Разработка эффективных компонентов среды для криоконсервации спермы хряков (стр. 19 )

Таблица 30- Показатели спермы, рекомендуемой для криоконсервации и осеменения

Показатели	Свежеполученная	После холодового удара	Заморожено-оттаянная
Подвижность, баллов	более 8,0	более 3,0	более 3,0
Время выживания, ч	-	более 5,0	более 5,0
Время редукции метиленовой сини, мин	менее 5,0	менее 15,0	менее 20,0
Неповрежденные акросомы, 5	более 95,0	более 80,0	более 70,0

Таким образом, нами установлены, что для замораживания следует отбирать, сперму с подвижностью сперматозоидов не менее 8,0 баллов и концентрацией не ниже 150 млн/мл, поврежденные акросомы не должны составлять более 5%.

Описанные методы оценки криоустойчивости и прогнозирования оплодотворяющей способности спермы были апробированы в производственных опытах (табл. 31).

Таблица 31 - Методика оценки криоустойчивости спермы хряков и оплодотворяющая способность сперматозоидов

Показатели	Свежеполу - ченная	После холодового удара	Заморожено-оттаянная	Оплодотворяе-мость свиноматок
Подвижность, баллов	8,9	4,2	3,7	38,5
Время выживания, ч	-	6,3	3,8	37,6
Время редукции метиленовой сини, мин	4,1	11,7	16,6	39,2
Неповрежденные акросомы,	96,3	83,1	74,3	38,8

Исследовались 66 эякулятов от 6 хряков и осеменено 40 свиноматок. Фактическая оплодотворяемость свиноматок составила 38,3%.

Таким образом методика предложенная нами полностью оправдывает себя. Фактически полученная оплодотворяющая способность заморожено-оттаянной спермы совпали с теоретически ожидаемой, что подтверждает надежность отбора спермы для криоконсервации и практического использования в производственных условиях.

3.2.3 Исследование взаимосвязи показателей качества спермы с ее криоустойчивостью

С целью разработки методов отбора спермы для замораживания нами были поставлены опыты по изучению связи оплодотворяющей способности замороженно-оттаянной спермы отдельных хряков с физиологическими и биохимическими показателями свежеполученной спермы этих животных. Свежеполученные эякуляты 10 подопытных хряков были исследованы по следующим показателям – активности сперматозоидов, концентрации спермы, общей активности дегидрогеназ по времени редукции метиленовой сини, активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и глутаматоксалаттрансаминазы (ГОТ), дыханию и стимуляции дыхания янтарнокислым калием и 2,4-динитрофенолом. После оценки сперму замораживали по 8 - 10 эякулятов от каждого хряка и осеменяли свиноматок на свиноводческом хозяйстве “Достык”. Результаты наших исследований показали, что оплодотворяющая способность (ОС) замороженной спермы от хряков отобранных в опыт по зоотехническим показателям варьировала от 12,5 до 85,7%, при этом лишь у трех животных (33% от общего числа) сперма после замораживания-оттаивания сохранила оплодотворяющую способность более 50% (табл. 32)

Таблица 32- Зоотехнические и физиологические показатели спермы подопытных хряков

Номера хряков	Объем эякулята, мл	Концентрация, млн/мл	Активность, балл	Оплодотворя-емость, %
117	193+9,3	300+20,9	8,3+	33,3
291	275+12,0	229+30,1	8,3+	48,9
319	270+48,4	258+27,5	8,3+	45,6
113	181+13,3	280+28,0	8,3+	50,0
15	249+16,4	340+29,1	8,3+	76,9
37	318+13,6	180+12,0	8,3+	25,9
41	222+10,1	288+21,0	8,3+	80,0
25	183+12,0	198+16,5	8,3+	50,0
19	150+0,80	381+16,0	8,3+	32,4
123	351+43,6	234+22,1	8,3+	13,1

