Разработка эффективных компонентов среды для криоконсервации спермы хряков (стр. 17 )

В опытах по изучению темпа разбавления спермы проводили в нескольких вариантах: среду приливали к сперме мгновенно, а также порциями в течение 2; 3 и 4 минут. Установлено, что если температура и осмотическое давление среды и спермы строго одинаковы, замедленное разбавление не имеет преимуществ перед мгновенным. Однако даже при небольших различиях в температуре или осмотическом давлении замедленное разбавление обеспечивало более высокий абсолютный показатель живучести половых клеток хряков.

Изучено также влияние степени разбавления спермы средой ГЦДУ на абсолютную живучесть гамет хряков (табл. 22). Наиболее высокий абсолютный показатель живучести половых клеток, обнаружена при разбавлении спермы в соотношениях от 1:0,5 до 1:4. Такие степени разбавления эякулятов получила наибольшее распространено в практике искусственного осеменения свиней.

Установлено, что наиболее оптимальными степенями разбавления спермы хряков средой ГЦДУ явлются от 1:1 до1:3. в этом промежутке половые клетки хряков показывают лучшие активности и живучести. Поэтому и рекомендуем при использовании среды ГЦДУ в зависмости от концентрации сперматозоидов эякуляте лучше придерживатся степень разбавление 1:2.

Именно такой степень разбавление показал высший результат (+5%) по сохранению жизнеспособности половых клеток хряков.

Рисунок 4- Влияние выдержки перед разбавлением спермы хряков

Таблица 22- Влияние степени разбавления спермы средой ГЦДУ на абсолютную переживаемость сперматозоидов.

Степень разбавления	АПЖ, % от контроля	Степень разбавления	АПЖ, % от контроля
1 : 0,5	94	1 : 3	94
1 : 1	100	1 : 3,5	91
1 : 1,5	100	1 : 4	80
1 : 2	105	1 : 4,5	72
1 : 2,5	98	1 : 5	73

Для установления оптимального температурного режима хранения спермы в среде ГЦДУ пробы разбавленной спермы хранили в диапозоне температур от 12 до 22 0С (табл.23, рис. 5).

Таблица 23- Исследование диапозона температур для хранения спермы хряков в среде ГЦДУ

Температура хранения спермы хряков в среде ГЦДУ, 0С	Абсолютный показатель живучести сперматозоидов (АПЖ), усл. ед.	АПЖ, % от максимума
12	653	55,4
14	821	69,8
16	1140	96,7
18	1179	100,0
20	806	67,9
22	667	57,1

Исследованиями установлено, таблица 23, что температура +18 0С обеспечивает наиболее высокую переживаемость спермы хряков-производителей и поэтому нами рекомендуется хранить разбабленной с ГЦДУ в этой температуре.

Главным показателем сперматозоидов являются оплодотворяющая способность яйцеклеток самок. Поэтому нами проведены исследования по сохранность оплодотворяющей способности сперматозоидов хряков, храненной в новой среде и качество полученного потомства.

В таблице 24 приведены результаты опыта по изучению оплодотворяющей способности сперматозоидов, сохраненных в средах ГЦДУ и ГХЦС-8. Из таблицы 24 видно, что оплодотворяемость свиноматок, осемененных спермой сохраняемой в среде ГЦДУ, значительно выше, чем при использовании среды аналога ГХЦС-8. Установлено, что в новой среде ГЦДУ оплодотворяющая способность сперматозоидов сохраняются три (75,0-91,6%) более суток, а в широко используемой среде ГХЦС-8 двое суток.

Такие разницы по сохранности оплодотворяющей способности сперматозоидов позволит на одну треть сократить поголовья хряков-производителей, сэкономить корма на 30-33% и использовать освободившие помещения для содержания свиноматок и получать дополнительную продукцию, для искусственного осеменения использовать только высокоценных, проверенных по качеству потомства производителей.

Рисунок 5- Установление диапозона температур для хранения спермы хряков в среде ГЦДУ

Таким образом, разработанная новая среда по сравнению с существующими аналогами имеет следующие основные преимущества:

- введенные в состав разбавителя унитиола и дитиотреитола позволяет защитить от окисления структурных сульфгидрильных групп сперматозоидов, а также тиоловых ферментов плазмы и половых клеток (особенно группы дегидрогеназ). В результате чего сохраняются структурные элементы половых клеток, что в свою очередь способствуют увеличение жизнеспособности гамет самцов. Сохранение активности ферментов групп дегидрогеназ обеспечивают нормального протекания обмен веществ сперматозоидов.

