Микробиология и вирусология (стр. 16 )

1) культивирова­ние микобактерий паратуберкулеза возможно только на средах с добавлением фактора роста;

2) лабораторные животные невосприимчивы к возбудителю паратуберкулеза.

Серодиагностика паратуберкулеза проводится РСК с пробами сыворотки крови по общепринятой методике (с паратуберкулезным антигеном Сибирского НИИ, представляющим собой метаноловый экстракт микробной массы М. paratuberculosis).

В ветеринарной практике широко используют аллергический метод диаг­ностики паратуберкулеза в соответствии с действующей инструкцией — двойной внутрикожной пробой туберкулином (для птиц) или паратуберкулином.

Контрольные вопросы:

1. Морфологические, тинкториальные особенности М. tuberculosis;

2. Питательные среды для культивирования микобактерий, культуральные свой­ства и идентификация видов микобактерий туберкулеза;

3. Дифференциация микобактерий от кислотоустойчивых сапрофитов;

4. Особенности биопробы при диагностике туберкулеза и как дифференцирующий критерий от возбудителя паратуберкулеза;

5. Патологический материал, его подготовка и бактериологическое исследование для диагностики туберкулеза;

6. Морфологические, тинкториальные и биологические особенности возбудителя паратуберкулеза, его дифференциация от возбудителя туберкулеза.

1.12 Тема: Возбудитель актиномикоза

Цель занятия: Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики актиномикоза.

Задание:

1. Изучить морфологические особенности возбудителя в патологическом материале и в

культуре;

2. Ознакомиться с культуральными свойствами A. bovis.

Материалы и оборудование: Окрашенные микроскопические препараты из актиномиком, культуры возбудителя актиномикоза на плотных питательных средах, а также таблицы.

Классификация:

Отдел – Firmicutes;

Секция – 14, неспорообразующие внутриклеточные Г “+” палочки;

Порядок – Actinomycetales - нитевидные, ветвящиеся клетки;

Семейство – Actinomycetaceae;

Род – Actinomyces;

Виды – Actinomyces bovis.

Возбудитель актиномикоза — бактерия A. bovis. Актиномикоз — хрони­чески протекающая болезнь животных и человека, характеризующаяся образова­нием в различных тканях плотных, четко ограниченных припухлостей — актиномиком, подверженных некротическому распаду. Наиболее восприимчивы к актиномикозу крупный рогатый скот, болеют также лошади, овцы, свиньи и дру­гие виды животных. У человека актиномикоз вызывается другим видом бактерий — A. israelii.

При подозрении на актиномикоз в лабораторию направляют пораженные лимфатические узлы в 30%-ном растворе глицерина, взятый стерильно гной из абс­цессов. Материал для исследований должен быть свежим. Бактериологический ди­агноз устанавливают на основании результатов микроскопии препаратов из нативного неокрашенного материала и препаратов, окрашенных по Граму. Если микро­скопическое исследование дает положительный результат, то этого достаточно для постановки диагноза. При отрицательном результате микроскопии производят вы­севы на питательные среды с целью выделения культуры возбудителя.

Рис.17 Друзы актиномицетов, окрашенные по Граму

Микроскопия. Для A. bovis характерно различие морфологии бактерий в препаратах из пат. материала и в чистой культуре. В пат. материале отыскивают твердые, серовато-белые зернышки с зеленоватым оттенком — друзы, которые представляют собой скопление клеток возбудителя. Их промывают в дистиллированной воде и переносят на предметное стекло в каплю с 10—20 %-ным раствором NaOH или КОН и выдерживают в течение 15 минут или слегка подогревают над пламенем горелки. Затем в препарат вносят каплю 50%-ного водного раствора глицерина, накрывают его покровным стеклом («раздавленная капля») и исследу­ют под микроскопом под малым увеличением или с помощью иммерсионной сис­темы Друза имеет гомогенный центр, состоящий из густо переплетенных ните­видных палочек, булавовидно-утолщающихся к периферии. В препарате, окра­шенном по Граму, центр друзы окрашивается в фиолетовый цвет (грамположительно), а периферическая часть — в розовый (грамотрицательно). Такая микро­скопическая картина характерна и имеет диагностическое значение. Друзы в экс­судате могут быть не всегда, несмотря на наличие отдельных клеток возбудителя. В препаратах из 10—15-дневных культур, выращенных на питательных средах и окрашенных по Граму, A. bovis имеет вид грамположительных палочек; они неподвижные, неспорообразующие, некислотоустойчивые.

Культуральные и биохимические свойства.

Для культивирования A. bovis используют МПА с 1% глюкозы, среду Китта-Тароцци, полужидкий МПА с 1% глюкозы, кровяной или сывороточный агар. Темпера-турный оптимум +37—38°С. Возбудитель может расти в аэробных и анаэробных условиях; рост замедлен­ный, макроскопически видимые колонии появляются через 7-14, а иногда через 15—30 дней культивирования. На МПА с глюкозой в аэробных условиях колонии в начале роста белые, мягкой консистенции с ровными краями, нередко с клиновидными выступами по периферии.

Рис.18 Колонии актиномицетов на поверхности агара.

