Микробиология и вирусология (стр. 12 )

Культуральные свойства. С. septicum – строгий анаэроб. рН среды 7,6 (оптимальный), температурный оптимум +37—38 °С. В МППБ и полужидком агаре рост про­является равномерным помутнением и газообразованием. Через 48 часа микробная масса в жидкой среде оседает на дно пробирки и бульон просветляется, Хорошо рас­тет на мозговой среде, но не вызывает ее почернения. На глюкозно-кровяном агаре характерный рост колоний в виде кружевного узорчатого сплетения с большой зоной гемолиза. В агаре столбиком растет в виде нежных хлопьевидных колоний.

Биохимические свойства. Интенсивно выражены сахаролитические свойст­ва — сбраживает глюкозу, лактозу, левулезу, салицин с образованием кислоты и газа, маннит и сахарозу не ферментирует. Молоко свертывает медленно. При росте культу­ры в жидкой среде обнаруживают образование сероводорода, аммиака. Индол не образуется. Протеолитические свойства выражены слабо — медленно разжижает желатину и совсем не разжижает свернутую сыворотку.

Биопроба. С. septicum продуцирует высокоактивные экзотоксины, вызывающие гемолиз, нек­роз ткани, летальность. Патогенен для всех лабораторных животных, среди которых чаще используют морских свинок, заражая их молодой культурой в дозе 0,1 мл под­кожно или внутримышечно. Гибель животных наступает через 8—20 часов.

Для более быстрого воздействия микроба на организм животного целесооб­разно перед заражением применить 1 %-ный раствор молочной кислоты (0,5 мл вводят внутримышечно с внутренней стороны бедра — место последующего за­ражения). При вскрытии трупов морских свинок отмечают: на месте инъекции шерсть легко отделяется от прилегающих тканей, мышцы отечны, геморрагично инфильтрированы, обилие пузырьков газа. В грудной и брюшной полостях скоп­ление значительного количества жидкости. Из тканей и экссудата морской свин­ки делают высевы на питательные среды (для получения чистой культуры).

Морфология С. novyi (С. oedematiens). Крупная полиморфная палочка (4-10 мкм) с закругленными концами. Под­вижная, перетрих. Расположение одиночное или в виде коротких цепочек. На щелочных средах (и средах бедных питательными веществами) обра­зует спору, расположена субтерминально.

Грамположительна.

Культурально-биохимические свойства. Строгий анаэроб. Хорошо растет на среде Китта-Тароцци (равномерное помутнение). На глюкозно-кровяном агаре формирует ко­лонии сочные, крупные серого цвета с неровными краями, с небольшой зоной гемолиза. Нередко наблюдается появление дочерних колоний.

С. novyi неоднороден по антигенной структуре: различают его разновидно­сти А В, С, D. Первые три разновидности характеризуются ползучим ростом; D растет в виде мелких прозрачных колоний; тип А - ферментирует глицерин; типы В и D проявляют β-гемолиз на кровяном агаре. Типы А и В — продуцируют α-некротизирующий токсин, который является капиллярным ядом, нарушающим проницаемость стенок сосудов. Следствием действия этого токсина при под­кожном введении его кроликам развивается отек тестообразной консистенции. Серовар D (С. haemolyticum) вызывает инфекционную гемоглобинурию у крупного рогатого скота. Строгий анаэроб. Палочковидной формы, палочки крупные (более 6 мкм). Подвижный, образует спору (субтерминально). Окрашивается грамположительно. На плотной среде растет в виде колоний с ров­ными краями. В жидкой среде растет слабо, образуя хлопьевидный осадок. Фер­ментирует глюкозу. Молоко свертывает медленно. Слабо разжижает желатину. На средах с печенью и пептоном образует сероводород и индол.

Морфология Clostridium histolyticum. Тонкая палочка длиной 3—5 мкм, ши­риной 0,2—0,5 мкм, подвижная, капсулы не образует. Грамположительная. Спора образуется в старых культурах, располагается субтерминально.

Культурально-биохимические свойства. В МППБ (среда Китта-Тароцци) рост проявляется равно­мерным помутнением среды, без образования газа, с последующим просветлением среды и осадком. На глюкозно-кровяном агаре образует мелкие росинчатые прозрачные колонии без зоны гемолиза.

Этот микроорганизм не сбражива­ет ни один из углеводов. Обладает интенсивной протеолитической способностью: желатину разжижает, молоко пептонизирует, на мозговой среде вызывает почернение. Индол не образует. Сероводород выделяется в значительном количестве. Продуцирует цитотоксин некротического и летального действия. Патогенен в S-форме.

Таким образом, злокачественный отек — процесс полимикробной этиоло­гии, ассоциация складывается в любом сочетании из названных видов микробов. Бактериологическая диагностика основывается на культурально-морфологических, ферментативных и биологических свойствах каждого. Для ус­тановления патогенности заражают восприимчивых лабораторных животных. Павших животных вскрывают, из органов трупа проводят высевы на питательные среды, выделенную культуру идентифицируют.

