Разработка эффективных компонентов среды для криоконсервации спермы хряков (стр. 23 )

Таблица 43- Влияние цистеина (10·10-3 М), добавленного в среду ГХЦЖК на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков

Показатели	Варианты опыта
ГХЦЖК (контроль)	ГХЦЖК + цистеин (опыт)	Разница ±	%
Подвижность, баллов	3,0±0,01	3,1±0,02	+ 0,1	3.3
Скорость движения, мкМ/с	95,4±6,34	95,8±8,03	+ 0,4	0,4
Абсолютный показатель живучести, ч	2,5±0,01	2,9±0,01	+ 0,4	16,0
Время редукции метиленовой сини, мин	16,5±0,68	15,7±1,97	- 0,8	5,1
Сохранность SН-групп, %	62,4±4,83	67,8±7,12	+ 5,4	8,6
Число поврежденных акросом, %	31,5±2,89	28,7±2,23	- 2,8	-8,9
Активность общих дегидролгеназ, мин	54,1±5,45	52,2±3,76	- 1,9	-3,6
Активность цитохромоксидазы, мин	6,8±0,86	7,9±0,79	+ 1,1	16,2

Так при добавлении реагента в концентрации 10·10-3 М в глюкозо-хелато-цитратно-желточно-калиевую среду подвижность, скорость движения, сохранность SН-групп и абсолютный показатель живучести заморожено-оттаянных сперматозоидов повышается от 3,3% до 16,4%. Однако, почти без изменении остаются активности ферментов общих дегидролгеназ и цитохромоксидазы.

Цистеин при концентрациях 10-3 М вызывал достоверное увеличение выживаемости криоконсервированных сперматозоидов, но не повлиял на их абсолютный показатель живучести. Все остальные концентрации цистеина не оказали достоверного влияния на выживаемость и абсолютный показатель живучести гамет как указано в таблице 44.

Меркаптоэтанол по данным таблицы 45, в концентрациях 3,9·10-4 и 5·10-2М снижал выживаемость и абсолютный показатель живучести сперматозоидов после замораживания-оттаивания. Концентрации меркатоэтанола 6,25·10-3 - 2,5·10-2 М приводили к значительному увеличению (22-47%) абсолютного показателя живучести замороженно-оттаянных сперматозоидов. Но при этом установлены, что реагент не оказывает достоверного влияния на выживаемость сперматозоидов в периоды криоконсервации.

Степень влияния β-меркаптоэтанола, на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков несколько выше чем цистеина (табл.46) При добавлении β-меркаптоэтанола к криоконсервирующей среде сохранность акросом половых клеток после оттаивании была равна 74,6%. Следует отметить, что достаточно высокий показатель для спермы хряков.

Таблица 44- Влияние цистеина на активность и абсолютную показатель живучести (АПЖ) сперматозоидов после

их замораживания-оттаивания

Концентрация цистеина, М	Активность через	Абсолютный показатель живучести
0,5 часа	2 часа	в часах (М±m)	Р	%	Р
М±m	Р	М±m	-
ГХЦЖК (контроль)	33,8±2,3		12,8±1,7	0,05	5,01±0,3	-	100,0	-
10·10-2	30,4±2,4	0,05	16,7±1,4	0,05	5,02±0,4	0,05	100,4	0,01
10·10-3	39,1±2,2	0,05	16,9±1,2	0,01	4,38±0,2	0,05	87,4	0,05
10·10-4	35,7±2,3	0,01	15,6±1,3	0,01	4,26±0,3	0,01	85,0	0,01
10·10-5	32,7±2,1	0,01	13,4±1,1	0,05	4,91±0,1	0,01	98,1	0,01
10·10-6	34,6±2,0	0,05	13,5±1,0	0,05	4,05±0,9	0,05	80,1	0,05
10·10-7	33,3±2,2	0,05	16,3±1,8	0,05	4,02±0,8	0,05	80,2	0,05

Таблица 45- Влияние β-меркаптоэтанола на активность и абсолютную показатель живучести (АПЖ)

