Гуморальный и секреторный иммунный ответ к Helicobacter pylori у детей с хроническими воспалительными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки (стр. 2 )

Анализ уровня общего IgE, ИЛ-10, антихеликобактерных (IgG-, IgA-, IgM-) антител в сыворотке крови, sIgA в экзосекрете ротовой полости и копрофильтратах, ИЛ-17 в надосадочной жидкости проб фекалий проводили с помощью отечественных коммерческих ИФА-наборов в соответствии с Инструкцией по применению. Титры антихеликобактерных АТ подсчитывали путем перевода в log2.

Анализ количественного содержания IgE-АТ к H. pylori в сыворотке крови и в надосадочной жидкости проб фекалий осуществляли методом ИФА с использованием конъюгата моноклональных анти-IgE-АТ ( - Россия) и сорбированной корпускулярными антигенами H. pylori твердой фазы (ЭКОлаб – Россия). Количественный учет результатов проводили по калибровочной кривой, построенной с использованием IgE-референс реагентов фирмы «Dr. Fooke» (Германия). Выявление IgE-АТ к CagA H.pylori проводили аналогичным методом с использованием твердой фазы, сорбированной рекомбинантным rCagA fr4-антигеном в концентрации 1 мкг/мл.

Содержание CagA H.pylori в надосадочной жидкости проб фекалий определяли методом двухцентрового ИФА, с помощью двух типов моноклональных антител, распознающих разные эпитопы на молекуле CagA H.pylori. Стандартом служил контрольный образец rCagAfr.4 ( c соавт., 2010). Все реагенты и алгоритм исследования любезно предоставлены доктором медицинских наук (Российский научный центр радиологии и хирургических технологий МЗ СР РФ).

Статистическую обработку количественных данных проводили с использованием непараметрических методов статистики при помощи пакета прикладных программ “Statistica 6,0” (StatSoft, USA).

Результаты исследования и их обсуждение

Обследовано 83 ребенка (37 мальчиков и 46 девочек), средний возраст которых составил Ме=14 (12; 16) лет. 69 детей имели хронические воспалительные заболевания желудка и/или ДПК в стадии обострения. 14 практически здоровых детей составили группу контроля.

Эндоскопически у контингента больных выявили: ЯБ ДПК – у 8 человек (12%); эрозии желудка и/или ДПК – у 29 человек (41,6%); хронический (неэрозивный ) гастрит/гастродуоденит – у 32 человек (46,4%).

22 ребенка (32%), помимо гастродуоденальной патологии, имели подтвержденные аллергические заболевания: в фазе обострения – 12 детей, в фазе ремиссии – 10 детей. Аллергопатология была представлена бронхиальной астмой (9 человек), атопическим дерматитом (11 человек), аллергическим риноконъюнктивитом (2 человека). Следует отметить, что в структуре гастродуоденальной патологии у детей с аллергией преобладал ХГ/ХГД (в 91% случаев) и только у 2 детей с атопическим дерматитом при эндоскопии обнаружили ЯБ ДПК и эрозии ДПК.

На основании клинико-анамнестических данных и лабораторно-инструментального обследования сформированы группы детей для исследования (Табл. 1.)

Таблица 1.

Распределение обследуемых детей по группам.

Группы	Число детей	Характер гастродуоденальной и сопутствующей патологии
I	20	ХГ/ХГД + аллергия
II	12	ХГ/ХГД
III	35*	ЯБ ДПК, эрозии желудка/ДПК
IV	14	Практически здоровые дети

*Двое детей, у которых ЯБ и эрозии СО гастродуоденальной зоны сочетались с аллергопатологией, не включены в III группу исследования.

Клиническая картина ХГ/ХГД у детей с аллергией (I группа) характеризовалась слабо выраженной субъективной симптоматикой в 80% случаев и преобладанием диспепсического синдрома над болевым (Рис.1).

Примечание:*р<0,02 по сравнению со II и III группами;

**р<0,01 по сравнению с I и II группами;

***р<0,05 по сравнению с I группой.

Рис.1. Частота встречаемости симптомов гастродуоденального заболевания в обследуемых группах.

У детей с ХГ/ХГД без аллергии (II группа) отмечалось сочетание болевого и диспепсического синдромов при их слабой или умеренной выраженности. В III группе детей с деструктивными изменениями СО превалировал болевой синдром, его выраженность была максимально высокой, что значительно сказывалось на общем самочувствии больных. Кроме того, пациентов этой группы чаще беспокоила изжога. Болезненность при пальпации живота, в эпигастральной и/или пилородуоденальной зоне, была характерна для 100% больных, что облегчало топическую диагностику. Положительный симптом Менделя отмечался у 57% (20) детей III группы.

На рисунке 2 показана частота выявления различных нарушений моторной функции ЖКТ в ходе инструментального обследования больных детей.

Примечание: *р<0,05; **р<0,01.

Рис. 2. Частота встречаемости нарушений моторной функции ЖКТ по данным инструментальных методов исследования.

Дискинезия ЖВП чаще отмечалась у больных без аллергии – во II и III группах. В III группе, кроме того, выявлена самая высокая частота дуодено-гастрального рефлюкса (ДГР).