- вновь введенные тиоловые соединения способствуют более продолжительный период целостность акросом гамет в условиях in vitro и тем самым способствуют продолжительность времени сохранения оплодотворяющей способности сперматозоидов;

Таблица 24- Результаты осеменения свиноматок спермой храненных в средах ГЦДУ и ГХЦС-8

Срок хранения спермы, сут.	Осеменено свиноматок	Оплодот-воряемость %	Получено поросят на опорос, гол.	Средняя масса поросенка, кг
при рождении	в 1 мес.	в 2 мес.
Среда ГЦДУ
0	12	91,6	9,85	1,24	6,28	14,85
1	12	91,6	9,12	1,30	6,48	15,02
2	13	84,6	9,34	1,28	6,55	14,86
3	12	75,0	8,92	1,25	6,65	14,90
4	12	66,6	8,76	1,37	6,34	15,25
5	12	66,6	8,42	1,34	6,45	15,13
Среда ГХЦС-8
1	12	91,6	9,75	1,32	6,28	14,64
2	12	83,3	9,05	1,29	6,37	14,59
3	12	66,6	8,48	1,31	6,38	14,56

- вновь введенные тиоловые реагенты стабилизирует процессы окислительного фосфорилирования спрематозоидов;

- увеличение срока сохранности оплодотворяющей способности сперматозоидов (до 5 суток) позволит на одну треть сократить поголовья хряков-производителей, сэкономить корма на 30-33% и использовать освободившие помещения для содержания свиноматок, получать от них дополнительную продукцию, а также для искусственного осеменения использовать только высокоценных, проверенных по качеству потомства производителей (рис. 6).

Таким образом, в современных условиях ведения свиноводства страны наиболее выгодно и удобно применение метода искусственного осеменения свиноматок и в качетстве разбавителя спермы хряков использовать новой разработанной для спермы хряков глюкозо-цитрато-дитиотреитоло-унитиоловой среды. Применение метода искусственного осеменения свиноматок и новой среды для разбавления спермы хряков позволит использовать только высокоценных, проверенных по качеству потомства производителей. экономного использования кормов и помещения для содержания животных.

Рисунок 6- Основные преимущества нового разбавителя спермы хряков ГЦДУ по сранению существующими аналогами

3.2 Разработка среды для криоконсервации спермы хряков с использованием тиоловых соедиений

3.2.1 Использование диализной камеры при криоконсервации спермы хряков

Качество спермы хряков, ее способность к длительному хранению, а, следовательно, оплодотворяемость и многоплодие свиноматок зависят не только от биологических особенностей спермы, но и от технологии ее получения. Основными показателями качества спермы на промышленных комплексах являются три основных показателя: подвижность (балл), объем (мл) и концентрация (млн/мл).

В настоящее время в крупных свиноводческих хозяйствах страны вместо ранее широко использовавшегося метода получения спермы на искусственную вагину все чаще используется мануальный. Метод более прост в применении, при его использовании не требуется предварительной подготовки вагины и поддержания ее температурных условий.

По данным литературы, от хряков получают эякуляты, имеющие средний объем 250 мл с концентрацией сперматозоидов 0,2 млрд\мл и активностью 8 баллов. В эякуляте должно содержаться 40 млрд поступательно-подвижных сперматозоидов.

Целью наших исследований на этом этапе являлось изучение количественных и качественных показателей спермы, получаемой мануально от хряков датской селекции различных пород, а также их сравнение с показателями диализированной спермы этих же хряков, чтобы последующей криоконсервации спермы использовать данный метод.

Приведенные данные в таблице 25 свидетельствуют о том, что хряки, выращенные в условиях датской фермы до 6-месячного возраста, имеют сперму с высокой концентрацией, но низкой подвижностью. Следует отметить, что самые низкие показатели активности сперматозоидов оказались у хряков породы ландрас. Из имеющихся трех ландрасов один оказался крипторхом и использовался только в качестве пробника. Невысокие показатели подвижности сперматозоидов у хряков породы дюрок компенсировались хорошими показателями переживаемости спермы.