сперматозоидов после их замораживания-оттаивания

Концентрация β-меркапто-этанола, М	Подвижность сперматозоидов через	Абсолютную показатель живучести сперматозоидов
0,5 часа	2 часа	в часах (М±m)	%	Р
М±m	Р	М±m	Р
ГХЦЖК–контроль	32,1±2,9	-	18,2±1,9	-	4,88±0,3	100,0	-
10-2	15,2±2,4	0,05	-	0,01	0,87±0,4	17,8	0,01
5·10-2	164±2,2	0,05	-	0,01	2,21±0,2	45,2	0,05
2,5·10-2	33,6±2,3	0,01	15,8±1,6	0,01	5,86±0,3	120,1	0,01
1,25·10-2	33,2±2,1	0,01	20,6±3,1	0,05	5,91±0,1	121,1	0,01
6,25·10-3	28,1±2,0	0,05	15,9±2,8	0,05	7,01±0,9	143,6	0,05
3,12·10-3	25,7±2,2	0,05	17,3±2,8	0,05	5,95±0,8	121,9	0,05
1,56·10-3	27,9±2,1	0,1	18,6±3,1	0,1	4,48±0,9	91,8	0,1
7,8·10-4	28,0±2,9	0,2	12,6±2,1	0,1	3,37±0,8	69,0	0,2
3,9·10-4	21,9±2,8	0,1	12,8±1,1	0,1	3,37±0,7	69,0	0,2

Добавление реагента к среде ГХЦЖК также способствуют сохранность внутриклеточных сульфгидрильных групп (70,9%) половых клеток хряков. При включении β-меркаптоэтанола (6,25·10-3М) в среду ГХЦЖК приводит к повышению абсолютный показатель живучести криоконсервированных сперматозоидов. После оттаивании продолжительность жизнеспособности увеличивается на 0,9 ч или на 36.0%. Не обнаружено изменение активности ферментов (дегидрогеназ и цитохромоксидаз), они практически остались на уровне контрольной группы (рис.7).

Таблица 46- Влияние β-меркаптоэтанола (6,25·10-3М), добавленного в среду ГХЦЖК на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков

Показатели	Варианты опыта
ГХЦЖК (контроль)	ГХЦЖК + β-меркаптоэтанола (опыт)	Разница ± ед.	%
Подвижность, баллов	3,0±0,01	3,2±0,01	+ 0,2	6,7
Скорость движения, мкМ/с	95,4±6,71	95,7±6,93	+ 0,3	0,3
Абсолютный показатель живучести, ч	2,5±0,01	3,4±0,01	+ 0,9	36,0
Время редукции метиленовой сини, мин	16,5±0,74	15,8±1,32	- 0,7	-4,4
Сохранность SН-групп, %	62,4±5,17	70,9±6,48	+ 8,5	13,6
Число поврежденных акросом, %	30,9±2,04	25,6±2,31	- 5,3	-20,7
Активность общих дегидролгеназ, мин	54,8±4,95	53,3±4,15	- 1,5	-2,8
Активность цитохромоксидазы, мин	7,5±0,79	7,3±0,79	- 0,2	-2,7

Таким образом из изученных тиоловых реагентов (цистеамин, цистеин и меркаптоэтанол) наиболее положительное влияние на сперматозоиды хряков оказал β-меркаптоэтанол. При добавлении этого реагента к консервирующей глюкозо-хелато-цитратно-желточно-калиевую среду у сперматозоидов после оттаивании, обнаружено достаточно высокая функциональную полноценность и пригодность к использованию для осеменении свиноматок.

Рисунок 7- Влияние β-меркаптоэтанола на качественные показатели спермы

3.3.2 Влияние унитиола на активность и абсолютную показатель живучести криоконсервированных сперматозоидов

Ранее нами указано, что (раздел 3.1.2), что унитиол в широком диапозоне концентрации увеличивает абсолютную показатель живучести сперматозоидов при кратковременном хранении спермы хряков. Реагент снижает число сперматозоидов с поврежденными акросомами, стабилизирует содержание сульфгидрильных групп гамет и плазмы спермы, сохранности активности тиоловых ферментов и увеличивает абсолютный показатель живучести и оплодотворяющую способность сперматозоидов.