Микробиология и вирусология (стр. 4 )

Возбудитель пневмококковой инфекции (септицемии) молодняка (диплококковая септицемия) — Str. pneumoniae (Dipl. septicum, Dipl. lanceolatus).

Пнев­мококковая инфекция у молодняка протекает в легочной и кишечной форме. Те­лята болеют в возрасте 2—4 недель или в первые дни после рождения, а также в возрасте нескольких месяцев. Диагностику проводят прижизненную и посмерт­ную. Для прижизненной диагностики в качестве патологического материала на­правляют выделения больных животных. Этот материал внутрибрюшинно вводят белым мышам, после их гибели трупы вскрывают и делают посевы на питатель­ные среды крови из сердца, что позволяет выделить чистую культуру возбудите­ля болезни. Для посмертной диагностики в лабораторию направляют трупы или пораженные участки легких, селезенки, кровь, гной.

Микроскопия. В мазках, окрашенных по Граму и Романовскому-Гимзе Str. pneumoniae имеет форму парных кокков, наружные концы слегка ланцетовид­но заострены, окрашиваются грамположительно. В мазках из пораженной ткани хорошо заметна капсула, покрывающая оба кокка. В культурах капсула не обра­зуется. В мазках из культуры часто располагается короткими цепочками. Размер кокков 0,5—1,5 мкм. Неподвижный, спору не образует.

Культуральные свойства. Str. pneumoniae растет в аэробных и анаэробных условиях при температуре +28-42 °С. Оптимальная температура +37 °С. Лучше растет на средах с кровью и глю­козой, кровяной сывороткой. В жидкой среде (сывороточном МПБ) образует рав­номерное помутнение и небольшой осадок. На сывороточном агаре рост колоний проявляется в виде мелких несливающихся росинок. На кровяном агаре развиваются мелкие сочные колонии с зоной гемолиза.

Биохимические свойства. S. pneumoniae ферментирует углеводы: глюкозу, лактозу, сахарозу, салицин, инулин, мальтозу. Не разжижает желатину, не образует индол, молоко свертывает. Патогенные пневмококки растворяются в желчи, желчнокислых солях. Отношение пневмококков к желчи и разложение инулина имеют дифференцирующее значение (что отличает от других видов стрептококков).

Антигенная структура. Различают несколько типов пневмококков, что вы­является в реакции агглютинации. Установлено наличие общего протеинового группового антигена и типовых специфических капсульных полисахаридов, от­личающихся по своей химической структуре и антигенным свойствам. Их обо­значают римскими цифрами 1,11, III... X. Str. pneumoniae идентичен тип I (у челове­ка вызывает крупозную пневмонию).

Патогенность S. pneumoniae определяют биопробой: внутрибрюшинно за­ражают белых мышей в дозе 0,5 мл бульонной культуры, разведенной в милли­он раз (1:1000000). Мыши гибнут на 2—3-й день. Для кроликов требуется больше доза.

Таким образом, заключительный бактериологический диагноз, имеющий решающее значение, основывается на выделении чистой культуры возбудителя из патматериала, установлении ее типичных видовых свойств и патогенности для лабораторных животных.

Контрольные вопросы:

1. Правильность взятия проб молока для исследования на мастит.

2. Культурально-морфологические и ферментная характеристики Str. pneumonia.

3. Назначение САМР-пробы.

4. Бактериологическая диагностика мыта лошадей, дифференциация возбудителя от других стрептококков.

5. Латинское название, общая характеристика возбудителя пневмококковой септицемии молодняка, его дифференциация от других видов стрептококков.

1.3 Тема: Возбудитель рожи свиней

Цель занятия: Ознакомить студентов со свойствами возбудителя рожи свиней, а также методами бактериологической диагностики данного заболевания.

Задание:

1. Ознакомиться с культуральными свойствами рожи свиней.

2. Приготовить мазки из культуры возбудителя, окрасить их по Граму, микроскопировать.

3. Произвести вскрытие трупов мышей, сделать посевы на МПБ, МПА, МПЖ, из крови, сердца, паренхиматозных органов.

4. Сделать мазки-отпечатки, окрасить их по Граму и люминесцирующей рожи­стой сывороткой, микроскопировать.

5. Поставить реакцию агглютинации на стекле для идентификации возбудителя рожи свиней.

Материалы и оборудование: Трупы мышей (голубей), павших после заражения вакцинным штаммом возбудителя рожи свиней; набор инструментов для вскры­тия животных; скошенный МПА, МПБ, МПЖ в пробирках; пастеровские пипетки; культуры возбудителя рожи свиней на средах Гисса с глюкозой, лактозой, маннитом, в МПБ с индикаторной бумажкой на сероводород; биопрепараты.

Классификация:

Отдел – Firmicutes

Секция – 14, неспорообразуюшие

грамположительные палочки.

Порядок – Eubacteriales

Семейство – Corynebacteriaceae

Род – Erysipelothrix.

Вид – Erysipelothrix rhusiopathiae.

Рис. 4 Поражения при роже свиней:

1 – труп свиньи, павшей при остром течении болезни;

2 – труп свиньи, павшей при подостром течении

(крапивнице);

3 – прямоугольные,

ромбовидные эритематозные пятна при крапивнице (а – в начальной стадии, б – в стадии развития);

4 – некроз кожи у подсвинка при хроническом течении болезни;

5 – фибринозные наложения на клапанах сердца (бородавчатый эндокардит).

