Материалы всероссийской научной школы для молодежи «Перспективы развития инноваций в биологии» (стр. 13 )

Изменчивость антигенных свойств листерий определяли по изменению их антибиотикочувствительности. Так, независимо от субстрата и условий культивирования у всех штаммов наблюдалось снижение антибиотикочувствительности, вплоть до приобретения устойчивости к цефалоспоринам и фторхинолонам III поколения. штамма2фалоспоринам l ии на пищевых продуктах значительно снижалась чувствительность ( до полной устойчивости) к цефтри Известно, что штаммы L. monocytogenes способны образовывать капсулу в условиях экстремального существования (длительное обитание в морской воде, почве) (Сомов, Бузолева, 2004). Возможно, что хранение контаминированных листериями продуктов в вакуумных упаковках способствует формированию капсулы у возбудителя.

Углубленное изучение биологических свойств возбудителя листериоза на современном этапе является весьма актуальным, так как открывает дополнительные возможности для разработки новых методов профилактики и предупреждения заболевания.

Библиографический список

1.  Бузолёва патогенных бактерий к абиотическим факторам окружающей среды : автореферат дис. д-ра биол. наук.- Владивосток, 2001. - С. 48.

2.  , Сомов температуры на адгезивные свойства листерий // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. - 2006. - № 3. - С. 20– 23.

3.  Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocetogenes в пищевых продуктах : МУ 4.2.1122-02 : [утв. Главным санитарным врачем РФ 22.04.2002.]

4.  , Бузолёва патогенных бактерий к абиотическим факторам окружающей среды. – Владивосток : , 2004. – 167 с.

5.  , , Ермолаева : роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика. - М. : Медицина для всех, 2002. – 200 с.

Глава 9. АКТИНОМИЦЕТЫ ОЗЕРА БАЙКАЛ, КАК ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ИСТОЧНИКИ БИОЛОГИЧЕСКИ-АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

Из донных осадков и воды озера Байкал было выделено 154 изолятов актинобактерий. Показано, что 34 штамма актинобактерий продуцируют соединения, обладающие антимикробной активностью. Для 14 штаммов определены оптимальные условия синтеза антибиотиков. Большинство из полученных соединений исследованных актинобактерий проявляли специфическую активность только по отношению к грамположительным тест-культурам: Bacillus subtilus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faеcalis, Listeria zeeligery. Только один штамм ингибировал рост Candida albicans. Наибольшая антикандидозная активность отмечена для актинобактерий, культивируемых на синтетических средах. Показано, что выделенные штаммы синтезируют соединения с высокой ингибиторной активностью по отношению к патогенным бактериям: Listeria monocytogenes, Listeria ivanovi и Staphylococcus aureus. В то же время эти соединения не подавляли рост Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Yersinia pseudotuberculosis, Salmonella enteritidis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aeruginosa. Установлено, что исследуемые штаммы не продуцировали соединения с цитотоксической активностью по отношению к мышиным эритроцитам. Среди тестируемых микроорганизмов выявлены продуценты ингибиторов ферментов 1®3-b-D-глюканазы LVI из кристаллического стебелька Spisula sachalinensis и арилсульфатазы из брюхоногого моллюска Littorina kurila.

Работа поддержана грантами РФФИ № 03-04-49528 и 02-04-49517; грантом Президента Российской Федерации № 000.2003.4; грантом № 04-1-0-05-005 Президиума Российской Академии Наук “Молекулярная и клеточная биология”; грантом ДВО РАН № 04-2-0-00-023 и Интеграционным грантом ДВО РАН и СО РАН, № 58.

Глава 10. ВЛИЯНИЕ ХОЛОДОВОГО ОБОГАЩЕНИЯ НА СИНТЕЗ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ У ВОЗБУДИТЕЛЕЙ САПРОЗООНОЗОВ

Известно, что для успешного выделения возбудителей сапрозоонозов листерий и иерсиний, как из внешней среды, так и от теплокровного организма, в бактериологической практике широко используется холодовое обогащение исследуемого материала. Как правило, высеваемость этих микроорганизмов значительно повышается после 30 суточного выдерживания инокулята в среде Петерсона Кука при низкой температуре (6-80С). В связи с этим, целью исследования являлось выявление факторов, способствующих ускорению размножения листерий и иерсиний в условиях низкой температуры в среде обогащения.

Для экспериментальных исследований использовали фильтраты культуральной жидкости от Listeria monocytogenes и Yersinia pseudotuberculosis, выращенных при температуре 370С и 6-80С в среде Петерсона Кука, взятых на разных стадиях периодического роста. Биологическую активность веществ «холодовых» и «тепловых» вариантов культуральной жидкости проверяли на тест культурах: Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus, E. coli, Pseudomonas aeruginosa , которые выращивали при 370С и 6-80С.

