Распространенность СКВ в различных регионах мира довольно широко варьирует от 0,0125 % в Англии до 0,039 %  и  0,04 % в Швеции и США соответственно. Среди лиц женского пола в возрасте от 18 до 65 лет СКВ наблюдается с частотой 0,2 % [Системная красная волчанка..., 2012].

Есть данные американских ученых, согласно которым первичная заболеваемость в Нью-Йорке составляла в 1951 – 1959 годах 2,8 на 100 тыс. населения. В 1960 – 1967 годах она выросла – 5,7 на 100 тыс. населения. Если говорить о распространенности за эти годы, то она, по тем же данным, увеличилась с 18 до 48 на 100 тыс. населения. Ежегодно выявляют 50–70 заболевших СКВ на 1 млн. населения, а распространенность составляет примерно 500 больных на 1 млн. населения. Более 80 % составляют больные в возрасте до 40 лет. Увеличение заболеваемости среди детей начинается с 9-летнего возраста, пик ее приходится на 12–14 лет [Майданник, 2002].

Довольно часто у больных СКВ кроме признаков этого заболевания имеются также признаки другой патологии соединительной ткани –ревматоидного артрита и склеродермии [Дранник, 1999].

Диагноз СКВ устанавливают на основании клинической картины, данных лабораторных и инструментальных методов исследования в соответствии с классификационными критериями Американской коллегии ревматологов. Для верификации достоверного диагноза СКВ необходимо наличие 4 и более из 11 критериев:

1) скуловая сыпь;

2) дискоидная сыпь;

3) фотосенсибилизация – кожная сыпь как результат необычной реакции на солнечные лучи;

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

4) язвы слизистой оболочки рта и/или носоглотки;

5) артрит;

6) серозит;

7) поражение почек;

8) неврологические нарушения – судорожные припадки, психозы;

9) гематологические нарушения – один из следующих признаков:

а) гемолитическая анемия;

б) лейкопения ˂ 4·109/л (зарегистрированная ≥ 2 раз);

в) лимфопения – уровень лимфоцитов ˂ 1,5·109/л (выявляемый ≥ 2 раз);

г) тромбоцитопения – уровень тромбоцитов ˂ 100·109/л;

10) иммунологические нарушения – один из следующих признаков:

а) антитела к нативной ДНК в патологическом титре;

б) наличие антител к Sm-ядерному антигену;

в) положительный тест на антифосфолипидные антитела;

11) антинуклеарные антитела – повышение титра антинуклеарных антител [Цит. по: Клюквина, 2011].

Классификация СКВ включает определение варианта течения болезни в зависимости от характера ее начала:

а) острое течение характеризуется быстрым развитием мультиорганных проявлений, включая поражение почек и ЦНС, и высокой иммунологической активностью;

б) при подостром течении в дебюте наблюдается неспецифическое поражение кожи и суставов, интенсивность симптомов то усиливается, то уменьшается. Типичная полисиндромная картина появляется через 2 – 3 года;

в) для первично – хронического варианта течения характерно длительное превалирование одного или нескольких симптомов: дискоидных высыпаний, феномена Рейно, артрита, судорожного синдрома, гематологических нарушений, синдрома Шегрена. Множественные органные поражения появляются к 5–10-му году болезни [Клюквина, 2011].

Трудности диагностики СКВ связаны с разнообразной клинической картиной, когда на протяжении болезни появляются новые признаки заболевания, а ряд симптомов исчезает. Нередко встречаются случаи необычного начала болезни с отсутствием кожных проявлений, моносимптомным течением болезни [Трудности в диагностике..., 2010].

Лучшим иммунологическим тестом для диагностики системной красной волчанки считается иммунофлуоресцентное определение антинуклеарных антител.

1.3.1 Современные подходы к диагностике системной красной  волчанки

Антинуклеарные антитела (АНА) представляют собой семейство аутоантител, насчитывающее около 200 разновидностей, которые способны связываться с нуклеиновыми кислотами и ассоциированными с ними белками. Они встречаются более чем у 90 % пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка, склеродермия, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена, аутоиммунные заболевания печени [Лапин, Тотолян, 2007].

Результат тестирования оценивается с помощью люминесцентного микроскопа, причем учитывается не только титр разведения сыворотки, но и тип свечения. Лучшим субстратом для тестирования признана клеточная линия НЕр–2, которая существенно улучшает чувствительность теста за счет яркой флюоресценции даже при значительных разведениях сыворотки больного, а крупное ядро, богатое эухроматином, позволяет точно описать тип свечения. На сегодняшний день описано более 40 типов свечения ядра клетки но в практической работе обычно используются шесть: гомогенный, периферический, гранулярный, ядрышковый, центромерный, цитоплазматический. У больных с СКВ встречаются гомогенный и периферический типы свечения [Лапин, Тотолян, 2001].

При СКВ тест на выявление антинуклеарных антител обладает высокой степенью чувствительности (89 %), но умеренной специфичностью (78 %) по сравнению с тестом на определение антител к нДНК (чувствительность 38 %, специфичность 98 %) [Назаренко, Кишкун, 2000].

