Определение маркеров аутоиммунных заболеваний (по данным иммунологической лаборатории ККБ№1) (стр. 2 )

Пусковые механизмы возникновения аутоиммунных заболеваний остаются еще до конца непонятными. В качестве причин называют иммунологические, генетические, вирусные, лекарственные и гормональные факторы, действующие по одиночке или в комбинации  [Потехин, Малышев, 2000].

Вирусные инфекции – первый из известных факторов, связанных с возникновением аутоиммунных заболеваний. В некоторых случаях иммунный ответ на вирусные инфекции может приводить к нарушению самотолерантности и появлению антител к собственным антигенам [Virus infection, antiviral..., 2013].

Признаки аутоиммунных процессов выявляются при злокачественных новообразованиях, первичных иммунодефицитах, ВИЧ-инфекции, при длительном применении некоторых иммуноактивных лекарственных средств, иногда при введении вакцин и сывороток [Змушко, Белозёров, Митин, 2001].

В развитии аутоиммунных заболеваний играют роль наследственная предрасположенность, неблагоприятное действие факторов окружающей среды, нарушения иммунитета [Адельман, 1998].

Доказано, что аутоиммунные заболевания намного чаще развиваются у женщин, чем у мужчин. Считается, что в данном случае важную роль играют половые гормоны. По данным литературы, пик заболеваемости аутоиммунной патологией у женщин приходится на периоды гормональных изменений: пубертатный, ранний послеродовый, но чаще всего климактерический (40–55 лет) [Степанова, Висмонт, 2010].

До конца не изучена степень влияния на развитие аутоиммунных заболеваний загрязненной воды, токсических и мутагенных пищевых добавок, несбалансированного питания, вредных привычек.

Аутоиммунные заболевания бывают органоспецифическими, неорганоспецифическими, а также смешанными.

При органоспецифических болезнях аутоантитела индуцируются против одного или группы компонентов одного органа. Чаще всего это  забарьерные антигены, к  которым  естественная  (врожденная) толерантность отсутствует.  Сюда относятся: тиреодит Хосимото, первичная микседема (тиреотоксикоз), болезнь Аддисона, гранулематоз Вегенерa, инсулинонезависимый  диабет (типа II).

При неорганоспецифических болезнях аутоантитела реагируют с разными тканями организма, например антинуклеарные антитела. Аутоантигены в данном случае не изолированы от контакта с лимфоидными клетками. К таким патологическим процессам относят системную красную волчанку, дерматомиозит (склеродермия), ревматоидный артрит.

Смешанные болезни включают оба вышеперечисленных механизма [Караулов, 2002].

По классификации и [1988] аутоиммунные заболевания делят на пять классов:

Класс А – первичные аутоиммунные заболевания с генетической предрасположенностью и без нее. Эти заболевания делятся на органоспецифические, промежуточные, органонеспецифические и аутоиммунные заболевания крови. К классу А относят тиреоидит Хасимото, инсулинзависимый диабет Iа типа, аутоиммунный атрофический гастрит, раннюю менопаузу, мужское бесплодие и др. В группу промежуточных аутоиммунных заболеваний  включены первичный билиарный цирроз, синдром Шегрена, синдром Гудпасчера и т. д. К аутоиммунным заболеваниям крови относятся аутоиммунные гемолитические анемии, гранулематоз Вегенера, тромбоцитопении и нейтропении.

Класс В – вторичные аутоиммунные заболевания с генетической предрасположенностью и без нее, например ревматизм, инсулинзависимый диабет Iб типа, лекарственные аутоиммунные заболевания и т. д.

Класс С – генетические дефекты комплемента (ангионевротический отек, волчаночноподобные синдромы).

Класс D – медленная вирусная инфекция (рассеянный склероз, поствакцинальные аутоиммунные реакции).

Класс Е – сочетание болезней классов А – D.

Диагностика аутоиммунных заболеваний основывается на клинических и лабораторных признаках. Решающее значение для подтверждения заболевания имеет обнаружение в сыворотке крови различных антител.

Основными диагностическими лабораторными маркерами ревматических заболеваний являются:

– антинуклеарные антитела (АНА);

– антитела к нативной ДНК;

– антитела к цитоплазме нейтрофилов (АНЦА, ANCA – anti-neutrophil cytoplasmiс antibodies);

– ревматоидный фактор (РФ);

– антитела к циклическому цитруллиновому пептиду (АЦЦП, Anti-CCP –  anti–cyclic citrullinated peptide) [Сорока, Кучинская, Гончар, 2011].

Основными методами лабораторной диагностики аутоиммунных заболеваний являются: непрямая иммунофлуоресценция (НИФ), иммуноферментный анализ (ИФА) и иммуноблоттинг.

В клинической практике чаще используют метод непрямой иммунофлуоресценции (НИФ). Преимуществом непрямого метода реакции иммунофлуоресценции является то, что при его использовании отпадает необходимость иметь большой набор различных специфических флуоресцирующих антител, так как он основан на использовании антиглобулиновых антител [Коротяев, Бабичев, 2012].

