Микробиология и вирусология (стр. 26 )

Контрольные вопросы:

1. Особенности структуры вириона парагриппа крупного рогатого скота?

2. На чем основан быстрый метод диагностики парагриппа – 3?

3. Выделение и идентификация вирусов.

4. В чем заключается ретроспективная диагностика парагриппа - 3?

2.5 Тема: Дифференциальная диагностика вирусов болезни Ньюкасла и гриппа птиц (классической чумы птиц)

Цель занятия: Идентифицировать вирусы болезни Ньюкасла и гриппа кур в РТГА с использовани­ем диагностических наборов.

Оборудование и материалы: Доски с луночками из плексиглаза, мерные пипетки на 1,2 мл, резиновые баллончики с наконечником, изотонический раствор натрия хлорида, аллантоисная жидкость, диаг­ностические наборы, 1 %-ная взвесь эритроцитов кур, банки с дезраствором.

Задание: Дифференцировать в РТГА неизвестный гемагглютинирующий вирус, установив, является ли он вирусом болезни Ньюкасла или гриппа птиц.

Содержание занятия

Вирусы гриппа относятся к семейству Ortomyxoviridae, которое включает роды Influenza A, B, С. Антигенные свойства внутренних белков вириона (M1 и NP) определяют принадлежность вируса гриппа к роду А, В или С. Вирус гриппа имеет сферическую форму диаметром 80—120 нм, в центре находятся РНК-фрагменты, заключённые в липопротеидную оболочку, на поверхности которой имеются «шипы» состоящие из гемагглютинина (H) и из нейраминидазы (N). Антитела, вырабатываемые в ответ на гемагглютинин (H), составляют основу иммунитета против определённого подтипа возбудителя гриппа

Грипп птиц (классическая чума птиц) - (лат. Grippus avium) острая, высококонтаги-озная инфекция, харак­теризующаяся быстрым течением и высокой смертностью. Поражаются органы пищеварения и дыхания. Заболевание вызывается вирусом гриппа птиц типа А первым подтипом (ГП-1). В настоящее время грипп кур в виде классической чумы регистрируется редко и чаще вызывается вирусами других подтипов.

Известно 8 подтипов вирусов гриппа птиц, отличающихся друг от друга поверхностными антигенами (гемагглютинин, нейраминидаза).

Антигенная вариабельность вируса гриппа птиц и наличие высоковирулентных штаммов позволяют отнести его к особо опасным болезням, способным причинить большой экономический ущерб. Различные штаммы вируса гриппа птиц могут вызывать от 10 до 100% гибели среди заболевших и поражать одновременно от одного до трёх видов птиц. Природным резервуаром вируса являются мигрирующие птицы, чаще всего дикие утки. В диких популяциях птиц, в отличие от домашних, высока устойчивость к вирусу гриппа. Впервые грипп птиц был выявлен в Италии более ста лет назад.

Возбудитель гриппа птиц — РНК-содержащий вирус Influenza virus A, относящийся к семейству Orthomyxoviridae, по комплемент-связывающему антигену (РНП) родственен вирусу гриппа A человека и животных. Для вириона характерны полиморфность, преобладающая сферическая форма, размер 60—180 нм. Вирион имеет липопротеидную оболочку с радиально расположенными на ней шипиками, которая заключает в себе свёрнутое кольцо РНП. Геном вириона состоит из 6 или более типов РНК. Вирус обладает инфекционной, гемагглютинирующей и нейраминидазной активностью. Хорошо размножается в развивающихся 10—11-суточных эмбрионах кур. Вируссодержащая аллантоисная жидкость обладает способностью агглютинировать эритроциты многих видов животных. При культивировании вируса в культуре тканей многие штаммы обладают цитопатическим действием и гемадсорбирующими свойствами. Штаммы вируса гриппа птиц, выделенные от различных видов птиц, могут отличаться по вирулентности, спектру патогенности и структуре поверхностных антигенов (гемагглютинина и нейраминидазы). Вирус быстро инактивируется под действием 3%-ного раствора едкого натра и фенола, 0,1%-ного раствора формальдегида. Длительно сохраняется при низких температурах и высушивании

Клинически течение данного заболевания в целом совпадает с течением заболевания при инфицировании другими штаммами вируса гриппа. Достоверный диагноз устанавливается при сертотипировании вируса.

Болезнь Ньюкасла (псевдочума, атипичная чума, азиатская чума) - широко распространенная, остропротекающая, высококон-тагинозная болезнь кур, индеек. Возбудителем является РНК-содержащий вирус, из рода Paramixovirus, семейства Paramixoviridae. Обладает способностью репродукции на культуре тканей, цитопатогенным действием, гемагглютинирующей активностью к эритроцитам кур. Различают велогенные (очень сильные), мезогенные (средние) и лентогенные (очень слабые) штаммы вируса, отличающиеся вирулентными свойствами. Заражение обычно происходит аэрозольным или пероральным путём. Выделение вируса происходит со слизью верхних дыхательных путей и ротовой полости, с пометом, инфицируя окружающую среду. Вирус способен выделяться в инкубационный период через 24 ч после заражения птицы, но обнаружить его удается в организме переболевших птиц в течение 5-7 дней после выздоровления. При затянувшемся процессе с поражением нервной системы вирус локализуется длительное время в головном мозге.

