Лекционный курс по частной вирусологии Вирусы вызывающие болезни жвачных и однокопытных (стр. 25 )

РИД проходит в 0,8-1,0% геле агара, который готовят на трис-НС! или боратном буфе­рах в диапазоне pH 7,2-8,6, содержащим 8-8,5% NaCl. Методика постановки реакции оди­наковая для всех диагностикумов и предусматривает заполнение лунок АГ, антисывороткой и испытуемыми сыворотками по схеме 1:2:4 или 1:3:3. Принято 2 стандарта на диаметр лу­нок и расстояние между ними: 1 вариант в странах ЕЭС, тогда как в США, Канаде и стра­нах СНГ приняты параметры, соответствующие второму варианту.

Параметры лунок, рекомендуемые для постановки РИД

Показатели	1 вар	2 вар
Диаметр центральной лунки для антигена мм	4	7
Диаметр периферических лунок для сыворотки мм	6	7
Расстояние между центральной и периферической лунками мм	3	3

Минимальные необходимые требования, которым должен удовлетворять диагностиче­ский набор, заключаются в следующем: АГ должен содержать оболочечный гликопротеин ВБЛ, стандартизованный по референтной сыворотке -1; референтная сыворотка Е-4, раз­веденная отрицательной сывороткой в соотношении 1:10, должна быть выявлена как поло­жительная без повторной постановки реакции или предварительной концентрации. Референтные сыворотки Е-1 и Е-4 изготовлены в Национальной ветеринарной лаборатории Да­нии (P. O. Box 373, DK-1503 Copengagen) и предназначены для стандартизации всех диагно­стических наборов для постановки РИД и ИФА. Реакцию учитывают через 48 ч и при следующих показаниях контролей: наличие четкой контрольной полосы преципитации между АГ и специфической положительной сывороткой и отсутствие таковой с отрицательной контрольной сывороткой. Животных, сыворотки которых положительно прореагировали в РДП, считают зараженными ВЛКРС.

Описаны модификация метода иммунодиффузии - усиленная танином непрямая двойная иммунодифузия в геле (НИД-Р) и её применение для выявления AT и АГ ВЛКРС. Со­временная диагностика энзоотического лейкоза КРС основана большей частью на тестах иммунодифузии и ELISA. При использовании РИД необходимо придерживаться рекоменда­ций производителя очень дорогого АГ. В целях снижения затрат при сохранении надежно­сти результатов исследователи уменьшили размер отверстий в розетке и слой агара в чашке Петри, сохраняя прежнюю чувствительность теста.

Предложен метод очистки вируса лейкоза КРС в градиенте плотности перколла. Метод рекомендован для получения очищенного вируса и специфического АГ. Показано значительное преимущество РИД при исследовании молозива титр AT был в 8-32 раза выше, чем в пробах сыворотки крови, исследовать необходи­мо первые порции молозива. Титр AT к gp51 и р24 ВЛ КРС сразу после отела был наивысшим – 1:2187- 1:59049 в ИФА и 116-1 512 в РДП. Через 1 сут. титр AT составлял 25% от исходного.

РАЛ. В качестве теста для прижизненной диагностики лейкоза КРС можно использо­вать иммунохимическую реакцию агглютинации с латексом в соответствии с временными методическими рекомендациями Животные, сыворотки крови которых дали положитель­ную реакцию агглютинации с латексом, подлежат тщательному обследованию на лейкоз другими методами. Реакция перспективна для прижизненной диагностики лейкозов Испытание показало в 67% случаев совпадение результатов с гематологиче­скими и около 90% с гистологическими методами диагностики гемобластозов КРС.

ИФ. Менее широко применяют для обнаружения AT в сыворотках крови инфицирован­ных животных. При этом используют в качестве клеток-мишеней перевиваемые культуры, хронически инфицированные ВЛКРС.

РНГА. Является чувствительным методом обнаружения AT в сыворотке крови и моло­ке Рекомендуют использовать при экспертизе и санитарной оценке молока Наибольший процент совпадений гематологических показателей с результатами серологических исследо­ваний был отмечен в РНГА.