Со временем они приобретают светло-коричневую окраску, становятся сухими, плотными, с неровной поверхностью и врастающие в глубь среды. В анаэробных условиях на глюкозном агаре формируются гладкие, выпуклые, непрозрачные влажные колонии. На кровяном МПА с 1% глюкозы в анаэробных условиях вокруг колоний видна слабая зона гемолиза. На полужидком МПА — колонии желтовато-белого цвета, округлые. В сывороточном рост характеризуется образованием осадка в виде зернышек. Это густое скопление нитей мицелия. По мере старения культуры на поверхности бульона появляется морщинистая пленка желтоватой окраски. МПБ В мазках из культур, выращенных в анаэробных условиях, преобладают короткие палочки, а в аэробных — нити и цепочки из палочек; и те и другие окрашиваются грамположительно.

A. bovis ферментирует с образованием кислоты глюкозу, левулезу, галактозу, глицерин. Разжижает желатин.

Биопроба: Вырочшую культуру используют для внутримышечного заражения крольчат, которых через 3-4 недели убивают и исследуют с целью диагностики.

Контрольные вопросы:

1. Патматериал и порядок исследования на актиномикоз;

2. Питательные среды для культивирования возбудителя актиномикоза.

3. Морфологические, культуральные и тинкториальные свойства возбудителя

актиномикоза.

1.13 Тема: Возбудитель кампилобактериоза

Цель занятия: Усвоить характерные особенности возбудителя кампилобактериоза и методы бактериологической и серологической диагностики данного заболевания

Задание:

1. Окрасить мазок по методу Романовского-Гимза;

2. Окрасить мазок по Граму;

3. Просмотреть мазок под микроскопом и картину зарисовать в тетради.

Материалы и оборудование: Культуры кампилобактера (вибриона) в полужидкой среде, в среде Китта — Тароцци и на плотной среде; фиксированные (неокрашен­ные) препараты (мазки), содержащие кампилобактерии; таблицы и биопрепараты.

Классификация:

Отдел – Firmicutes;

Секция – 2, спириллы (изогнутые аэробы);

Порядок – Pseudomonodales;

Семейство – Spirillaceae;

Род – Spirillum (или Campylobacter);

Виды – C. foetus, C. jejuni, С. sputorum, С. fecalis,

Кампилобактериоз (вибриоз) — хроническое заболевание крупного рогато­го скота и овец, характеризуется главным образом абортами, бесплодием, гибе­лью молодняка, задержанием последа, метритом, вагинитом. У овец массовые аборты проявляются обычно во второй половине суягности.

Возбудитель кампилобактериоза — Campylobacter fetus (foetes), относя­щийся к роду Campylobacter, семейству Spirillaceae.

С. fetus подраз­деляется на три подвида: С. fetus subsp. fetus (патогенный для крупного рогатого скота, морских свинок и куриных эмбрионов), С. fetus s. intestinalis (вызывает аборты у овец, спорадически у коров), С. fetus s. jejunum (вызывает аборты у овец, содержится в кишечнике здорового крупного рогатого скота, свиней, птиц).

Патологический материалом служат абортированный плод, плацента, слизь с шейки матки, взятая стерильно в первые 3—4 дня после аборта или в пе­риод охоты. От быков-производителей направляют препуциальную слизь и секрет придаточных половых желез; от животных, убитых с диагностической це­лью,— матку, влагалище, лимфоузлы тазовой полости (доставлять свежими или охлажденными на льду).

Микроскопия. Готовят мазки, окрашивают по Граму или фуксином Циля, раз­веденным дистиллированной водой 1 : 5 (1—2 минут). Кампилобактерии окраши­ваются грамотрицательно, полиморфные — встречаются в виде удлиненных спи­рилл, мелких кокков, «летящих чаек», в молодых культурах часто имеют вид запя­той, встречаются и S-образные формы. Длина 1,5—7 мкм, диаметр 0,2— 0,5 мкм. Подвижность осуществляется за счет одного полярного жгутика (иногда по одному жгутику на обоих концах). Движение прямолинейное. При окраске по методу Романовского — Гимза в цитоплазме клетки обнаруживают зернистость (особенно в концевых участках). Спор и капсул не образуют. Препараты (мазки из патматериала и культур) можно исследовать посредством метода РИФ (иммуннофлуоресценции).

Культивирование и культуральные свойства. Кампилобактеры — микроаэрофилы. Учитывая это, его культивируют в присутствии 10 % СО2 при температу­ре +37—38 °С. Для первичного получения культуры высев из патологического материала осуществляют в полужидкие и на плотные питательные среды с до­бавлением крови или кровяной сыворотки. В полужидком печеночном агаре (0,2 %-ный) появляется рост культуры кампилобактера через 2—7 суток вблизи по­верхности среды в пробирке в виде серовато-белого, серовато-голубоватого дис­ка; без пересева культура выживает не более 10—12 дней. Для более длительного сохранения кампилобактер культивируют в среде Китта — Тароцци и сохраняют холоде (4 °С). На 2 %-ном мясо-пептонном печеночном агаре проявляется сла­бый рост с 3—4-го дня в виде мелких колоний или сплошного налета. В кровя­ном или сывороточном бульоне рост скудный в виде нежного облака. Каждую пробу высевают на несколько чашек Петри, растирая шпателем по поверхности агара. Рост характеризуется появлением мелких росинчатых голубоватых колоний, которые затем пересевают на полужидкий кровяной, сывороточный агар или среду Китта-Тароцци (для получения чистой культуры). Не растет в МПБ с добавлением 3,5 % NaCl.