Разработка эффективных компонентов среды для криоконсервации спермы хряков (стр. 18 )

При анализе спермопродукции хряков датской селекции установлено, что у хряков пород дюрок и ГД объем эякулята меньше средних в сравнении с литературными данными. Однако подвижность сперматозоидов у хряков гемпшир+дюрок (ГД) близка к норме. При объеме эякулята 168,75 и содержании в нем поступательно-подвижных сперматозоидов 50,83 млрд активность сперматозоидов составляла 7,2 балла. Самые низкие показатели активности у хряков породы ландрас - 4,9 баллов. Объем эякулята в пределах физиологической нормы имели хряки пород ландрас и йокширская. По концентрации сперматозоидов лучшие показатели имели хряки породы ландрас, при этом и объем эякулята был на уровне среднего.

При проведении анализа качества спермопродукции нам удалось установить, что у всех хряков концентрация сперматозоидов была выше средних показателей, полученных другими исследователями. Высокая концентрация сперматозоидов в эякуляте исследуемых хряков обусловлена способом получения спермы – мануальным (первая фракция и часть третьей для оценки и разбавления не использовалась). Известно, что третья фракция составляет 51% жидкой части эякулята (без секрета Куперовых желез), т. е. имеет наибольший объем и относительно небольшую концентрацию сперматозоидов.

Таблица 25- Показатели качества спермы хряков разных пород

Показатель	Порода
Ландрас	Йокширская	Дюрок	ГД
Число животных, гол	3	4	8	3
Число взятых эякулятов	107	122	256	78
Подвижность сперматозоидов, балл	4,92±0,46*	6,12±0,39	5,56±0,24*	7,24±0,23*
Объем эякулята, мл	291,05±0,58*	271,97±32,21*	148,63±13,847*	168,75±53,79
Концентрация сперматозоидов, млрд/мл	465,67±62,2	306,12±61,54	370,95±45,25	358,25±59,33
Общее количество сперматозоидов в эякуляте, млрд.	94,86	83,26	54,91	50,83
Примечание р< 0,05

Вероятно, на низкие показатели подвижности сперматозоидов повлияла именно высокая концентрация сперматозоидов в эякуляте, т. к. самые высокие показатели концентрации сперматозоидов и общее количество сперматозоидов в эякуляте имели хряки породы ландрас и дюрок, при этом у них же самые низкие показатели подвижности.

Для осеменения свиноматок применялась сперма с активностью не ниже 6 баллов. Сперма с активностью ниже 6 баллов выбраковывалась. Однако при более детальном исследовании показателей спермы оказалось, что сперма с хорошей подвижностью имеет значительное количество патологических форм сперматозоидов, которые, естественно, снижают ее оплодотворяющую способность.

Таблица 26- Морфологические и физиологические показатели спермы хряков

Изучаемые показатели	Средние показатели	Лимиты
Подвижность, балл	7,5±11	7-8
Сперматозоиды без патологий, %	64,4 ±8,0	71-85
Сперматозоиды с поврежденной акросомой, %	35,6 ± 1,3	26-45

В девяностые годы активно разрабатывался метод криоконсервации спермы, основанный на диализе [102]. Авторами были разработаны различные диализные камеры и среды, предназначенные для использования подготовки спермы хряков к процессу криоконсервации. Однако из-за трудоемкости процесса и нестабильности результатов криоконсервация спермы хряков не получила широкого распространения. Однако сохранение спермы хряков при комнатной температуре на свиноводческих комплексов по-прежнему актуально.

Нами проведена сравнительная характеристика спермы сохраняемой при комнатной температуре с использованием диализной камеры и диализной среды (ГХЦЖК) на переживаемость спермы хряков. Исследовалась сперма 2 хряков (нечетная садка использовалась в контроле, а четная – в опыте).

Таблица 27- Сравнительная характеристика спермы сохраняемой при температуре 16 ºС и с использованием метода диализа

Показатель	группа
контроль	опыт
Число животных, гол	2	2
Число взятых эякулятов	10	10
Подвижность сперматозоидов, балл	5,4±1,28	6,6±1,28
Объем эякулята, мл	282,5±15,81	287,2±17,98
Концентрация сперматозоидов, млрд/мл	386,8±16,2	389,3±13,31

Как видно из таблицы 27 активность сперматозоидов в опыте к контролю была выше на 1,2 балла. Однако более детальное исследование спермы показало (таблица 28), что сперматозоиды, сохраняемы при температуре +14+16 ºС имели меньше повреждений акросом – на 16,85%.