Возбудитель рожи свиней — Erysipelothrix rhusiopathiae вызывает инфекционную болезнь (зооантропоноз), которая характеризуется при остром течении явлениями септицемии и воспалительной эритемой (появление красных разлитых пятен на коже), а при хрони­ческом — эндокардитом и артритами. Из сельскохозяйственных животных наиболее восприимчивы свиньи в возрасте от трех месяцев до 1 года, ягнята – старше 3-4 недель и реже другие виды. К возбудителю рожи свиней чувствительны также многие виды млекопитающих и птиц.

Источником возбудителя инфекции бывают многие виды домашних и диких животных: свиньи (в первую очередь), овцы, крупный рогатый скот, олени, грызуны, птицы, рыбы, моллюски, ракообразные. Больные животные выделяют возбудителя с мочой и испражнениями, загрязняя растения, почву и воду, поэтому между ними преобладает пищевой (алиментарный) путь заражения. Кроме того, возможен и трансмиссивный путь передачи возбудителя инфекции через различных клещей и насекомых через поврежденные кожные покровы и слизистые оболочки

Патологический материал. Для бактериологического исследования направ­ляют труп животного целиком или паренхиматозные органы (сердце, печень, селе­зенка, почка), трубчатую кость; при подозрении на хроническое течение — сердце. Свежий материал посылают в нативном виде или его консервируют 30 %-ным вод­ным раствором химически чистого глицерина. Трубчатую кость очищают от мягких тканей, обертывают марлей, пропитанной 2—3 %-ным раствором фенола.

Рис. 5 Окраска люминесцентной сывороткой. Рис. 6 Окраска по Граму.

Микроскопия. Из патологического материала готовят мазки-отпечатки, окрашивают их по Граму и методом флуоресцирующих антител. В положительном случае в мазках, окрашенных по Граму, обнаруживают мелкие грамположительные палочковидные бактерии, располагающиеся одиночно, попарно или в виде скоплений, и длинные переплетающиеся нити в мазках из пораженных клапанов сердца. В препаратах, окрашенных флуоресцирующей сывороткой, положитель­ным результатом считается обнаружение бактерий с типичной для возбудителя рожи свиней морфологией и специфическим (контурным) свечением с интенсивностью не ниже чем на три креста. При сомнительных или отрицательных ре­зультатах (слабое свечение, атипичная форма микроба, отсутствие свечения) проводят бактериологическое исследование, включающее выделение и идентифика­цию возбудителя, по общепринятой схеме. Возбудитель рожи свиней неподвижен, спор и капсулу не образует.

Культуральные свойства. Проводят посевы в МПБ или бульон Хоттингера, на МПА. Посевы инкубируют в термостате при +37 °С в течение 18— 24 часов, при отсутствии роста - еще 24 часа. Е. rhusiopathiae — аэроб, микроаэрофил (лучше растет при 5—10 % С02), температурный оптимум +37 °С, рН 7,2—7,6. На МПА возбудитель рожи образует мелкие прозрачный росинчатые коло­нии (S-формы), но встречаются и R-формы — крупные, с неровной волокнистой поверхностью, с отходящими от края корнеобразными отростками, обнаружива­ют их обычно при хроническом течении болезни. Посевы на МПА лучше про­сматривать под микроскопом или с помощью лупы. В мазках из колоний S-формы находят короткие прямые или слегка изогнутые стройные палочки, из ко­лоний R-формы — цепочки или нити, часто грамотрицательные.

Чистую культуру пересевают на полужидкий 0,2%-ный агар (для определения подвижности макрометодом), мясопептонную желатину, пептонную воду с полоской реактивной бумаги (для изучения возможности возбудителя выделять сероводород), на среды Гисса с углеводами, на индикаторные среды, в две пробирки с мясопептонным бульоном для проб на образование каталазы

Биохимические свойства. Возбудитель рожи свиней выделяет сероводород, не образует каталазу, разлагает с образованием кислоты без газа глюкозу, лакто­зу, не разлагает сахарозу, маннит.

Серологическая идентификация. Применяют РА (пробирочный и микрометод). На предметное стекло наносят каплю им­мунной противорожистой сыворотки в разведении 1:50, затем петлей в ней эмульгируют суточную агаровую культуру. Если выделенный микроб является возбудителем рожи свиней, происходит быстрая агглютинация с образованием плотных мелких комочков.

Обнаружение и идентификация возбудителя рожи свиней в чистых, смешанных культурах и патологическом материале определяют также с помощью люминесцирующей рожистой сыворотки, РНГА, РТГА..

Биопроба. Мышам массой 16—18 г подкожно вводят суспензию из паренхи­матозных органов или смыв 1—2-суточной агаровой культуры в дозе 0,1—0,2 мл. Возбудитель рожи вызывает гибель животных через 2—4 суток. В более поздние сроки погибают животные, зараженные суспензией из материала от свиней-хроников или слабовирулентными культурами. Павших животных вскрывают и из их органов делают посевы в МПБ и на МПА с целью выделения чистой культуры.