Метод НИФ – основной скрининговый метод для первичного обследования пациента с подозрением на аутоиммунный процесс. НИФ используют для выявления антинуклеарных антител (АНА), которые необходимы для диагностики системных ревматических заболеваний. Суть метода заключается в следующем. Сыворотка крови больного инкубируется с клетками или тканями мишенями, выступающими в качестве антигена, на предметном стекле. После этого комплексы аутоантител с мишенями выявляются с помощью человеческих антисывороток с флюоресцеином. Комплексы «антиген – антитело» видны в виде светящихся структур во флюоресцентном микроскопе.

Достоинством метода является то, что сыворотку крови пациента можно тестировать на наличие сразу более чем 100 различных антител. Отрицательный результат этого теста в 95 % случаев позволяет исключить системную красную волчанку (СКВ), лекарственную волчанку, синдром Шегрена, смешанное заболевание соединительной ткани, системный склероз, дерматомиозит/полимиозит [Сорока, Кучинская, Гончар, 2011].

Иммуноферментный анализ (ИФА) является одним из наиболее активно развивающихся направлений химической энзимологии. Это обусловлено тем, что в этом методе уникальная специфичность иммунохимического анализа сочетается с высокой чувствительностью детекции ферментативной метки. 

Суть метода состоит в специфическом связывании определяемого соединения соответствующими антителами. Классические методы иммунохимического анализа основаны на образования антителами в присутствии антигена преципитата (осадка). Индикация образовавшегося комплекса антиген–антитело в растворе может быть осуществлена, если в один их исходных компонентов реакционной системы ввести метку, которая легко определяется соответствующим высокочувствительным физико-химическим методом. Для осуществления такого анализа необходимо провести эффективное разделение комплексов от свободных компонентов. Это достигается тем, что один из компонентов пары антиген-антитело прочно иммобилизуется на твердом носителе. Иммобилизация позволяет предотвратить агрегацию в растворе и осуществить физическое разделение образующихся иммунных комплексов от свободных компонентов [Таова, Таова, 2000].

Иммуноблоттинг (иммуноблот) – высокоспецифичный и высокочувствительный референтный метод, подтверждающий диагноз для пациентов с положительными или неопределенными результатами анализов [Сорока, Кучинская, Гончар, 2011].

Антигены возбудителя разделяют с помощью  электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их (блоттинг – от англ. blot – пятно) из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами»  антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от не связавшихся антител  больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов  человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс «антиген + антитело больного + антитело против Ig человека» выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента [Воробьев, Быков, 2003].

1.2 Ревматоидный артрит и ювенильный ревматоидный артрит

Ревматоидный артрит (РА) – хроническое системное воспалительное заболевание соединительной ткани с преимущественным поражением суставов. Сущность заболевания состоит в поражении суставных тканей (синовиальная оболочка, суставной хрящ, капсула сустава) воспалительным процессом, развивающимся на иммунной основе [Маколкин, Овчаренко, 2005].

Одной из основных причин смертности при ревматоидном артрите являются сердечно-сосудистые катастрофы, обусловленные атеросклерозом сосудов [Ревматоидный артрит и атеросклероз..., 2012].

В патогенезе поражения суставов и внесуставных изменений при РА ведущая роль принадлежит сдвигам в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета. При определении у больных РА показателей системы свертывания крови было обнаружено повышение показателей протромбинового индекса (ПТИ), повышение уровня фибриногена крови, укорочение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ), что указывает на повышение активности системы свертывания крови [Нуритдинова, 2012].

Причины развития ревматоидного артрита неизвестны. Придается значение вирусной инфекции (вирус Эпштейна-Барр), а также другим инфекционным факторам (стрептококки группы В, микоплазма). В настоящее время в происхождении данного заболевания придается значение генетическим факторам, а также имеют значение гормональные факторы. В целом вклад генетических факторов в развитие РА составляет 15 %, факторов внешней среды – 85 % [Маколкин, Овчаренко, 2005].

По мировой статистике ревматоидным артритом страдает около 1 % населения земного шара. Распространенность РА колеблется от 0,6 до 1,5 % во всех регионах планеты. В Российской Федерации  в 2002 году зарегистрировано 280 тыс. пациентов, страдающих достоверным РА (20 тыс. – дети и подростки),  около 2,1 млн. в США.  

Средний  возраст,  в  котором  у большинства пациентов начинается ревматоидный артрит – 30–50 лет. Женщины болеют в 2,5 раза чаще, чем мужчины [Алексеев, Филатова, Эрдес, 2011].

Современная лабораторная диагностика РА включает определение широкого спектра биомаркеров (аутоантитела, показатели острой фазы воспаления, цитокины, маркеры активации эндотелия, субпопуляции лимфоцитов, продукты метаболизма костной и хрящевой ткани, генетические маркеры) в крови, синовиальной жидкости и синовиальной ткани. Результаты определения биомаркеров являются важным инструментом для ранней диагностики, оценки активности, тяжести лечения, прогноза болезни и эффективности проводимой терапии [Александрова, Новиков, Насонов, 2013].