По результатам оценки оплодотворяющей способности спермы после ее замораживания-оттаивания хряков-производителей разбили на две группы. В первую группу вошли животные с низкой оплодотворяющей способности (28%), во вторую - с высокой оплодотворяющей способности (80%). Статистические подсчеты показали, что различие между средними значениями оплодотворяющей способности этих групп достоверны. У оцениваемых хряков-производителей активность, объем и концентрация свежеполученного эякулята, будучи в пределах зоотехнической нормы и требованию «Инструкции по искусственному осеменению свиней», не имели достоверной корреляционной связи с оплодотворяющей способностью замороженно-оттаянной спермы. Только активность сперматозоидов имела небольшую достоверную связь с оплодотворяемостью. Следователно, отбор животных по основным зоотехническим показателям является малоэффективным при криоконсервации спермы хряков. Оценка активности фермента лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в сперматозоидах и плазме свежеполученной спермы показала, что нет разницы по содержанию ЛДГ в сперматозоидах из эякулятов с высокой и низкой сохранностью оплодотворяющей способности.

Следует отметить только отдельно взятый показатель активности лактатдегидрогеназы в плазме не может быть надежным критерием для оценки криоустойчивости спермы, поскольку величина разницы активности фермента между группами с высокой и низкой оплодотворяющей способностью хотя и достоверна, но очень низкий.

Таблица 33- Активность лактатдегидрогеназы в свежеполученной сперме хряков с различной оплодотворяющей способностью после криоконсервации

№ группы	Оплодотвор- яющая способность сперматозоидов	Число эякулятов	Активность ЛДГ в мкМ пирувата
на 109 клеток	на 1 мл плазмы
I	26,6+2,67	24	12,3+0,92	17,2+0,67
II	80,3+4,84	12	11,2+0,87	13,9+0,78
P	<0,01		>0,05	<0,05

В то же время в плазме свежеполученной спермы содержание лактатдегидрогеназы достоверно различается (табл. 33).

При оценке активности лактатдегидрогеназы в отдельных эякулятах хряков, из-за дивидуальных, различий сперма с низкой криоустойчивостью может оказаться в группе с высокой криоустойчивостью сперматозоидов и наоборот (табл. 34).

Таблица 34- Активность лактатдегидрогеназы в свежеполученной сперме хряков-производителей

№ хряка	Активность ЛДГ в мкМ пировиноградной кислоты	Содержание SН-групп на 10 млрд клеток	Оплодотворяющая способность, %
на 109 клеток	на 1 мл плазмы
117	10,6+0,9	14,9+1,10	11,1±0,54	33,3
291	12,4+0,8	14,9+1,10	10,2±0,32	48,9
319	11,8+1,2	14,9+1,10	9,6±0,58	45,6
113	14,2+1,1	14,9+1,10	12,8±0,78	50,0
15	13,2+1,2	14,9+1,10	10,9±0,67	76,9
37	12,8+0,9	14,9+1,10	10,5±0,56	25,9
41	10,6+1,0	14,9+1,10	11,7±0,36	80,0
25	11,5+0,9	14,9+1,10	10,1±0,61	50,0
19	12,6+1,2	14,9+1,10	9,7±0,46	32,4
123	12,4+0,9	14,9+1,10	11,3±0,58	13,1

Исследования (табл.35) переживаемости свежеполученной спермы при 37°С и ее устойчивости к замораживанию не выявило взаимозависимой связи между этими показателями. Достоверной разницы по времени переживания сперматозоидов в группе животных с высокой и низкой оплодотворяющей способностью не имеется. Однако скорость дыхания (Vэ) спермы с низкой устойчивостью к замораживанию (I группа) выше чем у сперматозоидов с высокой устойчивостью (II группа). Коэффициент корреляции - r= -55, P<0,05.

Наличие отрицательной связи между скоростью дыхания и устойчивостью спермы к замораживанию-оттаиванию дает основания предполагать о том, что сперматозоиды с высокой скоростью окислительных процессов менее устойчивы к охлаждению и замораживанию-оттаиванию, так как они менее лабильны к переходу к состоянию гипобиоза - необходимого условия перед замораживанием. Но использование данного теста для оценки криорезистентности спермы и отбора животных приемлем только при предварительном “грубом“ отборе животных и только в группах определенной породы, поскольку сперма животных обладает не только индивидуальной, но и породной изменчивостью интенсивности дыхания.