Лекционный курс по частной вирусологии Вирусы вызывающие болезни жвачных и однокопытных (стр. 28 )

Гистологические исследования. Приготовленные срезы органов окрашивают гематоксилин-эозином общепринятым методом. Срезы для исследования на гемосидерин окраши­вают по Перлсу. Характер и степень изменений зависят от стадии болезни, количества ре­цидивов, ремиссий и их продолжительности. Наиболее характерные изменения выражены в печени и селезенке. При остром течении болезни в капиллярах печени - скопление гистио­цитов, макрофагов и лимфоидных клеток. В макрофагах и клетках Купфера – гемосидерин. Печеночные клетки в состоянии жировой или зернистой дистрофии. В селезенке красная пульпа переполнена кровью, количество гемосидерина резко снижено или, наоборот, крове­наполнение слабое, а фолликулы гиперплазированы, количество гемосидерина в норме или несколько выше. В почках и сердце - гиперемия, кровоизлияния, серозный отек интерстиция, слабые пролифераты гистиоцитарных лимфоидных клеток, жировая или зернистая дис­трофия, иногда небольшие отложения гемосидерина в эндотелиальных клетках и гистиоцитах. Лимфоузлы гиперемированы, с кровоизлияниями. Под плеврой - кровоизлияния.

Гематологические исследования. Включают определение количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, СОЭ, лейкоцитарной формулы У больных животных отмечается лимфоцитоз, особенно при подостром и хроническом течениях болезни СОЭ резко увели­чена, особенно в первые 15 мин (60-70 делений). Исследование крови проводят через каж­дые 3 дн. во время приступов лихорадки и не реже 1 раза в 10 дн. в период ремиссий. Коли­чество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева (или в электронном счет­чике) по общепринятой методике. Гемоглобин определяют по общепринятому методу гемометром Сали, полученный результат выражают в процентах. При анализе лейкоцитарной формулы следует учитывать, что у здоровых жеребят в возрасте до 4-6 мес. может иногда наблюдаться повышенный процент лимфоцитов (до 60 %). В начале болезни при первом подъеме температуры резкие отклонения от нормы количества эритроцитов и процента гемоглобина, как правило, отсутствуют. У хронически больных ИНАН животных эти показатели восстанавливаются до нормы, а СОЭ остается повышенной. В качестве дополнительных методов диагностики ИНАН используют исследование костномозгового пунктата в динамике болезни - наиболее характерные изменения появляются во время лихо­радки резко уменьшается количество клеток эритробластической группы и увеличивается количество клеток гистиоцитарно-моноцитарной группы. Во время длительных ремиссий при хроническом течении болезни состояние клеток костного мозга не отличается от таково­го у здоровых лошадей.

Показатели крови здоровых и больных лошадей

Вид исследований	Здоровые лошади нормаль­ной упитанности	Больные ИНАН
Эритроциты, млн/мм3	5-9	4,5 и ниже
Гемоглобин, г%	7,6	5,0 и ниже
СОЭ, делений за 1 ч	45-60	66 и более
Лейкоциты, тыс/мм3	7-10	Без изменений
Лимфоциты, %	25-35	60-75

Определяют количество сидероцитов в периферической крови, которое увеличивается с приступами лихорадки в течение 3-4 дн. и часто продолжает нарастать после снижения температуры тела. При рецидивах количество сидероцитов достигает 2 тыс. и более на 10 тыс. лейкоцитов в 1 мм3 крови, у лошадей с незначительной реакцией повышение числа си­дероцитов иногда является единственным ранним показателем заболевания ИНАН. Опреде­ляют количества гамма-глобулина в сыворотке крови, содержание которого у больных ло­шадей резко возрастает, а отношение между альбуминовой и глобулиновой фракциями по­нижается. Делают биопсию - прижизненное извлечение кусочков печени с последующим гистологическим исследованием.

