Микробиология и вирусология (стр. 18 )

Лептоспиры — факультативные аэробы, культивируются при +28—30°С в течение 3 месяцев. Через 3, 5, 7, 10, а затем каждые 5 дней из содержимого всех пробирок готовят препараты для исследования методом раздавленной капли, про­сматривают их в темном поле микроскопа. Обычно рост микробов появляется на 3—5-й день. При обнаружении лептоспир по 0,5 мл культуры пересевают в 3—5 пробирок с 5—10 мл свежей питательной среды, культивируют при +28—30 °С. Через 4—7 дней наблюдается максимальное накопление лептоспир в среде. Нали­чие роста и чистоту культуры определяют просмотром пробирок в луче света от осветителя (ОИ-19) и с помощью микроскопии.

Посевами материала на питательные среды культуру лептоспир не всегда удается выделить. Прибегают к постановке биопробы. Заражают 20—30-дневных золотистых хомяков и 10—20-дневных крольчат (сосунов). Исследуемый матери­ал (кровь, моча, суспензии паренхиматозных органов животных, абортированных плодов и др.) вводят подкожно или внутрибрюшинно: 0,3—0,5 мл хомякам и 2—3 мл крольчатам. В опыт берут по два животных на каждую пробу. На 4—5-й день убивают одно животное; другое, если оно не погибнет,— на 14—16-й день. Жи­вотных вскрывают, кровь исследуют в РМА с лептоспирами (антиген) 13 серог-рупп (разведение кровяной сыворотки начинают с 1: 10). Положительная РМА свидетельствует о наличии лептоспир в исследуемом материале. Кроме того, если была выделена культура и нужно определить ее патогенность, животным вводят 5—7-дневную культуру внутрибрюшинно (70—100 лептоспир в поле зрения мик­роскопа). Высоко вирулентной считают культуру, которая в дозе 0,1 мл вызывает гибель золотистых хомяков на 5—12-й день.

Выделенную чистую культуру исследуют в РМА для определения антиген­ной (серогрупповой) принадлежности с групповыми агглютинирующими лептоспирозными сыворотками, предварительно разведенными стерильным физио­логическим раствором 1 : 50, 1 : 500, 1 : 1000, 1 : 2000, 1 : 4000, 1 : 16 000 и 1 : 32 000. Сыворотки биопромышленность выпускает в двух наборах: первый набор включает 15 сывороток к лептоспирам серогрупп, главным образом гриппотифоза помона, тарассови каникола, иктерогеморрагие, батавие, гебдомадис и др. Второй набор-20 сывороток. Реакцию ставят в пластинах с луночками (или в пробирках), смешивая 0,1 мл сыворотки каждого разведения с 0,1 мл выделенной (типируемой) 5—7—10-С очной культуры лептоспир с накоплением 70—100 подвижных микробных клеток. Разведения сыворотки последовательно удваиваются. Пластины (пробирки) выдерживают 1 час в термостате при +37 "С, затем проводят учет результатов — из каждой лунки (каждого разведения, сыворотки, начиная с наибольшего) готовят препараты раздавленной капли, которые исследуют в темном поле микроскопа. Ре­акцию оценивают в крестах, основываясь на наличии и характере агглютинации лептоспир: ++++ (четыре креста) — полная 100 %-пая агглютинация лептоспир— склеивание лептоспир с образованием скоплений в виде «паучков», состоящих из разного количества лептоспир (от нескольких клеток до нескольких десятков и да­же сотен), свободные концы которых сохраняют подвижность; +++(три креста) — агглютинированы 75% лептоспир; ++ (два креста)—50%-+ (один крест) — агглю­тинированы 25 %; (—) минус ~ агглютинация отсутствует. Положительную РМА считают если она выражена на четыре, три и два креста. Испытуемую культуру от­носят к серологической группе лептоспир, с сывороткой которой она дает реакцию на 2—4 креста до 50—100 % ее титра, указанного на этикетке.

