Лекционный курс по частной вирусологии Вирусы вызывающие болезни жвачных и однокопытных (стр. 7 )

Предложен непрямой метод IgM-ELISA для определения недавней инфекции ИРТ. Ран­ние AT IgM выделены на 6-й да после заражения, к 9-му да происходил рост титра AT Ig, a к 13-му да - ВНА. У телят, привитых инактивированной вакциной, раннего иммунного от­вета не происходило - AT IgM не выявлялись, a IgM и ВНА появлялись позже, чем после заражения. Однако при этом следует иметь в виду, что наличие в сыворотке КРС ревматоидного фактора может привести к ложноположительньш результатам диагностики в IgM-ELISA. В этом случае предварительная обработка проб сыворотки антибычьими IgM позво­ляет избежать ложноположительных результатов. Тест IgM-ELISA имеет большую ценность в диагностике ИРГ. В группе позитивных сывороточных проб корреляция между ELISA и РИГА составляла 98,3%, a ELISA с ИФ - 95,7% .

ELISA с использованием монАТ. Основан на конкуренции между AT сыворотки кро­ви КРС и нейтрализующими мышиными монАТ. Для его проведения лунки микротитрационных панелей обрабатывают очищенным вирусом ИРГ, и после высушивания их можно использовать немедленно или хранить при - 20°С. В обработанные вирусом лунки панелей последовательно вносят неразведенную испытуемую сыворотку, специфические к вирусу ИРГ монАТ, конъюгированные пероксидазой, субстрат пероксидазы. Результаты реакции учитывают в спектрофотометре при А405. В случае положительной реакции связывание монАТ ингибируется AT сыворотки крови. Метод оказался намного чувствительнее и специ­фичнее РН.

Аллергическая проба. Установлено, что при экспериментальном заражении наступает аллергизация организма, проявляющаяся положительной кожной аллергической реакцией уже на 7-й день после заражения, а при вакцинации живой вакциной это происходит через 2 нед после вакцинации, при естественном заражении (спонтанные аборты) аллергизация также наступает быстрее. В Болгарии и ФРГ применяют кожно-аллергическую реакцию для выявления переболевших и вакцинированных животных.

С целью унификации методов дифференциальной диагностики болезней, проявляющих­ся с везикулярным синдромом, получены высокоактивные препараты для идентификации возбудителей ИРТ и ВД КРС. Использование этих праймеров при вирусологической экспер­тизе патологических материалов оказалось особенно полезным при смешанном течении ящура и указанных болезней. Применение ранее разработанных для диагностики ящура ме­тодов изготовления специфических АГ и антительных препаратов дает возможность изго­товления аналогичных по качеству диагностикумов при идентификации вирусов ИРТ и ВД и унификации для схемы дифференциальной диагностики основных болезней, протекающих с везикулярным синдромом.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦЕФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА.

Переболевание сопровождается стойким и длительным иммунитетом, который может передаваться потомству с AT молозива. Иммунитет у переболевших животных длится не менее 1,5-2 лет, однако у животных-реконвалесцентов, имеющих AT, состояние абсолютной иммунности бывает редко, и их следует рассматривать как потенциальный источник инфи-цирования других животных. Даже выраженный гуморальный иммунитет не предотвращает персистенции вируса. В случае реинфекции вновь происходит размножение и выделение ви­руса, хотя болезнь протекает без видимых клинических признаков. При возникновении по­вторного заболевания трудно бывает отличить реинфекцию от реактивации персистирующего вируса. Поэтому всех животных, имеющих AT к ИРТ, следует считать носителями виру­са, находящегося в состоянии латенции.

Слизистые оболочки респираторного и генитального трактов больных животных проду­цируют IgA и интерферон. AT в сочетании с комплементом ограничивают, но не исключают распространения вируса ИРТ в организме. В подавлении инфекции клеточный иммунитет при ИРТ более эффективный, чем гуморальный и в основном связан с Т-лимфоцитами и макрофагами. Инактивация ТК-гена снижает способность вируса (1-го типа) вызывать аборты у привитого КРС.