ИФ. В 1970 г. японские исследователи разработали метод непрямой ИФ для идентифи­кации вируса ИНАН лошадей в культурах лейкоцитов лошади. Для этого используют цель­ную сыворотку крови лошади или очищенную фракцию иммуноглобулинов Метод эффек­тивен только при высокой концентрации вируса. С его помощью можно проследить дина­мику репродукции вируса в инфицированной клетке.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика

РДП. Реакция нашла широкое применение в бывшем СССР. Она выявляет AT к вирусу в сыворотке крови при остром, хроническом и латентном течении инфекции. Помимо селе­зенки от больных животных в качестве АГ можно использовать вирус ИНАН, культивируе­мый в культуре лейкоцитов лошадей и инактивированный твином-80 и эфиром. В СНГ да РДП биопромышленность выпускает диагностикум.

РСК. Одна из первых серологических реакций, предложенных для диагностики ИНАЯ Японскими исследователями показано, что вирус, полученный в культуре лейкоцитов, мож­но использовать в качестве АГ в РСК с сыворотками больных ИНАН лошадей КСА появ­лялись у 79,1% экспериментально зараженных лошадей через 17-40 дн. после введения им вируса, у 78,2% - через 7-20 дн. после появления первой температурной реакции, у некото­рых больных лошадей титр AT возрастал непосредственно перед температурной реакцией или сразу после нее AT в крови больных лошадей обнаруживали от 2 до 60 дн. Вторично 1 крови больных они не выявлялись.

РТГА. В отличие от РДП РТГА - более простой метод количественного определения AT к вирусу ИНАН. Авторы обнаруживали анти-ГА в крови жеребят одновременно с AT, выяв­ляемыми в РДП. РТГА проводили в объеме 0,1 мл с 0,2%-ной взвесью эритроцитов морской свинки и 4 ГАЕ вируса. Перед постановкой ее сыворотки прогревают и адсорбируют активированным углем. В качестве АГ служит концентрированная вируссодержащая культуральная жидкость. Для культивирования вируса используют субкультуру кожно-мышечной ткани эмбриона лошади.

НИФ. Установлена возможность использовать ее для определения AT к вирусу ИНАН 5-го дня после заражения монослоя дермальных клеток очаги концентрации АГ в виде ярких пятен флюоресценции располагались внутри цитоплазмы в околоядерной области и мели диаметр 0,5-3 мкм. Тест ИФ выявляет более низкие уровни AT, чем РДП.

ELISA. Разработан ELISA с очищенным вирусньм протеином Р26 в качестве АГ с онъюгатом, реагирующим с IgG лошадей Источником вируса служит сокультура перевиваемой линии дермальных клеток лошади, персистентно инфицированная вирусом, и клеток почки эмбриона лошади. Обработка АГ в аффинной хроматографии позволяет освободиться от появления неспецифических линий преципитации в РДП и повышает специфичность. Сказался более чувствительным и эффективным по сравнению с РСК и РДП Титр AT, выявляемый методом, был в 1-2 тыс раз выше, чем в РДП, и в 4 раза выше, чем в РСК. Наибольшая корреляция между 2-мя тестами отмечена на 21-й день и позднее после поражения AT в ELISA удается обнаружить через 1-4 г после заражения. Метод предложено использовать и для определения вирусного АГ, а также для оценки качества вакцин. С 1983 г. в США диагностика ИНАН осуществляется конкурентным ИФА.

Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза на ИНАН следует исключить пироплазмоз, нутталиоз, трипаносомоз, лептоспироз, грипп, ринопневмонию. Для пироплазмоза характерна сезонность: апрель-май или август-сентябрь. Болезнь протекает остро, при исследовании крови обнару­живают пироплазмы. При нутталиозе максимум больных выявляют в июне. Болезнь проте­кает остро и подостро. В крови находят нутталии. У лошадей, больных гемоспоридиозами, наблюдается резкая желтушность слизистых оболочек, имеющая стойкий характер, при ЖАН она отсутствует. При гемоспоридиозах с первых же дней наблюдается резкое учаще­ние дыхания - одышка (отек легких), у больных ИНАН со стороны органов дыхания, как правило, особых отклонений от нормы нет Наконец, при гемоспоридиозах у жеребят бо­лезнь протекает латентно, а при ИНАН - тяжело, сопровождаясь высокой смертностью. Леп­тоспироз исключается на основании исследования сывороток крови больных по реакции микроагглютинации и лизиса, отсутствия лейкоцитоза и наличию лептоспир в моче Болез­ни вирусной этиологии (грипп, ринопневмония) отличаются от ИНАН высокой контагиозностыо, быстрым распространением, коротким течением При диагностике этих болезней применяют лабораторные методы выделение вируса на КЭ и культурах клеток и дальнейшая их идентификация в серологических реакциях. Характерным симптомом гриппа лоша­дей является сухой резкий кашель, вирус ринопневмонии вызывает у жеребых кобыл абор­ты во второй половине жеребости Однако отличием абортов, вызванных вирусом риноп­невмонии, является отсутствие повышения температуры тела в день аборта и после него. Аборты, причиной которых служит ИНАН, происходят во время лихорадки или выражен­ной анемии и истощения.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Иммунитет изучен недостаточно Долгое время затяжной характер течения ИНАН и длительное переживание (персистенция) возбудителя в организме животных объясняли на­рушением или снижением иммунной реакции организма на вирус. И лишь исследованиями последних 2-х десятилетий были обнаружены в сыворотке крови больных лошадей КСА, ПА, ВНА и ИФ AT. AT выявляют в период между 14-120-м дн. по­сле заражения, а иногда и на протяжении всей жизни животного. Однако связь между AT и степенью невосприимчивости лошадей к вирусу выяснена недостаточно. Так, образующиеся ВНА не способны предотвратить рецидивы болезни или нейтрализовать вирус. Последние, покрывая эритроциты, способствуют их быстрому разрушению, вызывая анемию. Установ­лено, что 99% инфекционного вируса ИНАН, циркулирующего в крови, связано с AT в виде комплексов "АГ-АТ". Недавно японские исследователи, изучая действие иммунодепрессантов на лошадей, зараженных вирусом ИНАН, пришли к выводу, что иммунитет при этой болезни обусловлен функцией лимфоцитов. Показано также, что вирус ИНАН в процессе длительного персистирования в организме лошади значительно изменяет свои биологические свойства, что ставит под сомнение возможность эффективной вакцинации против этой болезни. В последнее время ведут интенсивные исследования по созданию вакцинных препаратов.

Ветеринарно – санитарная оценка – больных и подозрительных по данному заболеванию на убой на пищевые цели не допускается.

СОДЕРЖАНИЕ

Семейства: Herpesviridae…………………………………….3

Flaviviridae……………………………….……..24

Retroviridae……………………………………..53

Список рекомендуемой для студентов монографической литературы по теме лекций.

1.  , , Семенихин с микробиологией. М. Колос. 1997.

2.  Частная эпизоотология. Под редакцией . М. ОГИЗ. 1948.

3.  астная патология и терапия домашних животных. М. ГИСЛ.1961.

4.  , Гайдамович и частная вирусология. М. Медицина.1982.

5.  , Васильев и номенклатура вирусов позвоночных. УГСХА. Ульяновск 2002.

6.  и др. Общая вирусология. М. Мир. 1981.

7.  Методы вирусологии и молекулярной биологии. М. Мир. 1972.

8.  Малоизвестные заразные болезни животных. М. Колос 1973.

9.  Николау. Ш.С. и др. Элементы общей инфрамикробиологии. Бухарест 1965.

10.  Эпизоотология. Под ред. 1984.

11.  Фомина. Н. Диагностика вирусных болезней животных. М. Агропромиздат 1991.

12.  Самуйленко А и др. Вирусные болезни животных. М. ВНИТИБП.1998.

13.  ирусные и бактериальные болезни у обезьян. Калуга. Контур.1998.

14.  и др. Биология вирусов животных. М. Мир.1977.

15.  Ющюк. Н., екции по инфекционным болезням. М. ВУНМЦ. 1999.

«Курс лекций по частной вирусологии»

Часть первая Б– «Вирусы вызывающие болезни жвачных и однокопытных»

учебное пособие

подготовлено - ,