Микробиология и вирусология (стр. 19 )

Патологическим материалом служат соскобы с пораженных частей тела животного вместе с корочками и чешуйками, пораженные волосы с участков, гра­ничащих со здоровой кожей.

Лабораторные исследования включают микроскопию, люминесцентный анализ и выделение чистой культуры гриба. Микроскопическое исследование является основным в лабораторной диаг­ностике дерматомикозов. Чаще готовят неокрашенные (нативные) препараты. Ис­следуемый материал помещают в чашки Петри, измельчают ножницами и расщепляют с помощью скальпеля. Затем кусочки волос, чешуек, корочек переносят на предметное стекло, наносят каплю 20 %-ного раствора NaOH или КОН и слегка подогревают над пламенем горелки. После этого добавляют каплю 50 %-ного водного раствора глицерина. На приготовленный таким образом препарат накла­дывают покровное стекло и просматривают сначала под малым увеличением су­хого объектива (Х8), а потом — под большим (Х40) или с помощью иммерсион­ной системы. Обнаружение мицелия гриба и различных спор в патматериале яв­ляется достаточным основанием для постановки диагноза на дерматомикозы.

С целью дифференциации грибов родов Trichopthyton и Misrosporum учи­тывают характер расположения спор в пораженном волосе (цепочками или моза­ичное) и результаты люминесцентного анализа. В сомнительных случаях для под­тверждения диагноза идентифицируют культуру гриба.

Люминесцентный анализ. Исследуемый материал помещают в чашки Петри и просматривают под ультрафиолетовыми лучами ртутно-кварцевой лампы типа ПРК-2 или ПРК-4 с фильтром Вуда на расстоянии 20 см в затемненном помеще­нии. Пораженные возбудителем микроспории волосы дают яркое зеленоватое свечение под действием у/ф лучей (возбудители трихофитии не флюоресцируют). Корочки, чешуйки не светятся. Кроме того, люминесценция позволяет провести раннюю диагностику атипичных и скрытых форм микроспории.

Выделение чистой культуры. Делают посевы из культуры гриба на специаль­ные питательные среды — Сабуро, сусло-агар, МПА с 2 % глюкозы, Чапека и неко­торые другие. Перед высевом патматериала на питательные среды иногда прибегают к его обработке 60%-ным спиртом в течение 5-7 минут, а затем дважды отмывают дистиллированной водой и подсушивают в термостате при +37 °С с целью освобож­дения от сопутствующей микрофлоры или в питательные среды добавляют антибио­тики (пенициллин, стрептомицин) из расчета 100—200 ЕД/мл среды. Посевы инку­бируют при температуре +26—28 °С в течение 20—30 суток. У выросших культур грибов изучают культуральные и морфологические свойства.

Возбудители плесневых микозов — это различные виды микроскопических грибов родов Aspergillus, Penicillium, Mucor и др.

Возбудители аспергиллезов относят к высшим несовершенным грибам класса Deuteromyces, рода Aspergillus. Данные грибы — постоянные обитатели организма многих здоровых животных. При нарушении условий содержания и кормления жи­вотных, влекущих снижение резистентности организма, грибы могут стать причи­ной аспергиллеза, а токсинообразующие штаммы вызывают аспергиллотоксикозы.

Аспергиллез — незаразное заболевание домашних и диких птиц, редко млекопи­тающих (крупный рогатый скот, овцы, свиньи, козы, лошади, пчелы). Болезнь ха­рактеризуется гранулематозным поражением органов дыхания, в основном легких. Патологическим материалом служат свежие трупы мелких животных, наложения, узелки, пораженные органы или кусочки их, яйца, соскобы с трупов.

Лабораторный диагноз устанавливают на основании микроскопического исследования препаратов из патматериала и выделения чистой культуры возбудите­ля. Для посева используют агар Чапека, Сабуро, кровяной, мозговой и ку­курузный агары, МПА (рН 5,5—6,5). Гранулематозную ткань обжигают над пла­менем, вырезают стерильно кусочки из середины и раскладывают их на агар в 56 чашке Петри, а экссудат засевают в пробирки со средой, инкубируют при +25 и 37°С На 3—5-е сутки на плотных средах образуются характерные для аспергилл колонии.

A. flavus, A. niger на агаре Чапека образуют разрастающиеся широко коло­нии с обильным спороношением. Цвет колоний зависит от массы конидий, разви­вающихся на конидиеносцах. Под микроскопом обнаруживают бесцветный или светлоокрашенный септированный мицелий. Часто образуются склероции шаро­видной формы, представленные толстостенными клетками.

Возбудители мукоромикоза — различные представители рода Mucor, относя­щиеся к низшим, совершенным грибам класса Oomycetes. Наиболее часто возбудите­лем является М. racemosus. Мукоромикоз (фикомикоз) - хроническое заболева­ние, характеризующееся развитием гранулематозного процесса, сходного с туберку­лезом в лимфатических узлах и в легких, реже в других органах и тканях. К воз­будителю мукоромикоза восприимчивы свиньи, лошади, крупный рогатый скот, ов­цы, пушные звери; из лабораторных животных — морские свинки, мыши. Описаны случаи заболевания человека. Материалом для лабораторного исследования являются гной, некротическая ткань, экссудат, гранулематозная ткань. Диагноз ставят на осно­вании микроскопии патологического материала и выделения чистой культуры. При микроскопии препаратов в положительных случаях обнаруживают несептированный мицелий. В крупных спорангиях на спороносной гифе видны развивающиеся споры. Для старых культур характерно наличие хламидоспор.

