Фотометрируют опыт и контроль против воды (l=540 нм, толщина кюветы 1 см). D540
Dоп – Dк

Для построения калибровочного графика используют стандартный раствор дихромата калия (K2Cr2O7).

Опытным путем найдено, что оптическая плотность 0,17 М раствора K2Cr2O7 соответствует оптической плотности продукта, образующегося в результате реакции взаимодействия креатинина (концентрация 2 мг/мл) с пикриновой кислотой в щелочной среде. Поэтому калибровочную кривую легко можно построить, используя дешевый и легко доступный дихромат калия.

Из исходного раствора 0,17 М дихромата калия готовят ряд разведений: в 4 мерные пробирки отбирают соответственно 1, 2, 3 и 5 мл исходного раствора и все пробы доводят водой до конечного объема 5 мл. Определяют оптическую плотность полученных растворов при 540 нм в кювете толщиной 1 см против воды. Из полученных значений оптической плотности калибровочных растворов вычитают Dк, определенную в работе ранее, и на основании полученных результатов строят график зависимости оптической плотности от концентрации креатинина. Для этого на оси абсцисс откладывают количество миллилитров дихромата калия, соответствующие концентрации креатинина (0,4; 0,8; 1,2 и 2 мг/мл, соответственно). На оси ординат – величину оптической плотности (D540 –Dк). Полученную в работе величину (Dоп – Dк) откладывают на графике и находят концентрацию креатинина в моче (С мг/мл). Затем рассчитывают массу креатинина в суточной моче:

m (креатинина) = г/сутки

Норма: у мужчин: 1 - 2 г/сутки (8,8 - 17,6 ммоль/сутки)

у женщин: 0,6 – 1,5 г/сутки (5,3 – 13,2 ммоль/сутки)

Выводы

Тестовые задания по теме: «Особенности обмена отдельных аминокислот»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1.  Глицин участвует в синтезе пуриновых оснований.

2.  В состав КоА входит β-аланин.

3.  Азот гуанидиновой группы аргинина служит источником образования оксида азота.

4.  Монооксигеназы участвуют в образовании катехоламинов.

5.  Триптофан может служить предшественником образования рибонуклеотида никотиновой кислоты (витамина РР).

6.  Серотонин образуется из серина.

7.  Входит ли глутаминовая кислота в состав глутатиона?

8.  Является ли гомогентизиновая кислота промежуточным продуктом превращения фенилаланина?

9.  Возможно ли превращение гистидина в глутаминовую кислоту?

10. Является ли креатинфосфат макроэргическим соединением?

11. Может ли цистеин подвергаться процессу декарбоксилирования?

12. Возможны ли превращения глицина в серин и треонин?

2) Выбрать один правильный ответ

Молекула глицина не участвует в синтезе: 1.  гема 2.  пуриновых оснований 3.  пиримидиновых оснований 4.  парных желчных кислот 5.  креатина

Соединение, которое не образуется из тирозина: 1.  гомогентизиновая кислота 2.  адреналин 3.  норадреналин 4.  дофамин 5.  фенилаланин

3) Установить соответствие Х (цифра) и Y (буква)

Y
Х+ глицин	гуанидинацетат + орнитин
1. лизин 2. аргинин 3. метионин	А. метилтрансфераза Б. глицинамидинотрансфераза В. аланинаминотрансфераза

Тестовые задания по теме: «Регуляция и патология аминокислотного обмена»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1.  Фенилкетонурия возникает в результате врожденного нарушения синтеза фенилаланин-4-монооксигеназы.

2.  Моча с запахом кленового сиропа появляется при нарушении обмена разветвленных аминокислот.

3.  Квашиоркор наблюдается у детей при недостатке в пище белков.

4.  Алкаптонурия - врожденный дефект обмена триптофана.

5.  Фенилкетонурию можно выявить по повышенному содержанию фенилаланина в сыворотке крови.

6.  Квашиоркор сопровождается снижением сопротивляемости организма инфекциям.

7.  Сопровождается ли повышение концентрации аминокислот в крови ацидемией?

8.  Достигает ли положительного эффекта при фенилкетонурии исключение из пищи тирозина?

9.  Используются ли ингибиторы моноаминоксидаз при лечении депрессивных состояний?

10. Связана ли болезнь Хартнупа с нарушением всасывания триптофана?

11. Вызывает ли недостаток витамина В6 нарушения обмена отдельных аминокислот?

12. Может ли недостаток метионина привести к жировому перерождению печени?

2) Выбрать один правильный ответ

Фенилпировиноградная олигофрения развивается в результате врожденного отсутствия фермента класса: 1.  оксидоредуктаз 2.  трансфераз 3.  гидролаз 4.  лиаз 5.  изомераз

Альбинизм связан с нарушением обмена: 1.  метионина 2.  серина 3.  цистеина 4.  тирозина 5.  триптофана

3) Установить соответствие между патологией и АМК, нарушение обмена или всасывания которой в кишечнике имеет место при данной патологии