Живые вакцины. Живые вакцины при ИРТ отличаются большим разнообразием Только в США применяют 14 вариантов живых вакцин. Большинство из них - штаммы вируса, аттенуированные длительным пассированием в первичных культурах и перевивае­мых линиях клеток. В Бельгии и Японии применяют ts-мутанты. Живые вакцины при ин-траназально-внутримышечном применении обусловливают хороший локальный иммунитет и защиту животных от клинического проявления инфекции. При вакцинации живыми вак­цинами необходимо использовать такие штаммы, которые не способны к персистенции, ибо не исключается возможность возникновения рекомбинантных вариантов при взаимодейст­вии аттенуированного и вирулентного штаммов вируса. В качестве живой вакцины предло­жен дефектный по ТК иммуногенный мутант, способный персистировать в организме при­витых телят не менее 3-х мес и передаваться телятам без перехода в ТК-генотип.

В РФ и странах СНГ для профилактики ИРТ применяют живую вакцину ТК-А (ВИЭВ) Её вводят подкожно в дозе 2-105 ТЦЦзо/мл. Иммунитет у привитых животных наступает на 5-7-й день после вакцинации и сохраняется не менее одного года. Широко применяют также живую бивалентную вакцину "Бивак", содержащую 2 вакцинных штамма: ПГ-3 и ИРТ Вакцина "Бивак" производится биофабрикой, она безвредна, иммуногенна.

Персистенция и экскреция аттенуированного штамма вируса обнаружены также при применении других живых вакцин. Особенно часто и длительно вакцинный штамм вируса ИРТ выделяется со спермой привитых быков. Введение живой вакцины во время эстрального периода может сопровождаться поражением яичников, а вакцинация в ранний период стельности прерыванием беременности.

Считается, что интраназальная вакцинация более эффективна, чем подкожная или внут­римышечная. При этом введении вакцинный вирус быстро - в клетки верхних дыхательных путей и глоточного кольца и усиливается синтез IgA и локальное образование интерферона., а при генитальном введении проникает в эпители­альные клетки влагалища или препуция. Размножаясь в указанных клетках, вирус может выделяться во внешнюю среду в течение 2-х нед.

Патентуется живая поливалентная вирус-вакцина из 5 типов аттенуированных вирусов наиболее широко распространенных в Японии и других странах: вирус ИРТ, ВД-БС, ПГ-3, PC-вирус и бычий аденовирус 7-го типа. Все компоненты приготовлены в клеточных куль­турах. Поливалентность препарата усиливает эффективность вакцинации КРС.

Рекомбинантные вакцины. В ген gill аттенуированного вакцинного штамма ИРТ (NY) dltk была встроена мономерная вставка эпигонов белка Р1 вируса яшура. Полученная модифицированная живая вакцина защищала телят от ИРГ и ящура. Получен также рекомбинант вируса ИРТ, экспрессирующий димерную вставку эпитопов виру­са ящура. Возможно получение рекомбинантов с 3-валентными вставками эпитопов вируса яшура серотипов О, А и С. Получена генно-инженерная вакцина из мутанта вируса ИРТ. Инактивированные вакцины. По степени разрушения АГ детерминант инактиванты располагаются следующим образом: Уф облучение, нагревание (56°С), р-пропилактон, формальдегид и димерэтиленинин. В РФ применяется инактивированная димерэтилениминовая вакцина из эпизоотического шт. 4016, в которой в качестве адъюванта используется аэросил. В Чехословакии используется формолвакцина с масляным адъювантом. Препарат применяется двукратно в дозе 2 мл с 4-нед ин­тервалом. У вакцинированных животных формируются гуморальные (1:128 - 1:256) и сек­реторные (1:2-1:8) AT. Наблюдалась корреляция между уровнем сывороточных AT и устой­чивостью телят к заражению. Однако вакцинация серонегативных телят не предупреждала у них постинфекционной латенции вируса, но препятствовала ей у ранее перенесших спон­танную инфекцию. Колостральный иммунитет длился 4-5 мес. Вакцинация телят инду­цировала сероконверсию лишь тогда, когда уровень материнских AT у них был очень низ­ким. Применение инактивированной вакцины против ИРГ среди 100% серопозитивных коров способствовало снижению числа случаев патологических состояний, ассоциирован­ных с инфекцией этим вирусом. Отмечено также и улучшение некоторых показателей вос­производства: повышение процента рождаемости, снижение количества случек, необходи­мых для оплодотворения, уменьшение числа спонтанных абортов. Уже после однократной вакцинации у коров и стельных нетелей обнаружено повышение титра AT к ИРТ (6-9 log независимо от тира AT до вакцинации). Инактивированные вакцины, как и живые, при­меняют двукратно с 2-3-нед интервалом. Эффективность инактивированных вакцин против ИРТ зависит от концентрации АГ и природы адъюванта. Для оценки иммуногенности вакцины против ИРТ можно использовать кроликов в качестве лабораторной модели. По титрам накопления ВНА у привитых внутримышечно кроликов судят о качестве вакцины. Высокоиммуногенна инактивированная вакцина против ИРТ с двухкомпонентным масляным адъювантом ВНИЯИ и ГОА-сапониновым адъювантом.

