Лекционный курс по частной вирусологии Вирусы вызывающие болезни жвачных и однокопытных (стр. 21 )

Род: Spumavirus. Типовой вид: Chimpanzee foamy virus (CFV) (пенящий вирус шимпанзе).

Характерные особенности. Вирион имеет характерную морфологию, со слабозаметными поверхностными выступами и центральным неплотным ядром. Сборка капсида происходит в цитоплазме, после чего он отпочковывается в эндоплазматическую сеть или через плазматическую мембрану. Для почкования капсида необходим протеин Env. Нет сведений о разрезании в инфекционном вирионе протеина-предшественника Gag до субъединиц MA, CA, NC. Молекулярная масса протеинов: Gag-предшественник ± 74х103; N-концевой продукт разрезания Gag ± 70х103; Pol-предшественник ± 127х103; RT ± 80х103; IN ± 40х103; Env-предшественник ± 130х103; SU ± 80х103; TM ± 48х103; Itas/Bel ± 35х103; Bet (Bel-1/Bel-2 fusion protein) ± 60х103; Env-Bet fusion protein ± 170х103. Размер генома 11,6 kb; расположение генов: gag-pro-pol-env-tas-bet. Tas является ДНК-связывающим протеином с трансактиваторной функцией. Функции другого дополнительного протеина не известны. Размер LTR 1770 нуклеотидов, 1400 нуклеотидов – регион U3, 200 нуклеотидов – R, 150 нуклеотидов – U5. У вирусов КРС и кошек размер соответствует 950-1000 нуклеотидов. Спумавирусы могут использовать два сайта начала транскрипции: R в LTR и внутренний промотор (IP), расположенный выше дополнительных рамок считывания в гене env. Активность обоих промоторо зависит от Tas. Другим важным критерием отличия спумавирусов от представителей других родов семейства Retroviridae – экспрессия протеина Pol со сплайсированной субгеномной мРНК и присутствие в вирионе большого количества обратнотранскрибированной ДНК.

Вирусы распространены повсеместно, экзогенные, найдены у многих млекопитающих. Естественного инфицирования людей не зарегистрировано, отмечались редкие случаи заражения людей от нечеловекообразных обезьян. Есть данные о существовании родственных (но не близких) эндогенных вирусов. Многие изоляты вызывают характерную “пенистую” цитопатологию в культуре клеток. Болезней, ассоциированных со спумавирусной инфекцией, не отмечается. Онкоген-вирусов не обнаружено.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы. Спектр естественных хозяев. Виды (5 видов):

Название вида вируса	Название на русском языке	№ генома	Аббревиатура
Bovine foamy virus	Пенящий вирус КРС	U94514	BFV
Chimpanzee foamy virus Chimpanzee foamy virus human isolate(formerly Human foamy virus, HFV)	Пенящий вирус шимпанзе Пенящий вирус шимпанзе, изолят от человека (ранее наз. Пенящий вирус человека)	U04327 Y07725	CFV CFV/Hu
Feline foamy virus	Пенящий вирус кошек	Y08851	FFV
Simian foamy virus 1	Пенящий вирус обезьян 1	Х54482	SFV-1
Simian foamy virus 3	Пенящий вирус обезьян 3	M74895	SFV-3

ЛЕЙКОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Leukaemia in cattle, Bovine leukosis (англ.); Leukose bovine (франц.)

Лейкоз КРС - хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, основной при­знак которой - злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в результате чего происходит диффузная инфильтрация органов этими клетка­ми или появляются опухоли. Само определение болезни обязывает выдвинуть проблему борьбы с этой инфекцией на первое место И, действительно, после опубликования серий работ о близком генетическом и АГ-родстве ВБЛ с вирусом Т-клеточного лейкоза человека (HTLV-1 и HTLV-2) диагностика и профилактика лейкоза КРС приобретают особую акту­альность. Лейкозы животных диагностируют почти во всех странах мира. Широко распространены в США, ряде стран Европы, Африке и Австралии

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Почти на протяжении века ученые многих стран проводили исследования по изучению этиологии этого заболевания и лишь 1969 г вошел в историю как год открытия ВЛКРС. Вирус является этиологическим агентом бычьего лейкоза и получил название "вирус лейкоза крупного рогатого скота" (ВЛКРС), или Bovine Leukemia virus (BLV). Морфология и химический состав. Зрелые вирионы ВЛКРС содержат центральнорасположенный электронно-плотный нуклеоид, диаметр которого, в зависимости от методов фиксации и обработки препарата, варьирует от 40 до 90 нм/ Центральная часть нуклеоида отделена от внешней вирусной оболочки промежуточным слоем. Гексагональное очертание нуклеоида в ультратонких срезах предполагает икосаэдрическую симметрию. Внешняя ви­русная оболочка представлена 2-контурной мембраной, которая лабильна, из-за чего диа­метр вирионов может сильно варьировать - от 73 до 120 им. На поверхности внешней обо­лочки выявляют шипики (пепломеры) с пуговкообразным утолщением на конце, длиной 8-11 нм, которые состоят из субъединиц, образованных двумя гликозилированными вирусны­ми белками gp51 и gp30, отвечающими за типоспецифичность. Вирионы имеют плавучую плотность в растворе сахарозы и CsCI, равную 1,15-1,18 г/мл и 1,17-1,33 г/мл соответствен­но. Химический состав вирионов. протеины 60%, липиды 35, нуклеиновые кислоты 2,2, уг­леводы 0,5%.