ELISA. Широко применяют в США, Бельгии с использованием монАТ для широко­масштабного выявления энзоотического лейкоза в стадах КРС. Чувствительность его выше чем РДП. Метод ELISA при диагностике лейкоза КРС может существенно повысить чувст­вительность серодиагностики по сравнению с РДП Он удобен для систематического кон­троля молока коров благополучных хозяйств. Существующие варианты ИФА включают 5 принципиальных этапов постановки реакции.

Аллергическая реакция. Разработан аллерген для диагностики лейкоза у животных. Для проведения аллергических реакций наиболее подходящее место хвостовая складка у овец и КРС и дорсальная поверхность уха у свиней.

Дифференциальный диагноз. Лейкоз необходимо отличать от актиномикоза, туберку­леза, паратуберкулеза и бруцеллеза. При актиномикозе поражаются, главным образом, лимфоузлы головы и грудной области (подчелюстные, заглоточные, околоушные и др.). Они плотной консистенции, с инкапсулированными абсцессами. В центре актиномикозного ума (гранулемы) гистологически обнаруживают друзы гриба. При туберкулезе чаще пораженш в виде узелков, имеющих специфическое гистологическое строение, находятся в легких, кишечнике. Для паратуберкулеза характерно наличие изменений в кишечнике и брыжееч­ных лимфоузлах. В кишечнике развиваются продуктивное воспаление и очаговые инфильт­раты из эпителиоидных клеток, в результате чего стенка утолщается в 5 и более раз. В лимфоузлах отмечают обширные скопления из эпителиоидных элементов с наличием среди им гистиоцитов и клеток типа Лангерганса. Специфическим методом окраски выявляют бакте­рии паратуберкулеза, локализующиеся в эпителиоидных и гигантских клетках. Бруцеллез диагностируют с помощью РСК, РА.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Проблема специфической профилактики лейкоза КРС не решена, хотя исследования в этой области продолжаются и по сегодняшний день. Против лейкоза КРС получена рекомбинантная вирусвакцина, содержащая генетическую информацию, кодирующую gp51 и gp30 поверхностного АГ. Также показана возможность вакцинации КРС против лейко­за гетерологичными клетками млекопитающих, способными продуцировать оболочечные АГ ВЛКРС и его внутренний белок р24. Опубликованы результаты исследований по получению и использованию рекомбинантных вирусов осповакцины, включающих либо полный ген белка оболочки (env), либо толь­ко фрагмент гена env с последовательностью, кодирующей гликопротеин gp51 env и часть gp30 ВЛКРС. Вакцинация овец рекомбинантными BLV-вакцинами, содержащими полный ген env, защищает овец от инфекции ВЛКРС, свидетельством чего служит отсутствие персистенции высоких титров анти-gp51-AT по сравнению с невакцинированными ВЛ инфициро­ванными животными, ярковыраженная пролиферативная реакция клеток СД-4 вакциниро­ванных овец на специфические синтетические пептиды gp51 ВЛКРС и отсутствие провируса ВЛКРС у вакцинированных животных спустя 4 мес. после заражения диким вирусом.

ВЕТЕРИНАРНО – САНТИТАРНАЯ ОЦЕНКА ПРОДУКЦИИ. При поражении мышц, л/у туши, паренхиматозных органов или при выявлении лейкозных разрастаний на серозных покровах туши её независимо от упитанности и продукты убоя утилизируют. При отсутствии паталогиеских изменений направляют образцы на бактериологическое исследование на сальмонеллёз. В случае обнаружения сальмонелл внутренние органы утилизируют, а тушу направляют на проварку. При отсутствие сальмонелл разрешается перерабатывать на варёные, варёно –копчёные колбасы, консервы или проварку.

ИНФЕКЦИОННАЯ АНЕМИЯ ЛОШАДЕЙ

Anemia infectiosa eqvorum (лат.); Eqvine infectious anemia (англ.);Anemia infectiuse du cheval (франц.)