Для выделения чистой культуры возбудителя кусочки гранулематозной ткани обжигают над пламенем горелки и стерильно вырезают из середины кусоч­ки, которые раскладывают на поверхности среды Чапека (в чашках Петри) или других сред. Инкубируют посевы при +25—30 °С. Культуры грибов вырастают на третьи сутки в виде войлочных клочковатых серовато-белых колоний, в после­дующем цвет может изменяться до коричневого или бурого.

Микроскопию препаратов, приготовленных из патматериала для исследова­ния на микозы, вызываемые грибами рода Aspergillus, Penicillium и Мисог, прово­дят в два этапа.

Исследуют под микроскопом (X200 - 300) колонии на месте их роста (в чашках Петри). При этом рассматривают расположение конидиеносцев и спор, наличие или отсутствие воздушного мицелия, общее строение конидиеносного аппарата. Изучают под микроскопом элементы гриба в препарате «раздавленная капля».

Возбудители кандидамикоза — дрожжевидные микроскопические грибы из рода Candida, среди которых наибольшего внимания заслуживает гриб Candida albicans, относящийся к высшим несовершенным грибам. Грибы данного рода факультативные паразиты, постоянно обитающие на слизистых оболочках жи­вотных, вызывают заболевание животных — кандидамикоз (кандидоз, монилиоз, молочница и др.), характеризующийся поражением слизистых оболочек пищева­рительного тракта и различных органов и тканей. С. albicans в основном поражает птиц, а также кур, гусей, уток, цесарок, индеек, голубей, фазанов и др. Более тя­жело болезнь протекает у молодняка. Реже болеют поросята, телята, ягнята, щен­ки. Возникновению кандидамикоза способствует понижение резистентности ор­ганизма животных. Кандидамикоз может быть первичным и вторичным (на фоне антибиотикотерапии). Для проникновения гриба в организм животного необхо­дима травма слизистых покровов.

Пат. материалом для исследования являются соскобы со слизистой ротовой полости, пищевода, зоба, налетов, наложений, молоко от коров, больных масти­том, и др. Диагноз ставят на основании микроскопии и выделения чистой культу­ры возбудителя.

Микроскопию патматериала проводят в неокрашенных и окрашенных по Граму, Цилю — Нильсену, Романовскому-Гимзе препаратах. В неокрашенных мазках грибы представлены бесцветными нитями псевдомицелия с перегородками, состоящего из 2—4 вытянутых почкующихся клеток, или густо переплетенным септированным мицелием. Обнаруживают также множество овальных, почкующихся и не почкующихся тонкостенных дрожжевидных клеток — бластоспор, которые име­ют фиолетовый, синий или розовый цвет с мелкозернистыми включениями.

Для получения чистой культуры патматериал высевают на агаризованные среды: агар Сабуро, сусло-агар, МПА с добавлением 2 % глюкозы и др. Так как исследуемый материал загрязнен бактериальной микрофлорой его следует обработать 0,5%-ным раствором фенола, в питательные среды добавляют пенициллин и стрептомицин. Инкубируют посевы при температуре +25—30 °С. Первичные колонии вырастают на 2— 3-й день. Для дифференциации выросшие колонии грибов снова пересевают на различные твердые питательные среды (сусло-агар, Сабуро, кукурузный агар, кровяной 5%-ный агар) и в жидкие цветные среды, содержащие 1 % пептона, 1 % реактива Андрадэ, 2 % глюкозы, сахарозы, лактозы. рН питательных сред 2,5-3,0. На твердых средах грибы рода Candida образуют S - и R-формы. При микроскопии S-формы колоний обнаруживают овальные, иногда почкующиеся клетки, в колони­ях R-формы могут быть и удлиненные клетки псевдомицелия. В жидких средах С. albicans образует пристеночное кольцо и осадок, а на кукурузном агаре — хламидоспоры и бластоспоры.

Контрольные вопросы:

1. Отличительные особенности разных родов дерматомицетов.

2. Патологический материал для исследования на дерматомикозы.

3. Морфологические и культуральные особенности возбудителей дерматомикозов.

4. Люминесцентная микроскопия при дерматомикозах.

5. Возбудители кандидамикоза, аспергиллеза, их культивирование.

6. Патогенные свойства грибов рода Candida.

1.16 Тема: Возбудители микотоксикозов

Цель: Ознакомить студентов с правилами взятия материала для исследования и лабораторной диагностики микотоксикозов.

Задание:

1. Из культур грибов приготовить препараты «раздавленная капля».

2. Изучить под микроскопом.

3. Зарисовать морфологию грибов в тетради.

Материалы и оборудование: Культуры грибов родов Stachybotrys, Fusarium, Dendrodochium на агаре Чапека в чашках Петри; препаровальные иглы или микологи­ческие крючки, предметные и покровные стекла; таблицы и плакаты по данной теме.

Микотоксикозы — отравления животных, возникающие при поедании кор­мов содержащих токсические продукты жизнедеятельности грибов (микотоксины). К микотоксинам чувствительны почти все виды домашних (наиболее - лошади, свиньи, овцы), диких животных, птицы и рыбы. Наименование микотоксикоза происходит от названия токсина или гриба-продуцента токсина. При диагностике этих болезней наибольшее вни­мание уделяют обнаружению токсина, поскольку гриб-продуцент в ряде случаев к моменту исследования погибает и, кроме того, один и тот же микотоксин может синтезировать различные виды грибов. Путь инфицирования - алиментарный.