Бактериологическое исследование воды осуществляется несколькими мето­дами. Чаще используют следующую методику: пробу воды 500 мл центрифуги­руют при 10—15 тыс. об/мин в течение 30 минут. Осадок в дозе 2—3 мл вводят подкожно взрослым кроликам, кровь которых предварительно исследовали в РМА на наличие антилептоспирных антител. Результаты должны быть отрица­тельными. Через 7, 14 и 20 дней кровь кроликов исследуют методом РМА с лептоспирами 13 серологических групп. Положительная РМА в титре 1 : 10 и выше свидетельствует о наличии патогенных лептоспир в данной пробе воды.

Серологическая диагностика лептоспироза осуществляется методами РМА и РА (реакция макроагглютинации). Разработаны также методики РСК и двухсту­пенчатого варианта МФА (флуоресцирующих антител), которые позволяют уста­новить наличие антител у больных лептоспирозом животных. Кровь (сыворотку крови) для исследования необходимо брать на 5-7-й день болезни и повторно — через 7—10 дней

Контрольные вопросы:

1. Возбудитель лептоспироза, его морфологическая, тинкториальная характеристика;

2. Правила взятия и пересылки патологического материала для микробиологиче­ской

диагностики лептоспироза;

3. Особенности культивирования лептоспир;

4. Особенности микроскопирования лептоспир;

5. Методы серологической диагностики лептоспироза, серологической идентификации

лептоспир;

6. Антиген для серологических исследований, подготовка материала для

бактериологической диагностики.

1.15 Тема: Возбудители микозов

Цель занятия: Ознакомить студентов с правилами взятия патологического мате­риала и методами микологического исследования на дерматомикозы (трихофития, микроспория), кандидамикоз и плесневые микозы.

Задание:

1. Приготовить препараты раздавленной капли из культур грибов;

2. Исследовать культуральные свойства возбудителей.

Материалы и оборудование: Культуры грибов (Trichophyton verrucosum, Microsporum canis, Candida albicans) на среде Сабуро (или другой), патологиче­ский материал от животных, больных трихофитией и микроспорией, препаро­вальные иглы, микологические крючки, предметные и покровные стекла, а также плакаты, таблицы, биопрепараты.

Микозы — группа специфических болезней, вызываемых патогенными микроскопическими грибами, активно паразитирующими в животном организме.

Возбудители дерматомикозов. К дерматомикозам относятся микозы, сопрово­ждающиеся поражением кожи и ее производных. Зона паразитирования возбудителей ограничена тканями, в которых имеется кератин. Болеют сельскохозяйственные жи­вотные всех видов (преимущественно молодняк), пушные и хищные звери, а также человек. Возбудителей дерматомикозов относят к высшим несовершенным грибам (класс Deuteromycetes). Несмотря на сходство клинического проявления болезни (стригущий лишай), возбудителей относят к различным родам — Trichophyton (вызы­вающий трихофитию),Microsporum (вызывающий микроспорию) и Achorion (возбудитель парши). Основными воз­будителями трихофитии крупного рогатого скота и овец являются Trichophyton verrucosum, Tr. faviforme, а для других видов животных — Тr. mentagrophytes, Тr. equinum. Тr. gallinae, вызывающие трихофитию у птиц, у млекопитающих, кур и индеек, а также у мышей, крыс, собак, кошек, пушных зверей.

Трихофития – дерматомикоз, характеризующийся появлением облысевших участков кожи, в первую очередь в области головы, затем поражение может распространиться на поверхность тела животного. в области поражения волос ломкий, хрупкий, эпидермис отторгается в виде слипшихся чешуек.