Инфекционная анемия лошадей (ИНАН, болотная лихорадка) - вирусная болезнь одно­копытных, характеризующаяся поражением кроветворных органов, преимущественно хроническим течением, рецидивирующей лихорадкой (в периоды обост­рения) и анемий. До начала ХХ в. ИНАН регистрировалась во многих странах Европы, а также в США, Японии, Индии в виде эпизоотических вспышек. Наиболее широкое распространение она получила в период мировой войны, сопровождаясь высокой смертностью (до 80%). В по­следнее время по данным МЭБ ИНАН встречается в США, Австралии, Японии, Индии, в Северной и Южной Африки, Европы.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Вирусную природу ИНАН лошадей впервые установили Карре и Балле в 1904-1906 гг.

Морфология и химический состав. Вирус имеет внешний оболочечный гликопротеин gp90 и трансмембранный гликопротеин gp45. В настоящее время консервативные эпитопы белков gp90 и gp45 служат основной целью поисков компонентов вакцины против ИНАН.

Вирус ИНАН имеет конический капсид длиной около 120 нм и шириной 60 и 20 нм со­ответственно на широком и узком конце. В его структуре обнаружено 6 основных бел­ков с мол. м. от 9 до 90 кДи 4 минорных полипептида. В состав наружного слоя оболочки вирионов входит 2 гликопротеина - gp90 и gp45.

Устойчивость. Вирус устойчив к действию трипсина, РНК - и ДНК-азы, чувствите­лен к эфиру; термолабилен, при 60°С теряет вирулентность за 30 мин. Кипячение разрушает его через 1-2 мин, солнечные лучи инактивируют за 1-3 ч При 0°С до -2°С сохраняется до 3-х лет, в глицерине - 7 мес., в моче и навозной жиже - до 2,5 мес., в высушенной крови в комнатных условиях - 7 мес., в стерильной воде - до 160 дн. Инфицированное сено и паст­бища безопасны через 9 мес. после заражения В осенне-зимний период в овсе вирус теряет патогенные свойства только через 8,5 мес. Устойчив к высушиванию и гниению. В лиофилизированном состоянии при комнатной температуре сохраняет вирулентность в течение 7 мес. Замораживание на его активность не влияет. При биотермической обработке навоза ви­рус инактивируется через 30 дн, 2-4%-ный р-р NaOH убивает его за 20 мин, 35%-ный р-р креалина - через 30 мин, 20%-ная хлорно-известковая смесь, содержащая 29,5% активного хлора, обезвреживает вирус в сточных водах за 3 сут. Вирус относительно устойчив к воз­действию химических средств. Глицерин частично инактивирует его в течение 4 нед и пол­ностью - за 7 мес., 2%-ный р-р формалина инактивирует вирус за 5 мин, но через 5 мин можно реактивировать его р-ром аммиака.

Антигенная структура. У вируса ИНАН описаны 3 группы АГ р29, р12 и р14. АГ р29 представляет собой белок, обозначенный как G-AT Он находится внутри вириона, освобо­ждается при обработке вируса эфиром, является общим для всех штаммов вируса ИНАН и обнаруживается в РСК, РДП и РИФ Помимо общего специфического G-AT, вирус содержит поверхностные АГ р12 и р14, различающиеся в опытах перекрестного заражения гомологичными и гетерологичными штаммами. Кроме 2-х негликолизированных вирусных пептидов (р29 и р12), вирионы ИНАН со­держат гликопротеины gp77/79 (основной гликопротеин вириона) и gpl0 AT вирусной обо­лочки gp77/79 ответственен за продукцию ВНА и подвержен АГ-изменчивости под влияни­ем AT. Установлено, что наиболее АГ - активная область белка gp45 (оболочечного гликопротеина) располагается на аминном конце и лежит между гидрофобными доменами слия­ния и трансмембранным доменом. В состав сердцевины вирионов входит 4 негликолизированных белка (р26, р15, р11, р9), однако основная масса состоит из белков р26 и р15. Известно, что штаммы возбудителя ИНАН различаются в 1 РН и перекрестной защиты на лошадях. Установлено, что в процессе инфекции происходят изменения поверхностных АГ вируса, что сопровождается появлением антигенных вариан­тов, т. е. большое разнообразие вариантов вируса ИНАН может генерироваться в организме инфицированных животных. Установлено быстрое появление новых АГ вариантов ви­руса в процессе персистентной инфекции. Существенная изменчивость генов поверхностных гликопротеинов gp20 и gp45 в процессе инфекции у одного и того же животного выявляется с помощью монАТ.