Таблица 28- Морфологические показатели спермы хряков

Изучаемые показатели	Контроль	Опыт
Сперматозоиды без патологий, %	76,95 ±6,41	93,8±4,26
Сперматозоиды с поврежденной акросомой, %	23,05 ± 1,23	6,2 ± 1,14

Таким образом, при анализе спермопродукции хряков датской селекции, получаемой мануальным способом, выявлено достоверное отклонение от нормы по показателям объема, концентрации и подвижности сперматозоидов. Отмечено значительное количество сперматозоидов (35,6%) с поврежденной акросомой. Использование диализной камеры при хранении спермы хряков при температуре 14-16 ºС в течение суток позволяет сохранить активность на 1,2 балла выше в сравнении с неразбавленной спермой, и меньший процент поврежденных акросом (разница составляет 16,85%).

При отборе хряков-производителей наряду с их продуктивно-племенными качествами следует обращать внимание на качество спермы, ее количество и способность к оплодотворению после длительного хранения (криоконсервации).

3.2.2 Разработка методики отбора спермы хряков для криоконсервации

Разработка методов долговременного хранения спермы хряков путем криоконсервации при сверхнизких температурах позволяет проводить углубленную племенную работу на основе создания банков спермы наиболее ценных хряков-производителей генофондных хранилищ спермы хряков исчезающих пород.

У хряков по сравнению с самцами других животных сильнее развиты придаточные половые железы, которые в момент эякуляции выделяют большое количество различного состава секретов, потому по объему хряк превосходит все другие виды сельскохозяйственных животных. Так в среднем объем эякулята составляет 250-320 мл, в отдельных случаях достигает 800-1000 мл и более.

Большой объем эякулята хряка осложняет технологию криоконсервации спермы и снижает экономическую эффективность метода, так как требуются большие затраты труда, много хладоагента, химических реагентов для среды и т. п.

Нестабильность результатов осеменении свиноматок кроиконсервированной спермой, отмечаемая многими исследователями ([199]; [205]; [210]; [211]; [220]) обусловлена значительной индивидуальной, породной, возрастной, сезонной изменчивостью устойчивости спермы к воздействию низких температур. Показатель жизнеспособности оттаянной спермы быков – подвижность и живучесть – имеют положительную корреляцию с оплодотворяющей способностью, но эти показатели оказались не приемлемы для оценки спермы хряков. Такое несоответствие связано с тем, что подвижность и выживаемость сперматозоидов характеризуют состояние энергетического и двигательного аппаратов и не отражают состояние ядра и акросомы, определяющих их оплодотворяющую способность и эмбриональное развитие зародыша.

Наши исследования показали, что акросома хряка в связи с высокой обводненностью быстрее и значительнее, чем у быков, подвергается криогенным повреждениям. Поэтому показатели подвижности и живучести после оттаивания можно использовать лишь для предварительной оценки новых технологических вариантов криоконсервации, окончательным же критерием необходимо считать оплодотворяемость и опоросы свиноматок.

Нами изучены связи основных показателей спермы хряков после воздействия холодового удара с оплодотворяющей способностью заморожено-оттаянной спермы. Во время эксперимента для нанесения холодового удара в ледяную баню помещали для предварительного охлаждения пенициллиновые флаконы, которые затем вносили по 5 мл спермы с температурой 32-37 0С и выдерживали в течение 10 минут. После этого сперму нагревали до исходной температуры и по существующим правилам оценивали эякуляты (табл.29).

Анализ таблицы 29 показывают, что подвижность и время выживания заморожено-оттаянной спермы хряков имеют положительную связь с оплодотворяющей способностью оттаянной спермы (r = 0,45, r = 0,48). Поэтому оценки заморожено-оттаянной спермы хряков и прогнозирования ее оплодотворяющую способность, в определенной степени можно вести по этим тестам.

Таблица 29- Связь между показателями спермы, подвергнутой холодовому удару и ее оплодотворяющей способностью после криоконсервации

Показатели	Оплодотворяющая способность сперматоизоидов после оттаивания, %	Коэффициент корреляции, (r)
менее 50% (39,1±2,9)	более 50% (73,5±5,6)
Подвижность, баллов	2,59±0,11	3,12±0,21	0,31
Время выживания, ч	4,3±0,13	5,74±0,17	0,62
Время редукции метиленовой сини, мин	23,6±4,28	15,92±4,63	-0,59
Поврежденные акросомы, %	46,7±5,9	15,6±1,42	-0,88

В результате исследований, как показано в таблице 30, установлены пределы показателей для отбора эякулятов на криоконсервацию заморожено-оттаянной спермы хряков – на осеменение свиноматок).