Субъединичные вакцины. Показано минимальное размножение вируса ИРТ в орга­низме животных, иммунизированных гликопротеином gIV, который может быть использо­ван в качестве субъединичной вакцины в сочетании со свободным от вируса лизатом инфи­цированных клеток. Субъединичную вакцину готовили в виде иммуностимулирующего комплекса (ИСКОМ) из вирулентного штамма вируса герпеса типа 4 КРС. Очищенный ви­рус обрабатывали 1%-ным l-o-h-октил-глюкопиранозидом в течение нескольких часов при 4°С, затем центрифугировали в ступенчатом градиенте сахарозы. После диализа осадок рас­творяли в фосфатном буфере. Препарат в дозе 50 и 100 мкг вирусных компонентов дважды вводили внутримышечно 4-мес телятам с интервалом в 4 нед. Через 2 нед после второй вак­цинации животных заражали интраназально вирулентным вирусом ИРТ. Все животные, иммунизированные ИСКОМ вакциной не заболели, вирус в носовом секрете не обнаружи­вался, титр ВНА составлял 1:3500 и выше. У телят, иммунизированных коммерческой вак­циной, наблюдали подъём температуры и наличие вируса в носовом секрете. При испы­тании на телятах не было выявлено корреляции между титром сывороточных ВНА и устой­чивостью к заражению.

Запатентован метод получения субъединичной вакцины на основе полипегггидов герпесвируса КРС 1-го типа. В качестве кандидата в вакцину использо­вали мажорный гликопротеин gIV вируса ИРТ КРС. Опытных животных вакцинировали дважды с 3 нед интервалом. Препарат индуцировал ВНА в сыворотке крови и в слизистой носовых путей. Иммунизация приводила к предупреждению развития клинических призна­ков заболевания при экспериментальном заражении разрешающей дозой вируса. Сравнение иммуногенности субъединичной и инактивированной вакцины с масляным адъювантом дало сходные результаты. Титр гуморальных AT у КРС после 1- и 2 кратного применения субъединичной вакцины был выше, чем при прививке инактивированной вак­циной. Секреторные AT формировались лишь после 2 кратной вакцинации и были равно­значными у животных, привитых обоими препаратами. В ФРГ имеется хороший опыт сочетанного применения живой и инактивированной вакцины против ИРГ. Живую вакцину вво­дили двукратно с интервалом в 6 нед сразу после установления диагноза. Спустя 7 мес 2 кратно с тем же интервалом вводили инактивированную вакцину. В результате такой вак-цинопрофилактики новых случаев заболевания не регистрировали. Спустя 4 г. после пре­кращения вакцинации животные оказались серонегативными. Авторы оценили предло­женную ими схему применения живой и инактивированной вакцин как эффективную для оздоровления поголовья от ИРТ.