Морфологические и культуральные свойства возбудителей трихофитии млекопитающих. В местах поражения, как это видно в препаратах из патологиче­ского материала, гриб располагается снаружи или внутри пораженного волоса в виде правильных рядов септированного мицелия. Аналогичным образом в виде цепочек располагаются округлые или овальные споры, нередко образующие че­хол у основания волоса. На питательных средах возбудители трихофитии могут образовывать артроспоры, алейрии, хламидоспоры, микроконидии и веретенооб­разные макроконидни, одиночные или пучками, расположенные на концах мице­лия, чего не наблюдается при паразитировании гриба на животных тканях.

Возбудитель трихофитии — аэроб, хорошо растет на специальных питатель­ных средах. На агаре Сабуро через 10—20 суток инкубирования в термостате при температуре +26—28 °С образует гладкие, кожистые, складчатые, иногда с мучни­стым налетом колонии, от которых отходят мощные глубокие ветвления в субстрат.

При трихофитии птиц (фавус — белый гребень, парша) болезнь характе­ризуется поражением кожи, перьев, внутренних органов. На гребне, сережках, ближе к клюву, обнаруживают корки (скутулы), имеющие серовато-белый цвет. У кошек и собак стукулярная форма возникает на лапах, когтях и голове. При генерализованной форме поражаются голова, оперенная часть туловища, носоглотка зоб, тонкий отдел кишечника.

Морфологические и культуральные свойства возбудителя трихофитии птиц. Trichophyton gallinae имеет часто вид ветвящихся гифов, которые образуют густые скопления в виде войлока. Гифы мицелия септированные, состоящие из пря­моугольных клеток с двухконтурной оболочкой. Распавшийся мицелий образует округлые или многогранные споры, располагающиеся цепочками или отдельными скоплениями. Мицелий в молодой культуре тонкий, в старой — грубый, четко сегментированный. Концы мицелия могут иметь различные образования: верете­нообразные, боковые вздутая, утолщенные стенки. Края и ветвления на концах могут иметь вид рога оленя, гребешка. В препарате обнаруживаются и хламидос­поры, мицелии с артроспорами, многоклеточными (5—8) макроконидиями. На агаре gallinae через 4—5 суток культивирования образует се­роватые маленькие колонии, которые к 10—12-му дню достигают размеров 10— 12 мм. Колонии имеют желтовато-белый цвет, розовый, красный или малиновый, гладкую и кожистую поверхность. Позднее они становятся восковидными с мор­щинистой поверхностью (как губка). Старые культуры сухие с порошкообразным налетом, приобретают серо-белый цвет.

Возбудители микроспории (стригущий лишай) вызывают заболевание у собак, кошек, хищных зверей, редко обезьян, морских свинок, овец и других животных. Болеет и чело­век, особенно чувствительны дети. Род Microsporum включает три вида Microsporum lanosum, M. equinum и M. gypseum.

Морфологические и культуральные свойства. В патологическом материале грибы рода Microsporum имеют вид разветвленного мицелия, который, распада­ясь, образует округлые споры. Вокруг пораженного волоса образуется чехол (муфта), состоящий из спор с беспорядочным мозаичным расположением. На ага­ре Сабуро с глюкозой при температуре +26—28 °С М. equinum развивается на 6— 7-й день, образуя кожистые колонии, покрытые серо-белым воздушным мицели­ем. Цвет зрелой колонии желтый или коричневый. Мицелий септирован. Обра­зуемые микроконидии имеют грушевидную форму, макроконидии — многокле­точные. М. canis на сусло-агаре на 3—4-й день образует серовато-белого цвета округлые колонии с концентрическими кругами с лучистым центром. Зрелые ко­лонии желтого и коричневого цвета. Образуемые микроконидии имеют вид мно­гокамерных клеток. М. gypseum на сусло-агаре образует плоские мучнистые жел­товато-светло-коричневые колонии. Мицелий ракетообразной формы. Образуе­мые макроконидии имеют многоклеточную форму. Грибы рода Microsporum про­дуцируют флуоресцирующий пигмент (птеридин).