В структуре ВЛКРС обнаружено 6 основных белков с мол. м. от 10 до 51 кД. 4 негликозилированных белка составляют сердцевину вириона. Два крупных белка являются гликопротеинами - один из которых (р51) расположен на поверхности вириона, другой (р30) - трансмембранный белок. ВЛКРС обладает выра­женной антигенной активностью и индуцирует синтез ВНА и КСА. Он агглютинирует эрит­роциты мышей. За инфекционность и ГА активность ответственен gp51. Поли - и монАТ против gp51 обладают ВН-активностью, подавляют синцитий образуюшую активность вируса, препятствуют выходу из клеток и вызывают ли­зис инфицированных клеток в присутствии комплемента. Оболочка ВЛ КРС содержит 2 белка gp60 (гликопротеин поверхности вириона) и (межмембранный белок). Геном вируса может существовать в 2-х формах геномной 1-цепочечной РНК или в ви­де ДНК, синтезированной на геномной РНК как на матрице, и интегрированной в хромосо­му клетки-хозяина в виде провируса. Геномная РНК содержится только в зрелых вирионах. В жизненном цикле вируса геномная РНК функционирует лишь 1 раз, когда служит матри­цей для фермента - обратной транскриптазы при биосинтезе комплементарной ДНК. Весь объем процессов, необходимый для полной репликации вируса, выполняет­ся с участием ДНК-провируса.

Устойчивость. Установлено, что ВЛКРС чувствителен к температурным возденет разрушается при повторных замораживаниях и оттаиваниях и при нагревании до 56°С в течение 15 мин. Пастеризация молока (74°С в течение 16с) разрушает его, и он теряет инфекционность для ягнят. Вирус обнаруживается в молоке после хранения в течение 72 ч. при 1°С, при 10 и 14,5°С его не обнаруживают через 48 и 24 ч соответственно. Полная инактивация вируса в молоке или вируссодержащей жидкости установлена при 50°С в течение 70 С, при 70-74 °С в течение 17 с или при 56-63 °С в течение 5-30 мин. В цельном молоке, хранившемся при 1,1-5,5°С, происходит постепенное снижение титров ВЛКРС в течение 72 ч; при 9,9 и 14,4°С вирус не обнаруживался уже через 48 и 24 ч хранения. В сливках, собранных после отстоя цельного молока, при 1,1°С через 24, 48, 72 ч вирус был выделен только в пробах первых 2-х сроков отстоя. В разбавленном молоке (до 37,5 %) инфекционность сохраняется в течение 12 ч. Если при рН 6,5 вирус сохраняется в молоке в течение 72 ч, то при рН 7,1- только 48 ч. Снижение кислотности молозива до рН 4,5 разрушает вирус в течение 2 ч, особенно при высоких исходных титрах, а в нативном молозиве вирус сохранялся в течение 18 дн. при комнатной температуре. Прямой солнечный свет инактивирует ВЛКРС в течение 4 ч, УФ лучи - в течение 30 мин (120 Вт на расстоянии 1 м ). ВЛКРС полностью теряет активность в р-рах натриевого щелока (0,5° мин, 22°С), этанола (2,0%, 4 ч, 22°С), формальдегида (0,5%, 8 ч, 37°С), фенола (0,5%, 4°С). В жидком азоте лимфоциты, несущие провирусную ДНК, сохраняют инфекционность в течение нескольких лет. Повторное замораживание и оттаивание разрушает клетки и устраняет инфекционность.

Антигенная структура. Электрофорез очищенных вирионов ВЛКРС в SDS - ПА и гельфильтрация в присутствии гидрохлорида гуанидина показывают в составе вирионов 4 главных негликозилированных белка и 2 гликозилированных.

Антигенная вариабельность и родство. В АГ отношении ВЛКРС отличается от из­вестных вирусов типа С. Не выявлено с помощью ИФ и иммунодиффузии АГ родства меж­ду главным внутренним белком ВЛКРС р24 и группоспецифическими АГ вирусов лейкозов мышей и кошек, опухолей молочных желез мышей, вирусов бабуинов, Мезон-Пфайзера, шерстистых обезьян ВЛКРС, являясь экзогенным ретровирусом КРС, отличается от извест­ных ретровирусов по АГ свойствам, морфогенезу, способности индуцировать синцитий в монослойных культурах клеток и по свойствам ревертазы. Кроме того, в отличие от боль­шинства других лейкемогенньгх вирусов, он присутствует у инфицированных животных в непродуктивном состоянии.

Локализация вируса, вирусоносительство, персистенция. ВЛКРС обнаруживается в клетках молозива и молока естественно зараженных животных. Из слюны, носовых истече­нии, мочи и спермы инфицированных животных его выделить не удалось. Эксперименталь­но и спонтанно зараженный до или после рождения теленок остается инфицированным всю жизнь, несмотря на постоянное присутствие ВНА, выявляемых в РДП, РСК и других серо­логических реакциях. Отсутствие экспрессии генома ВЛКРС при наличии транскрип­ционных провирусов в опухолевых клетках дало возможность предположить, что причиной опухолевой трансформации клеток ВЛКРС является нарушение структуры клеточного гено­ма. Неспособность AT элиминировать ВЛКРС объясняется тем, что этот вирус обычно присутствует в инфицированных лимфоцитах в непродуктивном состоянии и защищен от действия AT. Размножение его не является необходимым для распространения в популяции животных. Инфицированные лимфоидные клетки могут передавать вирусный геном потом­ству во время размножения клеток. От клетки вирус может передаваться также без продук­ции вирусных частиц с помощью механизма Cellular Kissing (клеточного прикосновения), как описано относительно герпесвирусной системы.