Для идентификации возбудителей злокачественного отека используют серо­логическую реакцию нейтрализации токсина специфической сывороткой. С этой целью минимальную смертельную дозу культуры или ее фильтрата смешивают с 0,2 0,5 мл соответствующей типоспецифической сыворотки, выдерживают в тер­мостате 45 минут, вводят внутрибрюшинно (или подкожно) белым мышам. Одно­временно для контроля испытывают культуру или её фильтрат без сыворотки. Вид микроба определяют по выживаемости мышей, получивших смесь культуры с соответствующей специфической сывороткой. Контрольные животные гибнут.

Эмфизематозный карбункул (Эмкар)

Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкар) — Clostridium chauvoei, вызывает инфекционное остро протекающее неконтагиозное заболевание, преимущественно у крупного рогатого скота, редко у овец и коз. Заражение происходит главным об­разом алиментарным путем. Проявляется Эмкар образованием опухолевидных разращений (газовых отеков) в массивных группах мышц (подгрудок, бедро), хромотой и быстрой гибелью животного. При надавливании на поверхность припухлости слышен звук (шум, треск, крепитация) лопающихся пузырьков газа, которые образовались при разложении ткани ферментами бактерий.

Патологический материал. Вскрытие трупов при Эмкаре не допустимо (почвенная инфекция). Для бактериологического исследования направ­ляют пораженную мышечную ткань из опухолевидного образования, нарезанную в виде полосок. Если кусочки мышц нельзя быстро доставить в свежем виде в лабора­торию, их консервируют в 40 %-ном растворе глицерина, высушивают на воздухе (завернутые в марлю) или обрабатывают раствором NaCl. Свежий материал рас­тирают в стерильной ступке с добавлением дробленого стекла или кварцевого песка; если материал был консервирован глицерином (или солью), его предварительно промывают стерильным физраствором, растирают, затем исследуют.

Схема бактериологического исследования: микроскопия мазков, посевы на питательные среды в анаэробных и аэробных условиях, заражение лабораторных животных.

Микроскопия. Сl. chauvoei — толстая крупная грамположительная палочка, полиморфная, с закругленными концами, подвижная (перитрих). Капсулы не имеет. В организме и во внешней среде образует спору, располагающуюся центрально или суб­терминально. Диаметр споры превышает диаметр вегетативной клетки, поэтому микробная клетка со спорой приобретает различные формы, напоминающие либо веретено, разливательную ложку, либо форму точильного камня. В молодых культурах окраска по Грамму положительная, в старых культурах – отрицательно.

Культурально-биохимические свойства. Строгий анаэроб. Оптимальная температура роста +36—38 °С. Не растет на МПА и МПБ. Для культивирования применяют специальные среды с добавлением крови, сыворотки, кусочками печени, мышц. Наиболее часто используют среду Китта-Тароцци, бульон Мартена, мозговую среду, полужидкий агар, глюкозо-кровяной агар. Через 16—24 часов роста в жидкой среде происходят ее помутнение и газообразование, в последующие дни микробная масса оседает на дно пробир­ки, среда просветляется. На глюкозно-кровяном агаре формирует колонии, напо­минающие форму виноградного листа или перламутровой пуговицы. В глубине сывороточного агара чечевицеобразные колонии. Желатину разжижает. Свертывает молоко, образуя мелкие хлопья казеина. Обладает сахаролитическими свойствами: ферментирует с образова­нием кислоты и газа сахарозу, глюкозу, лактозу, мальтозу; не сбраживает салицин, маннит, глицерин, дульцит, инулин; индол не образует. Каталазоотрицательны.

Биопроба. Патогенность проверяют чаще внутримышечным заражением морских свинок. Гибель последних наступает через 24—96 часов после зараже­ния. Перед заражением свинкам вводят 1—2 %-ный раствор молочной кислоты или исследуемый растертый материал инъецируют вместе с кварцевым песком или мелкодробленым стеклом. Молочная кислота (песок, стеклянный порошок) вызывает местное поражение ткани, а это способствует лучшему проникновению микроба в ткани животного и развитию инфекционного процесса.

При диагно­стическом исследовании, если возникает необходимость, выделенную культуру С. chauvoei дифференцируют от С. septicum. Основной дифференциальный признак - С. chauvoei в отличие от С. septicum. ферментирует сахаразу и не сбраживает салицин.

Контрольные вопросы:

1. Питательные среды и условия культивирования анаэробов.

2. Возбудители злокачественного отека, их отличительные особенности.

3. Патологический материал, направляемый для бактериологического исследования на злокачественный отек и эмкар.

4. Возбудителя дизентерии ягнят и брадзота, их морфологические, тинкториальные, культурально-биохимические особенности.

5. chauvoei, его дифференциация от С. septicum.

1.10 Тема: Патогенные анаэробы - возбудители столбняка, ботулизма,

фузариобактериоза

Цель занятия: Усвоить особенности взятия материала для диагностического ис­следования при каждом из трех заболеваний, принципы и методы их исследова­ния в лаборатории.