Диагностика. Диагноз на болезнь Ньюкасла ставится с учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных с обязательными лабораторными исследованиями по выделению и типизации вируса. Вирус выделяется из мозга, печени, селезенки больных и павших птиц. Проводят заражение куриных эмбрионов, биопробу на цыплятах. Выделенный вирус исследуют серологическими методами: реакция задержки гемагглютинации (РЗГА), нейтрализации (РН), иммунофлуоресценции (РИФ).

Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить отравления птиц, пастереллез, инфекционный ларинготрахеит, тиф кур, спирохетоз, классическую чуму.
При отравлениях поражается определенная группа птиц, получавшая корм с наличием ядовитых веществ. Для исключения отравлений заменяют подозрительный корм и ставят биопробу на токсичность путем его скармливания отдельной группе птиц.

Профилактика. При отсутствии эффективного лечения при данном заболевании широко применяется вакцинация как один из важнейших технологических приёмов, позволяющих выработать иммунитет у восприимчивой птицы.

Для специфической профилактики болезни Ньюкасла применяют живые вакцины, содержащие лентогенный штамм вируса, инактивированные и комбинированные вакцины. Чаще всего применяют вакцины из штамма "В1", "Н", "Бор-74", "Ла-Сота".

Из методов применения вакцин наиболее рациональным является метод вакцинации спреем в 1-дневном возрасте.

Самым действенным методом является ликвидация больных и контактировавших с больными особями голубей, карантин в 30 дней, полная дезинфекция, качество которой желательно проверить лабораторно. При этом малоценный инвентарь необходимо сжечь во избежание заражения от него других птиц.

При возникновении болезни контроль за титром антител должен проводиться ежемесячно с охватом поголовья не менее 10% из разных возрастных групп. Только таким методом возможно приостановить распространение заболевания. При снижении титров антител до уровня 1:8 у 20-30% поголовья птицу необходимо перепривить.

Порядок идентификации вирусов болезни Ньюкасла и гриппа птиц в РТГА

1 Разведение эталонных стандартных антигенов и антигенов сывороток согласно на­ставлению.

2 Титрование аллантоисной жидкости и стандартных антигенов в ТРГА с эритроцитами кур, определение титра и разведение их до 4АЕ в 0,2 мл физиологического раствора.

3 Постановка РТГА с аллантоисной жидкостью и стандартными антигенами виру­сов болезни Ньюкасла и гриппа птиц согласно схемы.

4 Учет результатов.

Контрольные вопросы:

1 Структура вируса болезни Ньюкасла.

2 Структура вируса гриппа птиц.

3 Как протекает болезнь Ньюкасла и грипп птиц и кур?

4 Какой патологический материал направляют в лабораторию для диагностического исследования?

Раздел 3 Современные методы диагностики инфекционных болезней

3.1 Тема: Иммуноферментный анализ (ИФА)

Цель: Ознакомиться с иммуноферментным анализом для диагностики инфекционных болезней.

Иммуноферментный анализ (ИФА) – это современный метод, позволяющий с высокой эффективностью выявлять в сыворотках больных животных и людей специфические антигены или антитела к ним. Метод широко используется при диагностике вирусных и бактериальных инфекций.

Принцип иммуноферментного анализа заключается в соединении комплекса «антиген-антитело» с конъюгатом, содержащим ферментную метку, выявляемую с помощью субстратной смеси.

Иммуноферментный анализ применяется для выявления:

● специфических антител

● антигена возбудителя

● суммарных антител

Иммуноферментный анализ применяется для выявления наличия в сыворотке крови специфических иммуноглобулинов (Ig или антител) - белков, вырабатываемых клетками иммунной системы, направленным агентом. Связываясь с микробной клеткой или продуктами ее жизнедеятельности, иммуноглобулины нейтрализуют их и способность их элиминации. Таким образом, иммуноглобулины представляют собой суть гуморального иммунитета. На каждый вид (и даже подвид) возбудителя вырабатываются свои определенные антитела, которые, не связываются ни с каким другим инфекционным агентом. Благодаря этому определение антимикробных антител обеспечивает достаточно высокую специфичность анализа. Из пяти классов Ig в диагностике инфекционных заболеваний чаще всего используются Ig трех типов А, М и G.

Выработка иммуноглобулинов происходит по определенным законам: существует некоторый промежуток времени с момента внедрения инфекционного агента в организм и до момента появления антител в сыворотке крови – это так называемый серонегативный период. Для различных инфекций и отдельных индивидуумов он может быть неодинаков.