Антитела к ДНК обнаруживаются в почках (в виде иммунных комплексов) и в сыворотке больных СКВ. Поскольку эти антитела связывают и активируют комплемент, они способствуют разрушению клеток и активируют нейтрофилы и макрофаги [Адельман, 1998]. Антитела к нДНК специфичны для системной красной волчанки и могут обнаруживаться приблизительно у  40–70 % больных. Существует хорошая корреляция между активностью СКВ и уровнем антител к нативной ДНК в сыворотке крови. Снижение уровня предвещает ремиссию, а иногда летальный исход. Антитела могут исчезать при ремиссии заболевания [Назаренко, Кишкун, 2000].

Уровень комплемента и антител против двуспиральной ДНК определяли у беременных женщин с СКВ с 1986 по 2002 гг. Было выявлено, что независимо от активности СКВ низкий уровень комплемента  или наличие антител против двуспиральной ДНК во втором триместре беременности ассоциировалось с высокой частотой потери плода и досрочными родами. У больных с высокой клинической активностью СКВ и гипокомплементимией или выработкой антител против двуспиральной ДНК риск потери плода или досрочных родов был наиболее высоким [Clowse Megan, Magder Laurence, Petri Michelle, 2011].

В качестве скрининга, позволяющего определить содержание антител к нДНК используется метод непрямой иммунофлюоресценции на кинетохоре простейшего жгутикового микроорганизма Crithidia luciliae. Кинетопласт жгутика состоит из гигантской митохондрии, содержащей плотно упакованную кольцевую суперспиральную молекулу ДНК, которая представляет собой идеальный субстрат для непрямой иммунофлюоресценции [Лапин, Тотолян, 2001].

Такие аутоиммунные ревматические заболевания, как РА и СКВ, – не только наиболее тяжелые хронические заболевания человека, но и «модели» для изучения фундаментальных механизмов патогенеза и подходов к фармакотерапии других распространенных форм неинфекционных заболеваний.

Прогноз при аутоиммунных ревматических заболеваниях во многом зависит от возможности ранней диагностики, которая позволяет проводить активную противовоспалительную терапию в дебюте болезней. Однако ранняя диагностика и прогнозирование эффективности терапии затруднены из-за отсутствия чувствительных и специфичных иммунологических и молекулярно-биологических маркеров на ранней стадии болезней [Насонов, 2014].

2 Материал и методы исследований

Работа была выполнена в июне – июле 2014 года на базе иммунологической лаборатории Краевой клинической больницы №1 имени проф. , а также были использованы архивные данные лаборатории за май, август – декабрь 2014 года.

2.1 Объект исследования

Объектами исследования явились 775 образцов сыворотки крови пациентов ККБ№1, поликлиники краевой больницы, ДККБ и ДГКБ№1. Образцы сыворотки пациентов с предполагаемым диагнозом системной красной волчанки (354 образца) были исследованы на наличие антинуклеарных антител (AHA), а также на наличие антител к нативной ДНК. Образцы сыворотки крови пациентов с предполагаемым диагнозом ревматоидный артрит (110 образцов)  и ювенильный ревматоидный артрит (311 образцов) были проверены на ревматоидный фактор (РФ), наличие антинуклеарных антител (AНA) и антител к циклическому цитруллинированному пептиду (Anti–CCР).

Образцы с гемолизом, липемией или микробным загрязнением к анализу не допускались. Образцы сывороток хранили перед анализом при температуре 2–8 °С. Образцы, которые анализировали не сразу, замораживали при температуре –20 °С.

Все реагенты наборов хранили при температуре 2–8 °С. Перед использованием необходимым реагентам позволяли достигнуть комнатной температуры 20–25 °С.

2.2 Определения антинуклеарных антител методом НИФ

Для определения антинуклеарных антител методом непрямой иммунофлуоресценции использовали набор «Autoantibody Test System» (ImmuGlo Diagnostics, США). Данный набор использовали в диагностике заболеваний соединительных тканей, включая системную красную волчанку, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена, склеродермию.

Антинуклеарные антитела в данном методе обнаруживаются благодаря их связыванию с внутриклеточными антигенами перевиваемой линии клеток эпителия человека (HEp–2). Ядро и цитоплазма клеток HEp–2 содержит все антигены, характерные для человеческой клетки, что позволяет выявлять в одном тесте все основные антинуклеарные антитела.

Краткая схема анализа:

– Каждый образец сыворотки разводили 1:40 буфером для разведения.

– Позволяли упаковке со слайдом достичь комнатной температуры в течение 10–15 минут.

– Помещали слайд в инкубационную камеру, содержащую смоченную водой фильтровальную бумагу.

– Из флакона с капельницей наносили 1 каплю (приблизительно 50 мкл) отрицательного контроля в лунку №1, 1 каплю положительного контроля в лунку №2.

– Используя дозатор с одноразовым наконечником наносили по 1 капле образцов предварительно разведенной сыворотки в оставшиеся лунки.

–  Инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7