Инфицирование H. pylori удалось подтвердить у 45% детей I группы, 75% детей II группы, 66% детей III группы.

Следует отметить, что 19% всех больных (13 человек), по данным анамнеза, уже получали антихеликобактерную терапию, причем у пятерых - эрадикацию проводили неоднократно с использованием разных медикаментозных схем. В настоящем исследовании у 10 (77%) из них вновь подтверждено инфицирование Н. pylori, а у 8 (62%) детей выявлены ЯБ/эрозии СО желудка/ДПК. В среднем, от последнего курса эрадикационной терапии до момента наблюдения прошел Ме=1 (0,5; 1,5) год. Таким образом, данный контингент больных можно охарактеризовать как группу лиц с неблагоприятным течением гастродуоденальных заболеваний и низким эффектом от проводимой эрадикационной терапии.

Далее, в рамках поставленных задач, мы определили некоторые показатели иммунного статуса обследуемых лиц. При исследовании содержания общего IgE в сыворотке крови детей (табл.2) выявлен повышенный в сравнении с возрастной нормой его уровень у лиц с аллергопатологией [Ме=189,6 (76,5; 334) МЕ/мл], что в целом подтверждает наличие у них атопической реактивности.

Таблица 2.

Содержание общего IgЕ в сыворотке крови детей.

Показатели	I гр. (n=20)	II гр. (n=12)	III гр. (n=35)	IV гр. (n=14)	P
Концентрация IgЕ, МЕ/мл, Ме (25%;75%)	189,6 (76,5; 334)	28 (0,5; 64)	46,1 (17,3; 104,2)	22,8 (0; 22,6)	P I - II, III, IV <0,01 Р III-IV=0,01
Частота выявления повышенного уровня IgE, %, (абс).	70% (14)	16% (2)	26% (9)	14% (2)	P I - II, III, IV <0,01

У детей без атопии содержание общего IgE в сыворотке крови соответствовало возрастной норме. Однако обратила на себя внимание тенденция более частого выявления (26%) повышенного уровня общего IgЕ в сыворотке крови детей с деструктивным поражением СО гастродуоденальной зоны. При этом уровень общего сывороточного IgЕ у больных III группы был достоверно выше, чем у здоровых лиц. Следует отметить, что повышение концентрации общего IgE в сыворотке крови больных ЯБ при отсутствии признаков аллергического заболевания отмечали и другие авторы ( с соавт., 2004; De Lazzari F. et al,1994). По мнению Saito H. (2009), конститутивное повышение уровня общего IgE в отсутствии симптомов аллергии определяется иммунным отклонением в дифференцировке CD4+Т-лимфоцитов в пользу Тh2/Treg. Количество Treg при ЯБ часто снижено, чем, собственно, и объясняется высокий уровень общего IgE (Atherton J. C. et al, 2009).

Далее в сыворотках крови детей определяли содержание ИЛ-10 – основного фактора роста всех популяций регуляторных Т-клеток. Показано, что Н. pylori опосредованно способствует повышению уровня ИЛ-10 через воздействие на дендритные клетки (Kao J. Y. et al, 2010). Однако роль ИЛ-10, как и самих Treg, при Н.pylori-ассоциированных заболеваниях до сих пор неясна и широко обсуждается в литературе.

Показатели уровня ИЛ-10 в сыворотке крови детей с хроническими воспалительными заболеваниями желудка и ДПК, представлены на рис. 3.

Примечание: *р<0,05.

Рис. 3. Концентрация ИЛ-10 в сыворотке крови больных детей.

Концентрация сывороточного ИЛ-10 у детей с ЯБ и эрозиями СО желудка и ДПК (III группа) оказалась выше, чем у больных ХГ/ХГД как с аллергией (I группа), так и без нее (II группа), и составила [МЕ=17,8 (15,1; 25,1) пг/мл]. При сравнении с нормальными показателями ИЛ-10, составляющими у взрослых 5 (0-31) пг/мл («Вектор-Бест», Россия), мы обнаружили повышение его уровня у 20% детей III группы, в то время как у детей I, II и IV групп исследования показатели ИЛ-10 соответствовали нормальным.

Таким образом, ЯБ и эрозии СО гастродуоденальной зоны сопровождаются повышением уровня ИЛ-10 в сыворотке крови по сравнению с ХГ/ХГД у детей I и II групп. Возможно, усиление синтеза ИЛ-10 является в данном случае компенсаторным механизмом, направленным на подавление избыточных реакций иммунного воспаления в СО желудка и ДПК.

Для характеристики гуморального иммунного ответа к Н. pylori у больных и здоровых детей нами были определены сывороточные антихеликобактерные антитела IgM-, IgА-, IgG - и IgЕ-изотипов.

IgM-АТ к Н.pylori в сыворотке крови обнаружены в единичных случаях у детей II и III групп исследования (у 2 и 4 человек, соответственно), что объясняется быстрым переключением В-лимфоцитов с синтеза антихеликобактерных IgM-АТ в начальной стадии болезни на синтез АТ других изотипов ( с соавт., 2002).