В результате проведенных исследований было установлено, что метаболиты листерий, выращенных при 370С, не оказывали стимулирующего действия на размножение самих листерий, а также сальмонелл, псевдомонад и иерсиний ни при 370С ни при 60С, но усиливали скорость размножения E. coli в 3 раза, а Staphylococcus aureus в 6 раз при 370С.

Тепловые метаболиты иерсиний стимулировали размножение самих себя при температуре 370С в 2 раза, сальмонелл, кишечной палочки, псевдомонад, стафилококка в 3 раза, а листерий в 5 раз. При 60С усиления роста тест микроорганизмов на тепловых метаболитах иерсиний не наблюдали.

При этом следует отметить, что стимулирующим действием обладали метаболиты исследуемых бактерий, взятых в логарифмической стадии роста при 370С, для метаболитов стационарной фазы не было установлено такого факта.

«Холодовые» метаболиты листерий, взятые на 30-40 сутки роста культуры, стимулировали рост сальмонелл, стафилококка и самих листерий при 60С в 2-3 раза, и не усиливали рост таких тест микроорганизмов как иерсинии и псевдомонады. «Холодовые » метаболиты иерсиний, взятые на 30-40 сутки роста культуры, стимулировали рост только иерсиний при 60С и не стимулировали рост остальных тест микроорганизмов.

Таким образом, «тепловые» и «холодовые» метаболиты иерсиний и листерий отличаются по их воздействию на рост тест микроорганизмов. У «тепловых» стимулирующий фактор выделяется в культуральную среду в логарифмической стадии роста, у «холодовых» - в стационарной.

,

Глава 11. АКТИВНОСТЬ АГГЛЮТИНИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ДВУСТВОРЧАТЫХ МОЛЛЮСКОВ MODIOLUS KURILENSIS И ANADARA BROUGHTONI
ИЗ НЕКОТОРЫХ АКВАТОРИЙ ЯПОНСКОГО МОРЯ

Иммунология – одна из наиболее интенсивно продвигающихся областей биологии и медицины, с развитием которой связано много перспектив. В частности, исследования в этой области могут способствовать развитию марикультуры, а также разработке удобных методов экологического мониторинга, поскольку иммунный статус является показателем состояния животных, в том числе и морских гидробионтов. Modiolus kurilensis и Anadara broughtoni – двустворчатые моллюски, у которых почти не исследована иммунная система. В то же время, данные виды имеют важное промысловое значение. Двустворчатые моллюски является источником многих биологически активных веществ, а также ценным пищевым продуктом, имеющим спрос на ближайших рынках сбыта – Китае и Японии. Кроме того, в нашем регионе есть все условия для культивирования этих видов.

В данной работе проводилось определение интервала естественной вариации титра агглютининов гемолимфы M. kurilensis и A. broughtoni как основного показателя гуморального звена иммунитета моллюсков. Гемолимфа M. kurilensis была собрана в мае-июне 2006 года и в тот же период 2007 года во время экспедиций в бухте Троица, заливе Восток и бухте Киевка. Все указанные акватории слабо подвержены антропогенному влиянию, и целью работы являлось сравнение иммунного статуса животных из различных фоновых акваторий для выявления границ нормы. Гемолимфа A. broughtoni была собрана 20 марта и 4 мая 2009. Животных собирали на акватории Амурского залива с целью оценки сезонной динамики нормальной активности гуморального иммунитета.

Для исследования гуморального иммунитета моллюсков была проведена реакция прямой гемагглютинации. Необходимо отметить, что методики постановки реакции в разные годы несколько отличались: в 2006 г. использовали нативную плазму и фиксированные глютаровым альдегидом трипсинизированные и не трипсинизированные эритроциты (Эр) групп крови человека О, А, В, АВ и Эр барана; в 2007 г. плазму подвергали заморозке в жидком азоте, а агглютинируемыми частицами были нативные Эр четырех групп крови человека. В 2009 году в работе с A. broughtoni также использовали замороженную плазму, а Эр использовали как нативные, так и обработанные описанным выше способом.

Большинство работ по изучению гуморального иммунитета моллюсков рассматривает либо химическую структуру и специфичность растворимых агентов гемолимфы, либо изменение их концентраций в ответ на искусственное введение антигенов (АГ). Встречаются работы, в которых производится сравнение иммунных реакций между разными видами, но по изучению естественной вариабельности иммунного статуса внутри популяций и, тем более, по сравниванию между разными популяциями работ практически нет.

В ходе 2006 г. была апробирована и отработана сама методика постановки реакции. Было отмечено присутствие у некоторых животных микрофитобионтных инвазий: у шести представителей M. kurilensis со станции «Троица» в органах (гонада, пищеварительная железа (ПВЖ), мантия) и/или гемолимфе были обнаружены микроводоросли. Определить выраженную корреляцию между активностью гуморальных реакций иммунитета и наличием микрофитобионта в организмах моллюсков не удалось. Однако это лишь указывает на необходимость более глубокого исследования данного явления.